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試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑 酶和酶緩沖液 核酸和寡核苷酸 放射性化合物 酚 儀器、耗材 熱循環儀 水浴箱 瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑與設備 實驗步驟 第1階段：RNA和DNA的分離一次雙向消減，需要總量為2ug的基因組DNA或cDNA。大多數分離RNA和基因組DNA的方法都適用于本實驗（Sambrooketal.1989；Chomczynskiand Sacchi 1987；Farrell199......閱讀全文
實驗步驟 ##一、 cDNA 宏陣列的樣品制備培養基： I : 2 (V7 V ) Gamborg B5 培 養 基（GibcoBRL， Rockville, MD), I : 1000(V /V ) Hyponex肥 料（Hypon
階段 5:SepharseCL-4B 凝膠過濾法分離 cDNA材料緩沖液和溶液乙醇乙酸鈉（3 ml/L,pH5.2)TE(pH7.6)含 0.1mol/LNaCl 的 TE(pH7.6)Tris-HCl(1mol/L,pH8.0)凝膠瓊脂糖凝膠（1%)見步驟 8。核酸和寡核苷酸cDNA階段 4 中步
實驗材料:小麥 試劑、試劑盒:β-巰基乙醇 &nb
差減cDNA文庫法[第一條鏈cDNA合成]1．合成第一條cDNA鏈時，所有試劑應按下列順序依次加入：10×第一條鏈合成緩沖液 &nbs
實驗四 逆轉錄PCR (RT-PCR )【實驗目的】1．了解用逆轉錄PCR 法獲取目的基因的原理。2．學習和掌握逆轉錄PCR 的技術和方法。【實驗原理】聚合酶鏈式反應（PCR）過程利用模板變性，引物退火和引物延伸的多個循環來擴增DNA序列。因為上一輪的擴增產物
D D 由 Liang和 Pardee在 1992年首次提出。至今有大約1700篇 與 DD相關的文章發表，可見其影響巨大。許多與神經變性和凋亡相關的基因也通過DD 的方法得以鑒定。 .DD的原理基于對cDNA分子進行隨機擴增和隨后按大小進行的分離。
Differential cDNA Screening ProceduresThe protocols listed refer to cDNA library construction and preliminary differential screening procedures. They
11.用 mRNA 純 化 試 劑 盒（Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) 將 Poly.(A )+ RNA從總R N A 中分離出來（見注釋5)。####（2） c D N A 文 庫 的 構 建1.取1. 5 ?7. 5 μg poly (A )<
7. 盡可能快地進行 cDNA 合成的下一步驟階段 2:cDNA 第二鏈的合成材料緩沖液和溶液將貯存液稀釋到合適濃度。氯仿EDTA(0.5mol/LpH8.0)乙醇MgCl2(1mol/L)(NH4)2SO4(1mol/L)將 1.3 g 固體硫酸銨溶解于終體積為 10 ml 的水中，溶液經濾膜過濾
真核生物中，從個體的生長、發育、衰老、死亡，到組織的得化、調亡以及細胞對各種生物、理化因子的應答，本質上都涉及基因的選擇性表達。高等生物大約有30000個不同的基因，但在生物體內任意8細胞中只有10%的基因的以表達，而這些基因的表達按特定的時間和空間順序有序地進行著，這種表達的方式即為基因的差異表達
實驗材料 無菌玻璃器皿 無菌 Eppendorf試 管 Eppendorf槍頭 無菌 falcon離心管
一、RACE 的簡介 目前,全長基因的獲得是生物工程及分子生物學研究的一個重點。盡管已經有多種方法可以獲得基因的全長序列，但在很多生物研究中，由于所研究的目的基因豐度較低，從而使得由低豐度mRNA通過轉錄獲得全長cDNA很困難。近年來發展成熟的cDNA末端快速擴增(RACE)技術為從低豐度轉錄快速
第二軍醫大學細胞生物學教研室；上海200433 何志穎；姚玉成（綜述）；胡以平（審校）關鍵詞：EST技術；“電子”基因克隆；生物信息學；基因摘要： 隨著人類基因組計劃的順利進行，EST技術被廣泛應用于基因識別、繪制基因表達圖譜、尋找新基因等研究領域。利用人類基因組研究不斷產生的數據，從ES
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
DNA重組技術（或基因工程）是20世紀生物學的偉大成就，并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域，為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用，著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
表達譜基因芯片可應用于：（1）疾病診斷；（2）新藥開發；（3）環境保護。實驗方法原理按照預定位置固定在固相載體上很小面積內的千萬個核酸分子所組成的微點陣陣列。在一定條件下，載體上的核酸分子可以與來自樣品的序列互補的核酸片段雜交。如果把樣品中的核酸片段進行標記，在專用的芯片閱讀儀上就可以檢測到雜交信號
當前，人類基因組研究的重心正在由“結構”向“功能”轉移，一個以基因組功能研究為主要內容的所謂“后基因組時代”(post-genomics)，也即功能基因組(functional genomics)時代，即將到來。如何獲取基因的功能信息，即與人類重大疾病和重要生理功能相關的基因信息，就擺在了我們面前。
構建全長cDNA文庫分為噬菌體文庫和質粒文庫，二者大同小異。無論怎樣，應當注意如下幾個方面： 一、保證獲得數量足夠的高質量的起始RNA。構建cDNA文庫要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多，在材料允許的情況下一般的試劑盒均推薦采用純化總mRNA后進行反轉錄，這比直接
cDNA LibrariesIsolation of corresponding genetic informationInstead of synthesizing a desired gene, can we used the amino acid information to directly
實驗步驟 一、材料 這里用到的所有化學試劑都為分子生物學等級，或者用它們最高純度的等效物。所有的塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸頭都要高壓滅菌，在核酸實驗操作過程中必須始終戴手套。 cDNA A T L A S陣列從Clo
4、cDNA文庫的大小 一個cDNA文庫要包含99%的mRNA時所需要的克隆數目。 p: 文庫包含了完整mRNA的概率（99%） 1/n: 某一種低豐度（不足14份拷貝）mRNA占細胞整個mRNA的比例 N：所需的重組載體數（克隆數） (三)基因組文庫與c
近幾年來， DNA 微陣列已經被公認是分子生物學研究的一種標準方法。特別是在生物醫學研究方面，常用物種的微陣列一面世就得到廣泛應用。但是對于非模式生物來說 ，微陣列的應用尚未得到充分開展，而這些物種往往表現出一些很有趣的生理表型。對大多數比較生物學的研究者來說，制備一個新物種的 D N A 陣列或微
· cDNA Synthesis (Crawford Lab)mRNA can be converted into DNA (copy DNA, cDNA) by annealing
第一鏈cDNA合成的起始可以使用三種不同的方法，各種方法的相對特異性影響了所合成cDNA的量和種類。 隨機引物法是三種方法中特異性最低的。引物在整個轉錄本的多個位點退火，產生短的，部分長度的cDNA。這種方法經常用于獲取5'末端序列
在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的 mRNA 5' 末端的序列特征結構的 cDNA 克隆更易失敗的了。通常存在于 cDNA 基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一條鏈往往 5' 末端不完整。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂
劉芝華 中國醫學科學院腫瘤研究所 分子腫瘤學國家重點實驗室 概念： 基因組文庫是含有某種生物體全部基因的隨機片段的重組DNA克隆群體；cDNA文庫是指含有所有重組cDNA的克隆群體。 基因組文庫：來源于基因組DNA，反映基因
脊索瘤相關基因鑒定及篩查實驗，用于（1）脊索瘤分子機制（2）基因診斷（3）基因治療。實驗方法原理真核生物的mRNA 5’端有個帽子結構，3‘端有長約200 bp 的poly(A)尾巴。據此特點，可設計一種與其互補的序列oligo dT，為了把它錨定在poly（A）尾的起始端，將其設計成T12MN（M
mRNA差異顯示法 實驗方法原理 真核生物的mRNA 5’端有個帽子結構，3‘端有長約200 bp
一．原理應用定量PCR技術，用一種標準作對照能夠估計出一種特異性靶DNA或RNA分子的相對含量。參照物：在定量 PCR 中必須加入參照物，用來作為擴增系統的陽性對照，并作為未知樣本定量的標準，且通過競爭性作用校正擴增系統內管間的擴增效率，使其具有可比性。參照物按其性質不同可分為內參照和外參照。內參照
在用 oligo (dT) 引物構建的 cDNA 文庫中，偶而發生部分 cDNA 克隆缺失了與靶 mRNA 3' 末端互補的序列。這部分序列到底是在 cDNA 合成過程中還是在分子克隆中怎樣缺失和在哪個環節中缺失的尚不清楚。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在用 o