DCCIK細胞制備方法（二）
1．外周血單個核細胞的采集 1.1 用血細胞分離機采集患者自身的外周血單個核細胞80 - 100ml； 1.2 淋巴細胞分離液密度梯度離心法進一步純化單個核細胞(PBMC)； 1.3 無血清培養液洗滌2次，獲得純度在90%以上的PBMC，細胞數量需達到1-3 x 108。2．(可選步驟)腫瘤抗原的制備] 用于負載DC的腫瘤抗原可以是腫瘤特異性抗原肽(Tumor-Specific Antigens, TSA)或腫瘤相關抗原(Tumor-Associated Antigens, TAA)，也可以是腫瘤全細胞抗原。 用TSA或TAA負載的DC具有很好可克服這些缺陷，因為此時無需知道那些抗原是腫瘤細胞的TSA或TAA，而且全抗原中的多種不同腫瘤抗原沖擊DC可誘導產生針對不同抗原決定簇的細胞毒T......閱讀全文
二肽酶的制備方法
作為市售產品可由微生物產生后再提取。根據組成二肽的氨基酸不同，水解二肽成為兩個單獨氨基酸的二肽酶也不同。只能對含有脯氨酸或羥脯氨酸的二肽進行水解。
二肽酶的制備方法
作為市售產品可由微生物產生后再提取。根據組成二肽的氨基酸不同，水解二肽成為兩個單獨氨基酸的二肽酶也不同。只能對含有脯氨酸或羥脯氨酸的二肽進行水解。
α酮戊二酸的制備方法
1.將225 g草酰琥珀酸三乙酯與600 mL濃鹽酸混合，放置過液。蒸餾濃縮至140℃，剩余物冷卻結晶，得α-酮基戊二酸110-112 g，收率92-93%。2.制法：草酰丁二酸三乙酯（3）：于裝有攪拌器、回流冷凝器的反應瓶中，加入無水乙醇360 mL，分批加入潔凈的金屬鈉23 g（1.0 mol）
一抗二抗的制備方法
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法： 包被：用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。 5%脫脂乳（SMP）或者BSA 37℃（或
細胞制備流程及轉化方法
細胞制備流程及轉化方法1. 轉移0.2-1ml培養物至裝有500ml LB(或其他營養豐富的培養基)的1-2升搖瓶2. 37°C下劇烈振蕩培養2-6小時3. 定時監控OD600值(培養1小時后每半小時測定一次)4。?當OD600值達到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要
CIK/DCCIK及其在細胞治療上的應用（四）
?一、高效CIK? 高效CIK（High-efficiency cytokine-induced killer），即高效細胞因子誘導的殺傷細胞，是治療腫瘤和慢性傳染性病毒感染的細胞免疫治療方法之一。其技術是從患者自體外周血（20～100ml）中分離單個核細胞，經過體外刺激擴增培養，使在生理條
CIK/DCCIK及其在細胞治療上的應用（五）
5. 高效CIK血樣本采集注意事項 （一）采血前，患者可以飲溫開水、低脂清淡飲食； （二）采血前，不可以進行任何輸液治療； （三）采血前1天，患者不可以進行可能損傷、破壞淋巴細胞的治療和檢查項目，如放療、化療、核醫學檢查等； （四）連續兩個療程治療時，取血和回輸細胞在時間上會有交叉，取血必須在細胞回
CIK/DCCIK及其在細胞治療上的應用（一）
【背景知識】? CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”的縮寫，中文全稱為“細胞因子誘導的殺傷細胞”。 CIK是單個核細胞在CD3單抗和多種細胞因子(包括IFN-γ，IL-2等)的作用下培養獲得的一群以CD3+CD56+細胞為主要效應細胞的異質細胞群，其既具有T淋巴細胞
CIK/DCCIK及其在細胞治療上的應用（三）
【培養原理】 1．DC培養用細胞因子： 1.1 GM-CSF(粒細胞/巨噬細胞集落刺激因子) GM-CSF是一種造血生長因子，在體外可刺激中性粒細胞和巨噬細胞的集落形成，并具有促進早期紅巨核細胞、嗜酸性祖細胞增殖和發育的功能。 GM-CSF是最早被鑒定出來對于DC有作用的細胞因子之一。GM-CSF在
CIK/DCCIK及其在細胞治療上的應用（六）
四、ACTL 全稱“ AAV-DC-CTL靶向性抗腫瘤細胞免疫技術”，簡稱“ACTL?”或“ACTL技術”或“ACTL腫瘤細胞靶向治療”。 "ACTL? Anti-Cancer Cellular Immunotherapy"1. ACTL技術背景 2011年10月3日，加拿大科學家、美國醫學會和美國
細胞膜的制備方法實驗——從懸浮細胞中制備細胞膜
實驗材料膠原酶試劑、試劑盒EDTAHBSS膠原酶溶液陽離子硅膠貯存液儀器、耗材離心機實驗步驟一、用膠原酶/EDTA 釋放細胞1. 用預保溫溶液洗滌單層細胞并用膠原酶處理(1) 預保溫溶液洗滌細胞。預保溫溶液：5 mmol/L EDTA 鈉鹽溶于 HBSS，不含二價陽離子。(2) 在單層細胞上加 1%
反丁烯二酸的制備方法介紹
工業上有多種方法生產反丁烯二酸。其主要來源是在催化劑存在下將苯（或丁烯）氧化生成順丁烯二酸（或順丁烯二酸酐），再經異構化而得。將苯（或80%的丁烯）與過量空氣在流化床或固定床反應器中進行氧化反應生成順丁烯二酸酐，被循環的酸液吸收成順丁烯二酸。再經脫色過濾，順丁烯二酸在硫脲催化劑作用下進行異構化，反應
細胞化學基礎鳥嘌呤制備方法
方法一：5-氨基-4-咪唑酰胺與異硫氰酸苯甲酯進行酯化成酯，再與碘甲烷、氨水依次反應制得。?方法二：在四口燒瓶中按比例投入制得的N5-甲酰基-2,4,5-三氨基-6-羥基嘧啶、88%甲酸，加熱到110℃，回流反應10小時，然后，常壓蒸除甲酸至黏稠，冷卻至50℃，加水200mL，抽干、水洗、抽干、烘干
骨骼細胞染色體制備方法
1. 在含有細胞培養基的細胞培養管中無菌添加骨髓樣本1ml(參考細胞密度
紅細胞保養液的制備方法
阿氏液（Alsever）：即紅細胞保養液枸櫞酸鈉（5H2O） 0.80g枸櫞酸（H2O） 0.055g葡萄糖?2.05g氯化鈉?0.42g雙蒸水?加至 100 ml將以上試劑加熱溶解于雙蒸水中，調整pH至6.8，115℃滅菌10min,4℃保存備用。2. 0.5% 雞紅細胞制備方法先用滅菌注射器吸取
細胞膜的制備方法實驗
從懸浮細胞中制備細胞膜從組織培養皿中的匯合或部分匯合細胞中分離頂層膜、基底膜或中間膜從生長于微載體上的細胞中分離細胞膜實驗材料膠原酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒EDTA ? ? ? ? ? ? ? ?
細胞膜的制備方法實驗
從懸浮細胞中制備細胞膜 從組織培養皿中的匯合或部分匯合細胞中分離頂層膜、基底膜或中間膜 從生長于微載體上的細胞中分離細胞膜 ? ? ? ? ? ? 實驗材料
單細胞懸液制備方法介紹
01取樣→預處理 取樣是原代單細胞懸液制備非常重要的一步，其質量會直接影響到后續處理效果。 操作時，首先根據不同實驗需求麻醉或處死動物后進行消毒、固定并切開相應位置皮膚暴露目的組織。 其次操作過程中有以下幾點也需要注意： 嚴格無菌操作，快速處理； 針對不同組織類型控制環境溫度； 保證
抗原呈遞細胞的選擇和制備（二）
備 選 方 案 2 Con A 刺激的腹腔巨噬細胞的制備此方案中不使用致病菌，但巨噬細胞獲得率較低。將 Con A 溶 解 于 PBS (200ul/ml) ，用 0.22/xm 的濾器過濾，然后保存于 一 20°C 。 每只小鼠腹腔注射 500ul (IOOug)C o n A (附錄 2
關于α酮戊二酸的制備方法介紹
1.將225 g草酰琥珀酸三乙酯與600 mL濃鹽酸混合，放置過液。蒸餾濃縮至140℃，剩余物冷卻結晶，得α-酮基戊二酸110-112 g，收率92-93%。 2.制法： 草酰丁二酸三乙酯（3）：于裝有攪拌器、回流冷凝器的反應瓶中，加入無水乙醇360 mL，分批加入潔凈的金屬鈉23 g（1.
簡述鳥苷酸二鈉的制備方法
鳥苷酸的生產主要有酶法水解和發酵法，在發酵法中工業上有意義的二步法和生物合成與化學合成并用法。 （1）核糖核酸（RNA）水解法。 （2）二步法。以葡萄糖為碳源，用枯草桿菌變異株發酵得鳥苷，生產水平10.5g/L。然后將鳥苷在吡啶溶液中用三氯氧磷磷酸酸化，可得鳥苷酸。 [3] （3）生物合成
關于二氯乙烷的制備方法介紹
1.乙烯與氯氣直接合成法 以乙烯和氯氣在1,2-二氯乙烷介質中進行氯化生成粗二氯乙烷及少量多氯化物,加堿閃蒸除去酸性物及部分高沸物,用水洗滌至中性,共沸脫水,精餾,得成品。 2.乙烯氧氯化法乙烯直接與氯氣氯化生成二氯乙烷。由二氯乙烷裂解制氯乙烯時回收的氯化氫和預熱至150-200℃的含氧氣體
關于α酮戊二酸的制備方法介紹
1.將225 g草酰琥珀酸三乙酯與600 mL濃鹽酸混合，放置過液。蒸餾濃縮至140℃，剩余物冷卻結晶，得α-酮基戊二酸110-112 g，收率92-93%。 2.α-酮戊二酸的制法： 草酰丁二酸三乙酯（3）：于裝有攪拌器、回流冷凝器的反應瓶中，加入無水乙醇360 mL，分批加入潔凈的金屬鈉
淺談羊水細胞培養基制備方法蓋玻片制備
淺談羊水細胞培養基制備方法-蓋玻片制備 1、取樣:挑選懷孕13 -14周女性，在無菌檢測標準下提取羊水5m1，馬上引入無菌檢測離心管中 2、搜集:離心分離細胞，1000rpm10分鐘， 去上清，留0. 5ml， 輕打攪拌。 3、打疫苗:30mm培養皿里放蓋玻片1張，每塊滴攪拌的
關于2,3二羥基丁二酸的制備方法介紹
制備酒石酸主要有三種方法： 1.DL-酒石酸的制備用富馬酸或馬來酸進行氧化而得。 2.從乙二醛同氫氰酸進行反應然后酸水解而得。D—酒石酸，在很多果實中或很多植物的其他部分中都有發現，有游離狀態存在，也有同鉀、鈣、鎂結合狀態存在的。 3.酒石酸從生產酒時生成的粗酒石沉淀物中制備，提取酒石酸氫
胸腹水細胞染色體制備方法
在惡性腫瘤的胸腹水中有大量的分裂期細胞，其中多以非整倍體細胞存在，并含有各種標記染色體。 1、 實驗材料 2.5%碘精、75%酒精、無菌棉球、鑷子20-22號無菌腰穿包、50ml離心管、秋水仙素、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片等。 2、 操作過程（1）采樣：選擇有胸或腹水患者，在無菌條件下，輕腹
感受態細胞的制備方法
感受態細菌細胞的轉化采用氯化鈣的方法。不含有質粒的大腸桿菌菌株在室溫下使其解凍并加入40mL S.O.C 的液體培養基。在37 ℃培養1h , 然后將其轉移到37 ℃搖床上以200r /min 速度培養2 ～3h， 直到OD600 達到0.2 ～ 0.4。不同細菌菌株的最適宜OD600 是不同的。在
細胞化學基礎腺苷一磷酸制備方法
一磷酸腺苷可以從腺苷酸激酶催化兩個二磷酸腺苷（ADP）分子合成三磷酸腺苷（ATP）時生成?[4]?水解ADP的高能磷酸鍵生成?[4]?水解ATP亦可生成AMP（腺苷一磷酸）及焦磷酸鹽
誘導性干細胞的制備方法
最初由山中伸彌團隊發現的iPS細胞制備（誘導）方法是以通過慢病毒載體轉入數個轉錄因子為核心，在導入四種轉錄因子后，小鼠的成纖維細胞經過一定時間就會轉變為狀態類似于胚胎干細胞的iPS細胞。使用這種方法制備iPS細胞，首先需要一個特殊的轉基因小鼠品系。這種轉基因小鼠的Fbx15基因下游轉入了一個βgeo
淋巴細胞染色體制備方法
1. 向含有細胞培養基的細胞培養管中無菌添加全血0.5ml，蓋緊培養瓶，充分混均；2. 水平培養72 h(37℃)；3. 加入20ul 秋水溶液，培養2 h；4. 離心5 min（2000 rpm）；5. 去除上清液，保留0.5ml的細胞；6. 重新充分混懸細胞1；7. 加入5ml 低滲溶液(KCl