通過自殺質粒同源重組構建細菌突變株
自殺性質粒載體：一般用于基因突變。將突變的目的基因克隆到自殺性質粒載體上，通過接合等使其進入宿主，由于在宿主菌中不存在復制基因啟始所需的復制蛋白（如Pi蛋白等），其無法復制，在外界選擇性壓力的作用下,自殺性質粒載體所攜帶的突變基因就與宿主染色體上的野生型發生基因發生二次同源重組，產生了帶有突變的突變株；而質粒載體自身由于自殺性特性連同染色體上原有的野生型基因一起隨著細菌的傳代從菌體內消失。至于一次重組的突變株，可借助質粒上的某些選擇基因（如sacB，sucrose敏感）篩除。整合載體：將目的基因克隆于質粒載體上，進而整合到宿主染色體，是克服質粒不穩定性的一個有效途徑。一、關于載體自殺性質粒載體完全可與自己構建，只要保證兩點：（一）自殺性質粒載體不能在你的宿主菌里進行復制，也就是說載體上不能有能在宿主菌中復制的復制子。自殺性質粒載體不能在你的宿主菌里進行復制，否則會導致細菌染色體突變株的構建失敗。但是在構建時，要注意以下方面：1、......閱讀全文
通過自殺質粒同源重組構建細菌突變株
自殺性質粒載體：一般用于基因突變。將突變的目的基因克隆到自殺性質粒載體上，通過接合等使其進入宿主，由于在宿主菌中不存在復制基因啟始所需的復制蛋白（如Pi蛋白等），其無法復制，在外界選擇性壓力的作用下,自殺性質粒載體所攜帶的突變基因就與宿主染色體上的野生型發生基因發生二次同源重組，產生了帶有突變的突變
重組質粒的構建
[實驗原理]外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中，將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA
自殺性質粒載體的構建
自殺性質粒載體完全可以自己構建，只要保證兩點：１，自殺性質粒載體不能在你的宿主菌里進行復制，也就是說載體上不能有能在宿主菌中復制的復制子；２，要由篩選標記．?自殺性質粒載體不能在你的宿主菌里進行復制，否則會導致細菌染色體突變株的構建失敗。但是在構建時，要注意以下方面：1。在制備質粒載體和DNA插入片
重組質粒的構建設計
基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遺傳物質，在體外切割，拼接和重新組合，然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞，使外源DNA 在受體細胞中進行復制和表達。按人們
重組質粒的構建設計
基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遺傳物質，在體外切割，拼接和重新組合，然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞，使外源DNA 在受體細胞中進行復制和
重組質粒的構建設計
基因工程基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遺傳物質，在體外切割，拼接和重新組合，然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞，使外源DNA 在受體細胞中進行復制和表達
SsrB對傷寒沙門菌氧應激早期基因表達的調節
【摘要】 ?目的： 研究傷寒沙門菌ssrB基因在氧應激早期對其他基因表達的調節。方法： 通過同源重組的方法利用自殺質粒制備傷寒沙門菌ssrB基因缺陷變異株;采用傷寒沙門菌全基因組芯片比較野生株和ssrB基因缺陷變異株在氧應激早期的基因表達差異，并對其中部分表達差異基因進行實時定量PCR驗證;
同源重組技術原理
同源重組技術原理：基因敲除鼠技術是上世紀80年代中后期基于DNA同源重組的原理發展起來的，Capecchi和Smithies在1987年根據同源重組（homologous recombination）的原理，首次實現了ES的外源基因的定點整合（targeted integration），這一技術稱為
關于CRISPRCAS9介導的基因編輯細胞株的一些經驗總結
最近小編在應用CRISPR/CAS9作為工具制備基因編輯細胞株，有一些階段性總結和設想，在這里貼出來，大家可以互相探討一下。首先要描述一下“基因編輯細胞株”的具體要求：（1）“基因編輯”是指在特定位點引入期望的堿基修飾。具體過程為，通過CRISPR/CAS9在待編輯位點（靶位點）附近引入基因組DNA
關于CRISPRCAS9介導的基因編輯細胞株的一些經驗總結
最近小編在應用CRISPR/CAS9作為工具制備基因編輯細胞株，有一些階段性總結和設想，在這里貼出來，大家可以互相探討一下。 首先要描述一下“基因編輯細胞株”的具體要求： （1）“基因編輯”是指在特定位點引入期望的堿基修飾。 具體過程為，通過CRISPR/CAS9在待編輯位點（
重組柔嫩艾美耳球蟲SO7－蛋白的的原核...
實驗概要用雞艾美爾球蟲的SO7基因與重組質粒pMG36t 結合，再把pMG36t-SO7導入到 E. coli χ13 體內，選擇陽性的E. coli χ13( pMG36t-SO7 )即： E. coli χ2，然后用它去免疫，分析免疫效果。實驗原理通過原核表達系統大腸桿菌來表達柔嫩艾美耳球蟲的一
蛋白的的原核表達及其對同源性感染的免疫保護性研究
實驗概要用雞艾美爾球蟲的SO7基因與重組質粒pMG36t 結合，再把pMG36t-SO7導入到 E. coli χ13 體內，選擇陽性的E. coli χ13( pMG36t-SO7 )即： E. coli χ2，然后用它去免疫，分析免疫效果。實驗原理通過原核表達系統大腸桿菌來表達柔嫩艾美耳球蟲的一
非同源重組的概念
非同源重組指的是發生在不含同源序列的DNA序列間的重組。這可能導致染色體易位，有時會導致癌癥。
同源重組法技術介紹
同源重組法：同源重組（homologous recombination）是將外源基因定位導入受體細胞的染色體上，在該座位因有同源序列，通過單一或雙交換，新基因片段替換有缺陷的片段，達到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁組裝一Neo基因，則在同源重組后，因有Neo基因，可在含有新霉素（neomyci
醫學資料筆記2－基因的轉移和重組
細菌間基因的轉移與重組是發生遺傳性變異的重要原因之一。DNA可以從一種生物轉移至另一生物，整合至染色體，改變其遺傳信息的組成，這類基因轉移的方式稱之為基因水平轉移。這類遺傳物質的交流可發生在親緣、遠緣，甚至無親緣關系的生物之間。根據DNA片段的來源及交換方式等不同，將基因轉移和重組分為轉化、轉導
關于同源重組的基本介紹
同源重組（ homologous recombination）是指發生在兩段同源序列之間的DNA片段交換。兩段同源序列既可以完全相同，也可以存在差異，既可以位于兩個DNA分子上，也可以位于一個DNA分子中。真核生物的同源染色體交換及姐妹染色單體交換、細菌的轉導和轉化、噬菌體的重組都屬于同源重組。
同源重組的概念和過程
同源重組(Homologous Recombination) 是指發生在非姐妹染色單體(non-sister chromatid) 之間或同一染色體上含有同源序列的DNA分子之間或分子之內的重新組合。同源重組需要一系列的蛋白質催化,如原核生物細胞內的RecA、RecBCD、RecF、RecO、Rec
同源重組的原理是什么？
同源重組（Homologous Recombination) 是指發生在非姐妹染色單體（sister chromatid) 之間或同一染色體上含有同源序列的DNA分子之間或分子之內的重新組合。同源重組需要一系列的蛋白質催化，如原核生物細胞內的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等
微生物所開發出梭菌基因刪除新策略
梭菌(Clostridium)是一類與人類關系非常密切的細菌。其中既有許多致病菌，如產生外毒素的破傷風梭菌和肉毒梭菌等；也有一些具有重要工業應用價值或潛力的梭菌，如丙酮丁醇梭菌和熱纖梭菌等。 基因失活或基因刪除是細菌功能基因組學研究的基本手段。近年來，基于乳酸乳球菌II型內含子剪切機制開發
穩定細胞株構建
穩轉細胞系（穩定表達細胞株）指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩定表達該基因。穩轉細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細
Gateway的原理
Gateway也可以被視為一種克隆操作平臺：把目的基因克隆到入門載體（Entry Vector）后，就不用依賴限制性內切酶，而靠載體上存在的特定重組位點和重組酶，高效、快速地將目的基因克隆到其它的受體載體（Destination Vector，目的載體）上。Gateway的原理也是建立在噬菌體DNA
同源異形突變的定義
中文名稱同源異形突變英文名稱homeotic mutation定 義同源框基因發生的突變。突變可使身體的一部分結構生長在異常的位置上。
重組腺病毒構建，擴增及純化基本技術操作（細菌內...
重組腺病毒構建，擴增及純化基本技術操作（細菌內同源重組AdEasySystem）實驗材料 腺病毒試劑、試劑盒 PmeI酶瓊脂糖LB培養基甘油液氮SOC卡那霉素PacI酶Lipofectamine無血清培養基DMEM完全培養基PBSCsCl病毒裂解上清液礦物油儀器、耗材 恒溫搖床分光光度計恒溫水浴鍋E
變異在醫學中的實際應
? 細菌變異的理論知識與技術在醫學微生物學、臨床醫學及預防醫學等方面已被廣泛應用。近幾十多年來，由分子遺傳學發展起來的遺傳工程更為人類控制遺傳特征，改造現有生物品系，生產新的生物制品開辟了前景。 一、在細菌分類上的應用 過去依靠細菌的形態、生化反應、抗原特異性、以及噬菌體分型等進行了細菌的分類。
Bdf1通過與RPA促進同源重組修復原理揭曉
表觀遺傳調控DNA同源重組機制獲揭示 Bdf1偶聯H4乙酰化修飾和DNA重組修復過程 武漢大學供圖 近日，《尖端科學》在線發表了武漢大學生命科學學院遺傳學系、細胞穩態湖北省重點實驗室教授陳學峰課題組的最新研究成果。該研究揭示了酵母溴結構域家族蛋白Bdf1及其人類同源蛋白TAF1在促進DNA
－Cell子刊突破：無需克隆的CRISPR新技術
來自荷蘭Hubrecht研究所和烏特勒支醫學中心（UMC Utrecht）、麻省理工學院的研究人員稱，他們開發出了一種自身克隆CRISPR/Cas9(scCRISPR)技術，可以繞開基因編輯過程中所有的克隆步驟，在數小時內完成CRISPR/Cas9介導基因突變及位點特異性轉基因敲入。他們的研究成
關于M13噬菌體的宿主菌的介紹
由于 M13 噬菌體通過 F 質粒編碼的性纖毛進入宿主細胞內，故只能用雄性細菌來增殖病毒。 Messing 及其同事已經構建了許多攜帶 F' 質粒并便于 M13 載體進行基因操作的多種大腸桿菌菌株，其中最重要的遺傳標志有： （1） lacZ D Ml5 lacZ 基因缺失突變體。 （
DNA－同源重組的關鍵分子機制
蛋白質與植物基因研究國家重點實驗室研究團隊揭示 DNA 同源重組的關鍵分子機制 作為三大DNA代謝途徑（DNA 復制、重組、損傷修復）之一，DNA同源重組（Homologous Recombination）是生命體的基本生物事件。它在細胞生長、減數分裂、配子形成、物種進化、DNA雙鏈斷裂修復、
關于同源重組的Holliday模型介紹
Holliday于1964年提m Holliday模型，將同源重組分為四個階段。 1．同源序列配對。 2．形成Holliday結構，即兩段同源序列的單股同源DNA的同一磷酸二酯鍵被水解，同源末端交換，連接，形成Holliday結構（HoIJiday structure，又稱Holliday連
廣州生物院在熱帶爪蛙中建立了高效基因敲除技術
中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院陳永龍博士的研究團隊成功利用CRISPR/Cas9系統在熱帶爪蛙中獲得了高效的靶向基因破壞，該研究成果Efficient RNA/Cas9-mediated genome editing in Xenopus tropicalis 于1月8日在線發表在D