PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（四）
2.5 用SYBR Green熒光染料做常規實時定量PCR分析HLA 應用位點特異性PCR(SCP)方法從20例正常人中確定2位HLAA2（編號1、2）與2位HLA非A2（編號3、4）。 在GeneAmp ?SDS 5700檢測SYBR熒光染料4步位點特異PCR反應（圖4）SYBR熒光染料PCR反應結果與預期相符。2.6 在PCR基因芯片上進行SYBR熒光染料PCR反應 PCR基因芯片結果與常規實時定量PCR反應一致。圖5示第一步SCP反應結果：1號標本為陽性，3號標本為陰性，0為陰性對照.......閱讀全文
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（四）
2.5 用SYBR Green熒光染料做常規實時定量PCR分析HLA ?應用位點特異性PCR(SCP)方法從20例正常人中確定2位HLAA2（編號1、2）與2位HLA非A2（編號3、4）。 在GeneAmp ?SDS 5700檢測SYBR熒光染料4步位點特異PCR反應（圖4）SYBR熒光染料PCR反
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究
基因芯片技術具有快速多樣、微型化和自動化等特點在生物醫學領域廣泛的應用。但由于其基本原理是基于核酸雜交技術，有著內在的缺陷，實驗的敏感性和重復性都存在一定問題。核酸雜交較適合于檢測基因的表達，不易檢測基因組DNA的基因的重排，突變和缺失。而大多數腫瘤性疾病和一些遺傳變異和表型的改變與后者有關。為了解
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（三）
2.2 PCR-SSCP并測序分析發現X連鎖遺傳性鐵幼粒細胞貧血家系ALAS2基因第5外顯子基因異常 分析兩兄弟及其父母、外祖父母的ALAS2基因，兩兄弟ALAS2基因第5外顯子的PCR擴增產物有與正常臍血不同的單鏈電泳條帶，他們的父親和外祖父有與正常臍血相同的單鏈電泳條帶，而他們的母親和外祖母
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（一）
郝麟1） ?朱平1）＊ ?于曉梅2） ?張大成2） ?趙新生3） ? 歐陽賤華3 （1）北京大學第一醫院 北京 100034； 2）北京大學微電子學研究所 北京100871； 3）北京大學化學與分子工程學院 ? ?北京100871） 目的: 我們設計一種含有大量微反應池的PCR基因芯片，能對基因的重
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（二）
1.3.2 ?PCR-SSCP方法分析按照我室常規進行。 1.3.3 ?Taqman熒光探針 以發現的ALAS2基因第五外顯子點突變為中心設計，序列如下： 5’ （熒光集團）FAM-CAAGATCATAGAGAAGAAAC- TAMRA（淬滅集團） 3’，設計Taqman熒光PCR反應的上下
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（五）
3．討論 ?隨著近年基因芯片技術的發展，研究者逐漸認識到基于核酸雜交原理的傳統基因芯片缺陷與應用的局限性。隨著PCR技術的進展，特別是熒光定量PCR技術的出現PCR技術已成為生物醫學領域中應用最廣泛的技術。如果一種基因芯片能直接進行PCR反應,而且能夠同時擴增大批可能發生變異的基因顯然會有廣泛
多重PCR基因芯片檢測新研究
來自中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所傳染病診斷室的研究人員建立并初步評價了一種針對重要腸道病原菌的多重PCR基因芯片檢測方法，這一方法具有較高的特異性，并且混合PCR可以分別按照種屬內和種屬間的引物組合方案用于多病原的篩檢。 感染性腹瀉在我國發病率居各類傳染病之首，長期以來嚴重危害人民
多重PCR基因芯片檢測新研究
來自疾病預防控制中心傳染病預防控制所傳染病診斷室的研究人員建立并初步評價了一種針對重要腸道病原菌的多重PCR基因芯片方法，這一方法具有較高的特異性，并且混合PCR可以分別按照種屬內和種屬間的引物組合方案用于多病原的篩檢。 感染性腹瀉在我國發病率居各類傳染病之首，長期以來嚴重危害人民健康。其中絕大
PCR反應體系和條件(四)
PCR反應體系與反應條件??標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 ??? 10ul 4種dNTP混合物 ?各200umol/L 引物 ????各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug ?Taq DNA聚合酶 ?2.5u Mg2+
評估熒光定量PCR反應性能的標準
羅氏FastStart qPCR預混液通過化學修飾法進行Taq DNA聚合酶的活性封閉及高溫啟動，為實時熒光定量PCR帶來高質量的熒光信號和擴增效率。讓您獲得可信賴的基因表達研究結果。FastStart Essential DNA Green Master和FastStart Essential
普通PCR梯度PCR－原位PCR－熒光定量PCR儀的區別
普通PCR儀： 一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。如；（ABI 2720） 梯度PCR儀： 一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱
如何做好熒光定量PCR實驗？（四）
3.7 模板濃度起始模板的量對于獲得高產量很重要。對大多數PCR擴增和熒光PCR擴增，104到106個起始目的分子就足以觀測到好的熒光曲線（或在溴化乙錠染色膠上觀察到）。所需的最佳模板量取決于基因組的大小（下表）。舉例說，100ng到1μg的人類基因組DNA，相當于3×104到3×105個分子，足以
熒光定量PCR技術的熒光定量PCR的方法
接下來我們就來了解一下熒光定量的主要方法，我們如何選擇合適的方法？熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物；而非特異性檢測方法是在在PCR反
影響PCR及熒光PCR－的因素
?? 引物的設計和選擇符合熒光PCR的探針并進行設計對于實時熒光PCR尤其重要。可以說，不合理的設計意味著絕對的失敗。但是，好的設計并不等于好的實驗結果，影響PCR和熒光PCR的因素非常多，下面擇其重要進行介紹。? ? 3.1 引物退火溫度? ? 引物的一個重要參數是熔解溫度（Tm）。這是當50％的
實時熒光定量PCR（realtime－PCR）
實驗步驟一、 樣品RNA的抽提?1. ?取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。2. ?兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的
實時熒光定量PCR（realtime－PCR）
實驗材料 細胞樣品試劑、試劑盒 RNA提取試劑盒熒光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆轉錄酶MMLV異丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2瓊脂糖溴化乙錠MOPS甲醛乙酸鈉EDTAEB溴酚蘭儀器、耗材 離心管離心機風光光度計電泳槽凝膠板Realtime PCR儀實驗步驟 一、 樣品
實時熒光定量PCR（realtime－PCR）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。 實驗材料
PCR技術的發展（上）
各位科研君每天穿梭于實驗室，一定枯燥乏味吧！今天，和小編一起任性一回！聽聽小編給你講故事。注意啦，小伙伴們搬起板凳坐好啦！小編要開始講啦！故事還得從我們熟悉的PCR開始～～～PCR (Polymerase Chain Reaction)，聚合酶鏈式反應，取名效法“原子核裂變鏈式反應”。首先將待擴
PCR技術的發展（上）
各位科研君每天穿梭于實驗室，一定枯燥乏味吧！今天，和小編一起任性一回！聽聽小編給你講故事。注意啦，小伙伴們搬起板凳坐好啦！小編要開始講啦！ 故事還得從我們熟悉的PCR開始～～～ PCR (Polymerase Chain Reaction)，聚合酶鏈式反應，取名效法“原子核裂變鏈式反
PCR技術（四）：PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污 染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.一、污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于 密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提 取過程中，由
實時熒光定量pcr儀的PCR優勢
樣品到達域值水平所經歷的循環數稱為Ct值（限制點的循環數）。域值應設定在使指數期的擴增效率為最大，這樣可以獲得最準確，可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。
熒光定量PCR
熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術，它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監控反應過程，結
熒光PCR原理
1．熒光染料熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰。在光的刺激下，熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放出能量：1) 光能 許多熒光基團吸收光能后仍舊以光能形式釋放能量，并且發射光的峰值大于吸收峰。比如熒光染料Fam的光吸收峰為490nm，而發射峰為530nm。?2) 熱能 某些熒光基團吸收光能后，能
PCR技術（二）：PCR反應模板的制備
PCR反應的關鍵因素主要有引物的選擇與設計，酶的質量.模板的制備，在前二者都穩定可行的情況下，PCR模板的制備尤為重要.模板處理方法的選擇及操作人員的基 本技能，決定分離模板核酸(DNA或RNA)的質和量及PCR的成敗.而提高模板核酸質量的 關鍵是除去雜質(蛋白質、酶、脂肪等).除去抑制Taq DN
實時熒光定量PCR儀【實時熒光定量PCR儀】
【FT-PCR】實時熒光定量PCR儀【實時熒光定量PCR儀】_風途廠家_Kgaolet?o ya dikarolo t?e bopago seswant?ho t?a kgole ya PCR 具體來講撲殺無害化處理染疫動物，禁止泔水飼喂生豬，加強生豬養殖運輸屠宰等各個環節的清洗和消毒，包括養
PCR－組裝反應
試劑、試劑盒氯化鎂Rockstart 緩沖液three-reaction 主混合液瓊脂糖凝膠儀器、耗材PCR 儀PCR 管實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑氯化鎂,35 mmol/LRockstart 緩沖液（http://klentaq.com)three-reaction 主混合液82ul
PCR－組裝反應
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯化鎂 Rockstart 緩沖液 three-reaction 主混合液 瓊脂糖凝膠 儀器、耗材
PCR－組裝反應
試劑、試劑盒 氯化鎂Rockstart 緩沖液three-reaction 主混合液瓊脂糖凝膠儀器、耗材 PCR 儀 PCR 管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑氯化鎂,35 mmol/LRockstart 緩沖液（http://klentaq.com)three-reaction 主混合液
PCR反應程序
1．常規程序將 PCR 反應所需的成分配置完后，在 PCR 儀上于 94-96℃ 預加熱幾十秒至幾分鐘，使模板 DNA 充分變性，然后進入擴增循環。在每一個循環中，先于 94℃ 保持 30 秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復性溫度（一般 50-60℃ 之間），一般保持 30 秒鐘，使引物與模板
PCR反應程序
1．常規程序將PCR反應所需的成分配置完后，在PCR儀上于94-96℃預加熱幾十秒至幾分鐘，使模板DNA充分變性，然后進入擴增循環。在每一個循環中，先于94℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復性溫度（一般50-60℃之間），一般保持30秒鐘，使引物與模板充分退火；在72℃保持1分鐘（擴增1kb