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核酸檢測革命：可替代PCR的犀利技術——RPA重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA技術主要依賴于三種酶：能結合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈DNA結合蛋白（SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應溫度在37°C左右。RPA原理介紹重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快，一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。RPA分析的關鍵在于擴增引物和探針的設計。PCR引物多半是不適用的，因為RPA引物比一般PCR引物長，通常需要達到30-38個......閱讀全文
twistDx 的重組酶聚合酶擴增（RPA）將徹底改變在資源有限的現場環境中擴增和檢測核酸的能力。RPA 技術原理RPA 體系的重點是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復合體，并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對。單鏈 DNA 結合（SSB）蛋白與被取代的 DNA 鏈結合，并使形成的 D 環保
英國TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術公司。該公司通過突破等溫DNA擴增，開發的重組酶聚合酶擴增專利技術(RPA),被譽為DNA診斷領域的革命性創新。(http://www.twistdx.co.uk) &nbs
重組酶聚合酶擴增（RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA技術主要依賴于三種酶：能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應溫度在37℃左右。重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈D
把DNA分子變性后解鏈，兩條單鏈DNA分別經復性與兩條引物互補結合，在4種dNTP存在和合適的條件下，由DNA聚合酶催化引物由5'到3'擴增延長，每經過變性、復性、延伸一個循環，模板DNA增加1倍，新合成的DNA鏈又可作為下一個循環的模板，經過30-50個循環，可使原DNA量增加
基本方案 實驗方法原理 利用聚合酶鏈式反應（PCR），任何兩個DNA片段可連接成一個新的重組DNA
2016年09月12日 15:27 來源:上海江林生物科技有限公司>>進入該公司展臺 實驗材料DNA試劑、試劑盒TE無水乙醇DNA聚合酶CTP儀器、耗材電泳儀離心機PCR儀實驗步驟1. 制備模板DNA，如DNA不是經氯化銫梯度純化的，100℃煮沸10
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE無水乙醇DNA聚合酶CTP儀器、耗材 電泳儀離心機PCR儀實驗步驟 1. 制備模板DNA，如DNA不是經氯化銫梯度純化的，100℃煮沸10 min 以滅活核酸酶。 2. 制備寡核苷酸引物，若PCR產物要進行平端克隆，就應該對引物的5
2006 年，Piepenburg 等首次提出了重組酶聚合酶擴增反應(recombinase polymerase amplification,RPA)。它是由重組酶(T4 uvsX)、聚合酶(Bsu)和單鏈結合蛋白(gp32)以及兩條特異性的上下游引物參與的等溫擴增。 首先， T4 uvsX
擴增反應并不是可以無窮地進行下去的，經過一定的循環周期后需擴增的片段不再按指數增多而逐漸進入平坡；進入平坡的循環次數，取決于起始時存在的模板拷貝數以及合成的DNA總量。所謂平坡就是批PCR循環的后期，合成產物達0.3～1pmol時，由于產物的堆積，使原來以指數增加的速率變成平坦的曲線。造成PCR
我們描述一種大聚合酶鏈反應(PCR)應用的方法，使在已知序列的核心區邊側的未知 DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA，以產生適合于PCR擴 增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區 的末端序列，但其方向性，使鏈的延長經過環上的未知區而不是