什么是PCR陰性？
舉乙肝的例子來說：通過酶免的方法查乙肝兩對半和通過熒光定量PCR的方法學查乙肝DNA小明得了肝炎，但他不知道自己得了肝炎，有一天身體不舒服或者正常體檢（比如入職體檢），他去看醫生，臨床醫生懷疑他得了肝炎（肝炎有很多種比如病毒性肝炎，也就是病毒傾入他體內后由于人體的三道防線沒能把病毒消滅掉，導致病毒在人體肝臟內長期繁殖而侵害了肝臟，病毒性肝炎分很多種比如乙肝、丙肝等，患有乙肝的話說明是乙型肝炎病毒侵入了小明的體內導致得了肝炎，有的不是病毒性肝炎比如抽煙等引起的肝炎），回到原來說的，臨床醫生懷疑小明得了肝炎后他會開一個化驗單（項目就是查乙肝5項，也就是我們通常說的兩對半）讓小明去檢驗科化驗下，這時候小明拿著化驗單去檢驗科抽血化驗，檢驗師就會用專用的采血管進行抽血，抽完血以后就會把抽好學的采血管也就是患者樣本進行檢測，最后出來結果，小明乙肝表面抗原陽性，臨床醫生看到化驗結果后就跟小明說他得了乙肝，情況嚴重的話會開藥給小明，讓小明吃一點......閱讀全文
聚合酶鏈式反應（PCR）擴增儀的分類
普通的PCR儀一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,又叫傳統的PCR儀。用途:主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進行擴增。(1)梯度PCR儀一次PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常為12種溫度梯度的普通PCR儀。用途:研究未知DNA退火溫度的擴增。(2)
聚合酶鏈式反應（PCR）引物設計軟件介紹
Primer Premier5.0 （自動搜索）vOligo6 （引物評價）vVector NTI SuitvDNAsisvOmigavDNAstarvPrimer3 （在線服務）
聚合酶鏈式反應（PCR）快速PCR技術與快速PCR儀的區別
快速PCR技術與快速PCR儀的區別。 1、模塊升溫和降溫度時間 PCR儀一般會標明升溫速度和降溫速度,但標的大多是最大變溫速度,也就是說是瞬間達到的速度。而與實驗相關的平均升降溫速度只有極少量廠家標明。以平均2度和4度(能做到平均升降溫4度的儀器極少)來計算,從95度降到55度,分別是20秒
原位聚合酶鏈式反應（in－situ－PCR）和原位反轉錄聚合酶...
原位聚合酶鏈式反應（in situ PCR）和原位反轉錄聚合酶鏈式反應原位聚合酶鏈式反應（in situ PCR）和原位反轉錄聚合酶鏈式反應（in situ RT-PCR）操作規程 （一）、儀器設備 英國Thermo Hybaid原位PCR儀。 （二）、操作流程 1、原位PCR步驟
基因的PCR擴曾反應（聚合酶鏈式反應）
實驗原理： 聚合酶鏈式反應（PCR，polymerase chain reaction）實質是體內DNA復制的體外模擬。當雙鏈DNA變性為單鏈以后，DNA聚合酶以單鏈DNA為模版，并利用反應混合物中的四種dNTP，以與模板互補的寡聚核苷酸鏈為引物，合成新的DNA互補鏈。新合
逆轉錄聚合酶鏈式反應（RTPCR）
實驗概要提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于：分析基因
聚合酶鏈式反應（PCR）的原理和具體過程
原理就是DNA半保留復制吧過程只要記住1.DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下， 氫鍵斷裂，形成單鏈DNA2.退火（25℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物
PCR（聚合酶鏈式反應）反應方法熱啟動方法
熱啟動PCR的方法是在反應溫度降至80oC時添加Taq DNA聚合酶，以保證高特異性PCR產物的合成。 1．如基本的PCR方法所述，添加所有的PCR反應的混合物，但不加Taq DNA 聚合酶。 2．將小管中的混合物混勻，并加入50 μl礦物油或硅化油覆蓋之。 3．蓋緊小管，短暫離心，以便于
PCR（聚合酶鏈式反應）反應方法注意事項
1. PCR引物設計： 引物設計可能是PCR擴增成功最關鍵的因素。如引物設計欠佳，可能導致擴增產物不足，甚至擴增失敗，其原因是設計欠佳的引物可導致非特異擴增和/或形成引物二聚體，此又成為PCR反應的競爭性產物，從而進一步抑制PCR產物形成。 在引物設計時必須考慮以下幾個因素，其中最重要的是引
PCR（聚合酶鏈式反應）的反應方法介紹基本的PCR方法
由于各種PCR反應條件(如PCR擴增次數、溫度、Taq?DNA聚合酶的濃度、引物、氯化鎂以及模板DNA)變異極大,應根據具體情況,對各種PCR反應條件進行相應調整。按以下次序,將各成分加入0.2?ml滅菌擴增管中:成分?????????????????????體積?????????????????終
聚合酶鏈式反應（PCR）PCR反應所需時間的決定因素
?在PCR儀上完成一個PCR反應所需要的時間決定于以下幾個因素:?1、模塊升溫和降溫時間?2、模塊與PCR管內溫度平衡時間?3、延伸時間?4、循環次數
DNA的化學檢測項目介紹聚合酶鏈式反應
聚合酶鏈式反應介紹： 聚合酶鏈式反應是一種在體外快速擴增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴增法。PCR技術類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。聚合酶鏈式反應正常值： 體內菌群的種類和比例正常，人體處于動態平衡健康狀態。聚合酶鏈式反應臨床意義：
PCR技術（三）：Taq－DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是從一種水生棲熱菌(Thermusaquaticus)yT1株分離提取的.yT是 一種嗜熱真菌，能在70～75℃生長.該菌是1969年從美國黃石國家森林公園火山溫泉 中分離的.(一)酶活性與熱穩定性 該酶基因全長2496個堿基，編碼832個氨基酸，酶蛋白分子為 94KDa.其比
聚合酶鏈式反應
實驗方法原理 實驗材料 熱穩定 DNA 聚合酶旁觀者 DNA正向引物反向引物模板 DNA試劑、試劑盒 擴增緩沖液氯仿dNTP 貯存液儀器、耗材 聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠屏蔽型槍頭離心管正向排液式移液器PCR儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液氯仿4 種 dNTP 貯存液（20
聚合酶鏈式反應
一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液氯仿4 種 dNTP 貯存液（20 mmol/L，pH 8.0)2. 酶與緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶3. 凝膠聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠4. 核苷酸與寡聚核苷酸旁觀者 DNA正向引物（20 μmol/L）及
聚合酶鏈式反應
實驗方法原理實驗材料熱穩定 DNA 聚合酶旁觀者 DNA正向引物反向引物模板 DNA試劑、試劑盒擴增緩沖液氯仿dNTP 貯存液儀器、耗材聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠屏蔽型槍頭離心管正向排液式移液器PCR儀實驗步驟一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液氯仿4 種 dNTP 貯存液（20 mmol/
聚合酶鏈式反應（PCR）出現假陰性的原因分析
PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及溴乙錠的使用， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。
聚合酶鏈式反應（PCR）擴增和擴增產物克隆
?PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟：(1) 變性(Denature)：目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈；(2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上的目的序列通過
原位聚合酶鏈式反應（in－situ－PCR）和原位反轉錄
一、儀器設備英國Thermo Hybaid原位PCR儀。二、操作流程（一）原位PCR步驟1、預處理： （1）切片常規脫蠟； （2）0.2mol/L HCl處理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10min； （4）Nase消化組織37℃ 30min； （5）梯度酒精脫水，
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆
概 述? PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上
聚合酶鏈式反應（PCR）－檢測肉毒梭菌技術
是運用PCR方法檢測肉毒神經毒素基因以鑒定肉毒梭菌，只需2～3天。特別是基層CDC在購買不到試驗動物的情況下，PCR所具有快速、簡便、特異型強的優點無疑可作為肉毒中毒的輔助檢測手段和一項有價值的指標。P．Fach（1993）報道，應用PCR可檢出食品樣品的肉毒梭菌A型菌株。趙晉、郭宗琪、楊小蓉等（2
聚合酶鏈式反應（PCR）最佳復性溫度的選擇標準
最佳復性溫度的選擇標準應該是可擴增范圍的中間溫度。在使用溫度梯度的方法尋找最佳復性溫度時,新手往往會選擇擴增產物最多的溫度條件,然而在此后的非梯度擴增時擴增效果又不太理想。出現這種現象的主要原因是最佳復性溫度的選擇標準不對。本人10多年前做過數千個基因的擴增,通過溫度梯度實驗發現,能擴增出來的溫度范
PCR（聚合酶鏈式反應）反應方法所需材料和試劑
【材料】 1. 試劑和溶液 （1）10 × PCR緩沖液 500 mM 氯化鉀 100 mM Tris-Cl (室溫時pH 8.3) 15 mM 氯化鎂 （2）10 mM脫氧三磷酸核苷(dNTPs) 溶液－含有所有四種dNTPs(pH 8.0) （3）耐熱的DNA 聚合酶： ①
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆
第一節 概 述?PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（四）
[注意]1、純化樹脂在使用前必須充分混勻。 2、PCR產物中礦物油應盡量吸去，否則會影響提取DNA的 產量。四、載體加dT尾1、將1μg pUC19用SmaⅠ全酶切。 2、在小管中按上述PCR反應，加入各種混合物，除將4μl 4種dNTP改為4μl 25mM dTTP。 3、加入1μl(
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（一）
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟：(1) 變性(Denature)：目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈；(2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上的目
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（二）
二、PCR反應參數1、變性：在第一輪循環前，在94℃下變性5-10min非常重要，它可使模板DNA完全解鏈，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，這樣可減少聚合酶在低溫下仍有活性從而延伸非特異性配對的引物與模板復合物所造成的錯誤。變性不完全，往往使PCR失敗，因為未變性完全的DNA
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（三）
材料、設備及試劑一、材料不同來源的模板DNA。二、設備移液器及吸頭，硅烷化的PCR小管，DNA擴增儀(PE公司)，瓊脂糖凝膠電泳所需設備(電泳槽及電泳儀)，臺式高速離心機。三、試劑：1、10×PCR反應緩沖液：500mmol/L KCl， 100mmol/L Tris·Cl， 在25℃下， pH9.
聚合酶鏈式反應（PCR）引物設計的基本原則
引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。引物內部不應出現互補序列。兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。引物與
聚合酶鏈式反應（PCR）各種熱啟動酶存在的意義
各種熱啟動酶存在的意義市場上熱啟動的酶種類很多,但新手并不完全了解熱啟動酶存在的意義。非熱啟動的Taq酶在較低溫度時也有活性:我有一本1992年出版的《PCR基因擴增實驗操作手冊》中提到,酶在70度時的合成速度為60核苷/秒/酶分子,55度時為22,37度時為1.5,22度時為0.25。也就是說此時