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一、目的與意義 學習使用大腸桿菌感受態細胞導入外源DNA，使學生掌握DNA分子進入細胞的原理和實驗操作技術; 掌握PCR法快速鑒定重組載體的基本操作。 二、實驗原理 轉化是指將質粒DNA或構建的重組子導入細胞的過程。細菌細胞在低溫，低滲（CaCl2溶液）中膨脹成球形。轉化混合物中的DNA形成了抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附于細胞表面。經42℃短時間熱激處理后，促進了細胞吸收DNA復合物。重組質粒轉化宿主細胞后，還需要對轉化菌落進行篩選鑒定，通過α互補進行篩選是最常用的鑒定方法之一。 目前實驗使用的許多載體都具有一段大腸桿菌β-半乳糖苷酶的啟動子及其編碼α肽鏈的DNA序列，此結構稱為lacZ基因。lacZ 基因編碼的α肽鏈與失去正常氨基末端的β半乳糖苷酶突變體互補，產生具有功能活性的β半乳糖苷酶......閱讀全文
二、目的基因和載體的連接獲得目的基因后必須將其放在一定的載體內才能在宿主細胞內擴增或表達。目的基因與載體的連接及其后續的轉化過程習慣上稱為克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技術獲得，因此這里先介紹PCR產物的克隆策略，然后再介紹其他的克隆方式。（一）PCR產物的克隆策略獲得PCR
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
DNA的克隆是指在體外將含有目的基因或其它有意義的DNA片段同能夠自我復制的載體DNA連接，然后將其轉入宿主細胞或受體生物進行表達或進一步研究的分子操作的過程，因此DNA克隆又稱分子克隆，基因操作或重組DNA技術。DNA克隆涉及一系列的分子生物學技術，如目的DNA片段的獲得、載體的選擇、各種工具酶的
第七節 實驗動物的處死當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。一、蛙 類常用金屬探針插入枕骨大孔,破壞腦脊髓的
（3）插入表達篩選法與插入失活相反，插入表達法是外源目的基因插入特定載體后，能激活用于篩選操作的標記基因的表達，由此進行轉化子的篩選。設計載體時，在篩選標記基因前面連接一段具有抑制作用的負調控序列，插入外源DNA將使該負調控序列失活，其下游的篩選標記基因才能表達。例如質粒pTR262有一個負調控的c
目前已有許多新生物學技術應用于免疫學研究，促進了免疫學的發展，豐富了免疫學檢測的內容，使免疫學研究與相關疾病的診斷建立在基因水平，提高了檢測的敏感性和可靠性。 一、分子雜交技術 分子雜交的基本原理是根據雙鏈DNA經高溫解鏈成兩條互補的單鏈，降溫后又可恢復原來的雙鏈。兩條不同的單鏈分子可根據堿基配
隨著DNA合成技術的發展，特別是自動化合成技術的引入，人們能簡便、快速、高效地合成其感興趣的DNA片段。目前，DNA合成技術已成為分子生物學研究必不可少的手段，并且已在基因工程、臨床診斷和治療、法醫學等各個領域中日益發揮重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物學研究中的應用
隨著DNA合成技術的發展，特別是自動化合成技術的引入，人們能簡便、快速、高效地合成其感興趣的DNA片段。目前，DNA合成技術已成為分子生物學研究必不可少的手段，并且已在基因工程、臨床診斷和治療、法醫學等各個領域中日益發揮重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物學研究中的應用
隨著DNA合成技術的發展，特別是自動化合成技術的引入，人們能簡便、快速、高效地合成其感興趣的DNA片段。目前，DNA合成技術已成為分子生物學研究必不可少的手段，并且已在基因工程、臨床診斷和治療、法醫學等各個領域中日益發揮重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物學研究中的應用1.1合成基因目
隨著DNA合成技術的發展，特別是自動化合成技術的引入，人們能簡便、快速、高效地合成其感興趣的DN**段。目前，DNA合成技術已成為分子生物學研究必不可少的手段，并且已在基因工程、臨床診斷和治療、法醫學等各個領域中日益發揮重要的作用。 1. DNA合成在
將克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養的材料不及哺乳動物細胞系統的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具各種特性的質粒可供選擇。但是，
基因重組—層析法 實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPT
蛋白質表達、分離、純化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理；（2）供作結構與功能的研究；（3）作為催化劑、營養劑等。實驗方法原理攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共
實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸（NTA）使鎳離子（Ni2+）固相化的層析介質加以提純，實為金屬熬合親和層析（MCAC）。蛋白質的純化程
實驗概要將克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養的材料不及哺乳動物細胞系統的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具各種特性的質粒可供選擇
[實驗原理] 將克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養的材料不及哺乳動物細胞系統的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具
將克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養的材料不及哺乳動物細胞系統的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之
隨著DNA合成技術的發展，特別是自動化合成技術的引入，人們能簡便、快速、高效地合成其感興趣的DNA片段。目前，DNA合成技術已成為分子生物學研究必不可少的手段，并且已在基因工程、臨床診斷和治療、法醫學等各個領域中日益發揮重要的作用。1. DNA合成在基因工程和分子生物學研究中的應用1.1