PCR實驗的準備工作及步驟
步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應做準備;②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在酶的作用下，以P為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鐘， 2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。實驗試劑與器材：模板DNA、2.5mmol/L q DNA聚合酶(5U/SSR引物10 ×buffer、15mmol/L Mg2+、ddH2OPCR儀、移液槍、PCR板實驗步驟： ......閱讀全文
pcr實驗步驟
一、 樣品RNA的抽提1. 取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。2. 兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以
PCR實驗操作
PCR實驗操作???? PCR是極為重要的DNA增殖技術，應用層面非常廣，其中包括了核酸探針的制備。如果一段DNA已經被次選殖至載體上，要以PCR擴增這段DNA時，可根據質體multiple cloning sites兩邊的序列，選用適當的核酸引子 （universal primers） 進行擴增反
PCR實驗操作
PCR是極為重要的DNA增殖技術，應用層面非常廣，其中包括了核酸探針的制備。如果一段DNA已經被次選殖至載體上，要以PCR擴增這段DNA時，可根據質體multiple cloning sites兩邊的序列，選用適當的核酸引子 （universal primers） 進行擴增反應；比較常用的引子包括S
實時－PCR－實驗
試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸餾水反向引物正向引物儀器、耗材 ABIPRISM7700 型號系列檢測系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑以 50ul 反應體系為例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitro
免疫PCR實驗
實驗方法原理 免疫PCR主要由兩個部分組成，第一部分的免疫反應類似于普通的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的測定過程；第二部分即通常的PCR檢測，抗原分子的量最終由PCR產物的多少來反映。第一步中，首先用待測抗原（如牛血清白蛋白（ESA））包被微滴板孔，再加入相應的特異抗體，于是抗體就與固相上的抗原結
降落PCR實驗
實驗材料 基因樣品儀器、耗材 PCR實驗步驟 1. ?反應體積為50 μl。2. ?人CD137胞膜外區基因的PCR擴增體系：CD137-pCDNA3質粒4 μl，P1，P2各0.5 μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。3. ?hIgG1Fc片
誘變－PCR－實驗
試劑、試劑盒?氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高純度的脫氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色儀器、
實時－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸餾水 反向引物 正向引物 儀器
誘變－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突變 PCR 緩沖液
誘變－PCR－實驗
誘變 PCR 最大的優勢是以一種沒有偏好的方式引入了各種類型的突變，而不是獲得高水平的單一的擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Nati
雙重PCR實驗
隨著轉基因農作物的大量種植，其安全性問題也日益受到人們的重視。2002年我國要求對轉基因農作物實行標簽管理。抗草甘膦（glyphosate）大豆 （商品名，roundup ready soybean）是在傳統大豆株Variety A5403中轉入外源基因CAMV-35S啟動子、抗草甘膦基因CP4-E
實時－PCR－實驗
本方法運用 PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG。進行實時 PCR 時，應該有一套設備可以檢測每次 PCR 循環時釋放的熒光信號。并且還能檢測 FAM 和 JOE 激發后分別釋放出的 520mn 和 550nm 的發射波。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作
定量PCR實驗
實驗材料?限制性內切核酸酶反轉錄酶熱穩定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸試劑、試劑盒?擴增緩沖液dNTP 貯存液胎盤 RNase 抑制劑儀器、耗材?瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠屏蔽型槍頭離心管正向排液式移液器PCR 儀實驗步驟?一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液4 種 dNTP 貯存液（20
菌落PCR實驗
菌落PCR標簽： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。
PCR實驗技術
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? PCR實驗技術?PCR（聚合酶鏈式反應）?【原理】?PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
nverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適的
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適
定量PCR實驗技術－QPCR
Quantitative PCRJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwes
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適
PCR實驗如實預防實驗污染
進行PCR操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，zui大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。1.劃分操作區：目前，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區內進行：(1)標本
PCR實驗如實預防實驗污染
進行PCR操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。劃分操作區：目前，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區內進行：(1)標本處理區，
原位PCR實驗相關
所需設備 原位PCR反應是在載玻片的平面上進行，保持水平可以使反應各組分均勻地分布在組織切片上，所以須在原位PCR儀上進行，該儀器不但可以使載玻片保持水平，而且還可以給載玻片進行均勻地加熱，保證擴增反應的順利進行。 探針種類 與原位雜交一樣，檢測原位PCR結果的探針可以是DNA探針，也可以
免疫PCR實驗步驟
免疫PCR實驗步驟，主要程序（1） 抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復合物；（2） 加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復合物；（3） 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA；（4） PCR擴增生物素化DNA部分。免疫PCR實驗步驟，實驗步驟（1）制備生物素化DNA將噬粒
PCRELISA實驗
實驗概要本實驗介紹了PCR-ELISA的操作流程。PCR-ELISA是用免疫學方法檢測PCR產物，這比常規用電泳方法及Southern blot要簡便、省時，可同時處理大量標本，便于自動化。實驗原理PCR-ELISA的原理是在做PCR擴增時應用生物素(biotin)標記的引物，這樣PCR的產物就可結
PCR實驗技術（一）
PCR（聚合酶鏈式反應）【原理】PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸鏈（約15-20個核苷酸），用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區之間的區域；③4種d
PCR實驗技術（三）
【注意事項】1.?PCR引物設計：引物設計可能是PCR擴增成功最關鍵的因素。如引物設計欠佳，可能導致擴增產物不足，甚至擴增失敗，其原因是設計欠佳的引物可導致非特異擴增和/或形成引物二聚體，此又成為PCR反應的競爭性產物，從而進一步抑制PCR產物形成。在引物設計時必須考慮以下幾個因素，其中最重要的是引
多元實時－PCR－實驗
試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸餾水反向引物正向引物儀器、耗材 ABIPrism7700型號系列檢測系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑以50ul反應體系為例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitrogen
PCR－擴増實驗
試劑、試劑盒 dNTP混合物基因特異的正向引物基因特異的反向引物單鏈cDNATaqDNA聚合酶RT-PCR緩沖液儀器、耗材 PCR儀PCR管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑去除 RNA 酶的雙蒸水10XRT-PCR 緩沖液（100 mmol/LTris-HCl、pH8.3,500 mmol
PCR－產物定量實驗
試劑、試劑盒 DNA 標準TEPCR 產物儀器、耗材 熒光計金屬箔紙微量離心管實驗步驟 方法 A: 熒光測定法熒光測定法可以在納克級范圍精確定量。熒光計和 DNA 定量試劑盒許多公司都有出售。確定熒光計是否安裝了適合于特定染料的激發和發射的部件至關重要。該方法在設計上適用于配有帶藍色 LED
PCR－產物純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 或去離子水 PCR 產物 儀器、耗材 離心機和轉子 PCR 濾 件