從植物組織中提取RNA 是進行植物分子生物學方面研究的必要前提。要進行Northern雜交分析,純化mRNA 以用于體外翻譯或建立cDNA文庫,RT-PCR及差示分析等分子生物學研究,都需要高質量的RNA 。因此,從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA 是順利進行上述研究的關鍵所在。從文獻報道上看,有許多植物就是由于未能有效地分離純化其組織中的RNA ,而阻礙了其分子生物學方面研究的進展。一般認為在這些植物組織中,或富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級代謝產物,或RNase的活性較高。在完整的細胞內這些物質在空間上與核酸是分離的,但當組織被研磨,細胞破碎后,這些物質就會與RNA 相互作用。酚類化合物被氧化后會與RNA 不可逆地結合,導致RNA 活性喪失及在用苯酚、氯仿抽提時RNA 的丟失,或形成不溶性復合物;而多糖會形成難溶的膠狀物,與RNA 共沉淀下來;萜類化合物和RNase會分別造成RNA 的化學降解和酶......閱讀全文
實驗概要由于RNA分子的結構特點,容易受RNA酶的攻擊反應而降解,加上RNA酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA酶,人的皮膚、手指、試劑、容器等均可能被污染,因此全部實驗過程中均需戴手套操作并經常更換(使用一
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織,這樣RNA提取的效果比較好,這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的(最好在半年之內,-80℃或者液氮中凍存的)組織,注意不要反復凍融,從冰凍狀態拿到0-4℃,注意不要拿到常溫,待組織解凍后,用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織,稱重后,放到預冷的勻漿器中,然后
一、材料 水稻葉片或小鼠肝組織。 二、設備 研缽,冷凍臺式高速離心機,低溫冰箱,冷凍真空干燥器,紫外檢測儀,電泳儀,電泳槽。 三、試劑 1、無RNA酶滅菌水:用將高溫烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小時)裝蒸餾水,然后加入0.01%的DEPC(體積/
一、原理RNA包括rRNA、tRNA和mRNA等,大部分通常是以核蛋白復合物的形式存在的。通過SDS、苯酚處理使蛋白質變性并沉淀。利用LiCl溶解雙鏈DNA的特性去除DNA,經乙醇沉淀得到總RNA。純度高、完整性好的RNA,即可用于Northern雜交、純化mRNA、cDNA合成和體外翻譯等進一步的
實驗方法原理 硫氰酸胍能溶解細胞并使蛋白變性. 當用于抽提緩沖液時,可產生無 RNase 的環境□組織抽提后,以中等轉速離心勻漿液,以除去小溶性多搪。用苯酚:氯仿將上清液抽提出,RNA 位于水相,DNA 和蛋白質位于苯酚相和兩相交界面。用乙酸鉀將位于水相的多糖選擇件的沉淀出來,然后用氯化鋰選
實驗方法原理 硫氰酸胍能溶解細胞并使蛋白變性. 當用于抽提緩沖液時,可產生無 RNase 的環境□組織抽提后,以中等轉速離心勻漿液,以除去小溶性多搪。用苯酚:氯仿將上清液抽提出,
一、原理 脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)是一切生物細胞的重要組成成分,主要存在于細胞核中,鹽溶法是提取DNA的常規技術之一。從細胞中分離得到的DNA是與蛋白質結合的DNA,其中還含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地將這兩種核蛋白分開是技術的關鍵。D
提到RNA的提取,是不是充滿了心酸和無奈呀,抽提過程中已十分小心謹慎了,但是有時候還是會出現RNA污染、降解的悲劇。別怕,今天小編給您介紹一種新的RNA提取方法,比以前的方法更快、更有效和更可靠,讓您從此不用再擔心的RNA的抽提了。 眾所周知:獲得純凈、完整的RNA樣品,是對一種植物的活性基因
實驗方法原理 獨特的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶,植物RNA助提劑PLANTaid幫助結合多糖多酚并通過離心去除,然后用乙醇調節結合條件后,RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物,蛋白等雜質去除,
直接研磨法 液氮研磨法 實驗方法原理 通過裂解液β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞RNA