免疫球蛋白提取技術（二）
（12）IgG的純度鑒定，可采用下列方法之一鑒定。①玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度（NH4）2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。②瓊脂雙相雙擴散鑒定預先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗IgG血清進行雙相雙擴散，如IgG提純的話，則在兩樣品孔之間出現一條沉淀線。③免疫電泳鑒定孔內加待測樣品，電泳后，在槽內加抗IgG血清，瓊脂擴散24h，觀察結果。如果提取的IgG純的話，則只出現一條弧形的沉淀線，且沉淀線位于γ—球蛋白區。此鑒定必須同時進行全血清及抗血清抗體的免疫電泳，以資比較。④圓盤電泳鑒定用全血清樣品及提純樣品同時進行圓盤電泳。全血清樣品在圓盤電泳上出現數十條區帶，而純化的IgG則只有一條區帶。（13）IgG的濃縮與保存①IgG的濃縮②IgG的保存一般濃縮至1%以上的濃度，再分裝成小瓶凍干保存，或加0.01%硫柳汞在普通冰箱......閱讀全文
免疫球蛋白提取技術
免疫球蛋白提取技術可應用于：（1）推知機體的體液免疫功能；（2）診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。實驗方法原理隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數采用二步法以上相結合的方法，特別是以硫酸銨提純為基礎，再經過層析柱的方法來提高免
免疫球蛋白提取技術
免疫球蛋白提取技術 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數采用二步法以上相
免疫球蛋白提取技術
實驗材料 動物血清初乳膽汁試劑、試劑盒 硫酸銨NH4OHPBSNaH2PO4NaH2PO42H2OBaCl2HgIKIHClNaOHPBDEAE52葡聚糖凝膠G200無水硫酸鈉硼酸鹽緩沖液儀器、耗材 離心機透析袋低溫冰箱電泳槽電泳儀
免疫球蛋白提取技術（一）
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數
免疫球蛋白提取技術（一）
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數
免疫球蛋白提取技術（三）
二、IgM的分離與提純1、材料（1）血清（2）葡聚糖凝膠G200（3）洗脫液0.01Mol/L pH7.4PBS（0.14Mol/L NaCl或0.1Mol/L pH8.0 Tris－HCl 0.14Mol/L NaCl）2、操作方法選取2.50cm×90cm層析柱，用葡聚糖凝膠G200裝柱，平衡后
免疫球蛋白提取技術（二）
4、禽血清IgG的分離與提純（Na2SO4法）（1）試劑①5%葡聚糖硫酸鹽②0.02Mol/L MnCl2溶液③無水硫酸鈉④pH8.2硼酸鹽緩沖液⑤0.06Mol/L pH7.4PB液（2）操作方法①取禽血清10ml加5%葡聚糖硫酸鹽液，0.40ml和0.025Mol/L MnCl21.00ml充分
免疫球蛋白提取技術（二）
（12）IgG的純度鑒定，可采用下列方法之一鑒定。①玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度（NH4）2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。②瓊脂雙相雙擴散鑒定預先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗IgG血清
連續提取免疫球蛋白法－（immunoglobulin）
（一）試劑及配制1．飽和硫酸銨液2．各種磷酸鹽緩沖液⑴ 0.2mol/L原液⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB 液取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml，加H2O至2 000ml⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB 液取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml，加水
免疫球蛋白IgG的提取2
（五）免疫的具體方法1、直接法免疫血清的制備取體重2～3Kg的雄雞1只，免疫前采血8～10mL，測其正常抗體。靜脈注射新城疫弱毒新鮮尿囊液病毒2mL，同時腹腔注射8mL，2～4d后同法再免疫一次。第二次免疫后七天試血，血清凝集價在1︰320以上為合格即可全采血；如果不合格，可在第二次免疫后10d左右
免疫球蛋白IgG的提取3
五、蛋白質的鹽析法 向蛋白質溶液中加入不同濃度的中性鹽，可以把不同的蛋白質分別沉淀出來。這種方法稱為蛋白質的鹽析。 利用蛋白質的鹽析法，可以得到我們所需的不同的免疫球蛋白。最常用的中性鹽包括，硅酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉等，其中以硫酸銨最為常用： （一）、優點 1、在水中溶解度大，
免疫球蛋白IgG的提取1
一、目的及要求了解和掌握免疫球蛋白的提取方法。 二、概 念 抗體是在抗原物質刺激下，人或脊椎動物免疫系統的漿細胞產生的，能與抗原發生特異性反應的免疫球蛋白，主要存在于人和動物的血清及其體液中。 三、免疫血清的制備 （一）動物的選擇 實驗室常用的動物是家兔和羊，有時也用豚鼠或雞，大
免疫球蛋白提取分離純化技術
實驗概要免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。本實驗對禽血清IgG和IgA進行了分離純化。實驗原理免疫球蛋白包括IgG、IgM、IgA、IgE和I
免疫球蛋白IgG的提取3
五、蛋白質的鹽析法向蛋白質溶液中加入不同濃度的中性鹽，可以把不同的蛋白質分別沉淀出來。這種方法稱為蛋白質的鹽析。利用蛋白質的鹽析法，可以得到我們所需的不同的免疫球蛋白。最常用的中性鹽包括，硅酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉等，其中以硫酸銨最為常用：（一）、優點1、在水中溶解度大，其飽和溶液含有大量鹽；2、在水中
免疫球蛋白提取技術(Immunoglobulin－isolation－technique)
免疫球蛋白（Immunoglobulin?Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。?隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多
免疫球蛋白提取技術(Immunoglobulin－isolation－technique)2
九、蛋白定量技術???（一）雙縮脲測定法?1．原理??蛋白質中的肽鍵有雙縮脲反應，在堿性溶液中與二價銅離子形成藍紫色的絡合物，在一定的范圍內，顏色的深淺與蛋白質的含量成正比。此法特異性強，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產生這種反應，但此法不夠敏感，僅能測出毫克水平。?2．試劑配制?硫酸銅（CuSO4·
免疫球蛋白提取實驗注意事項及原因
IgG的分離與提純（一）材料與試劑配制1．動物血清2．硫酸銨飽和溶液硫酸銨 800g~850gH2O 1 000ml加熱至絕大部分溶質溶解為止，趁熱過濾，置室溫過夜，然后以28％NH4OH調pH至7.0（不調pH值也可以）。注：硫酸銨以質量優者為佳，因次品中含有少量重金屬對蛋白質巰基有影響。如次品必
免疫球蛋白提取技術：IgG的分離與提純1
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定3
一、試劑和器材1．試劑(1）消化液30％過氧化氫與硫酸與水的比例為3:2:1，即在1 份的蒸餾水中緩慢加入2 份的硫酸，待冷卻后，將其加到3 份的過氧化氫中。臨用時配制。(2) 催化劑 硫酸銅（CuSO4·5H2O ）與硫酸鉀（K2SO4）以1 : 3 配比研磨混合。(3）40 ％氫氧化鈉溶液 (4
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定1
血液及組織樣品的制備分析組織中某種物質的含量、探索物質代謝的過程和規律，經常使用動物的肝、腎、腦、粘膜和肌肉等組織，也選用全血、血漿、血清或者無蛋白血濾液等血液樣品，有時也采用尿液、胃液等完成各種生化實驗。掌握以上各種實驗樣品的正確處理和制備方法是保證生化實驗順利進行的關鍵。一、血液樣品(一）采血測
免疫球蛋白提取技術：IgG的分離與提純2
⑴ 區帶電泳：玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可。加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度 (NH4)2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。⑵ 瓊脂雙相雙擴散鑒定：預先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗 IgG血清進行雙相雙擴散，如IgG提純
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定6
VI 凝膠層析法分離純化蛋白質一、目的了解凝膠層析的基本原理，并學會用凝膠層析分離純化蛋白質。二、原理凝膠層析也稱凝膠過濾、凝膠過濾層析、分子排阻層析和分子篩層析。凝膠是具有一定孔徑的網狀結構物質，凝膠層析是一種分子篩效應，主要用于分離分子大小不同的生物大分子以及測定其相對分子質量。相對分子質量小的
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定4
V 蛋白質含量測定一、雙縮脲法測定蛋白質濃度（一）目的了解并掌握雙縮脈法測定蛋白質濃度的原理和方法。（二）原理具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應，在堿性溶液中蛋白質與硫酸銅形成紫色絡合物，在 540nm 處有最大吸收。在一定濃度的范圍內，蛋白質濃度與雙縮脲反應所呈的顏色深淺成正比，可用比色
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定5
（五）操作1．直接測定法在紫外分光光度計上，將未知的蛋白質溶液小心盛于石英比色皿中，以生理鹽水為對照，測得280nm 和260nm 兩種波長的吸光度。將280nm 及260nm 波長處測得的吸光度按下列公式計算蛋白質濃度。C = 1.45A280 — 0.74A260式中C：蛋白質質量濃度（mg/m
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定7
7．低相對分子質量標準蛋白質（上海產），開封后溶于200ml 重蒸水，加200ul2 倍樣品緩沖液（還原緩沖液），分裝20 小管，-20℃ 保存。臨用前沸水浴3-5min。其相對分子質量如下： 標準蛋白質 Mr 兔磷酸化酶B 97400 牛血清白蛋白 66 200 兔肌動
血清免疫球蛋白的提取分離、純化及鑒定2
二、組織樣品在生化實驗中，經常利用離體組織研究各種物質代謝途徑和酶系的作用。或者從組織中分離、純化核酸、酶以及某些有意義的代謝物質進行研究。但是，在生物組織中，因含有大量的催化活性物質，離體組織的采集必需在冰冷條件下進行，并日需盡快完成測定。否則其所含物質的量和生物活性都將發生變化。一般采用斷頭法處
核酸提取——RNA提取與DNA的提取
核酸分為兩大類：一類為核糖核酸（RNA），另一類為脫氧核糖核酸（DNA）。核酸的分子量極大，從數萬到億萬。核酸是兩性化合物，在一定的等電點溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別，在一定濃
核酸提取——RNA提取與DNA的提取
核酸分為兩大類：一類為核糖核酸（RNA），另一類為脫氧核糖核酸（DNA）。核酸的分子量極大，從數萬到億萬。核酸是兩性化合物，在一定的等電點溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別，在一定濃
免疫球蛋白檢測項目介紹血清免疫球蛋白A(IgA)
血清免疫球蛋白A(IgA)介紹:?IgA占血清免疫球蛋白總量10%-20%,可分為血清型和分泌型。分泌型IgA是外分泌液(如初乳、唾液、眼淚、腸道分泌液和支氣管分泌液)中的主要免疫球蛋白。因此,其在抗感染防御第一線中起重要作用,尤其在呼吸道和腸道,可稱為“局部免疫”。血清免疫球蛋白A(IgA)正常值
免疫球蛋白純化技術——鹽析法純化免疫球蛋白
在大多數情況下，免疫血清、雜交瘤細胞培養上清以及腹水中的抗體需經純化后再用于各種免疫學檢測中去。免疫球蛋白常用的純化方法有鹽析法、凝膠過濾、離子交換層析、親和層析以及高效液相色譜等方法。（來源：醫學基礎免疫學實驗指導，主編金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界圖書出版社，1990）實驗方法原理蛋白質在水