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    多克隆抗血清的制備

    材 料(帶 V 項 目 見 附 錄 1)家兔、大鼠、小鼠或合適品系的倉鼠弗 氏 完 全 佐 劑(CFA; Sigma)含 1?2 mg/m l 純化蛋白抗原的 PBS 溶液:吸取其中 10?20 Mg,在考馬斯亮藍染色的 SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分析未見有污染的條帶VPBS弗 氏 不 完 全 佐 劑( incomplete Freunds adjuvant, IFA; Sigma)50 ml —次性聚丙烯離心管帶 有 19 G、 21 G 和 22 G 針 頭 的 3 ml 玻璃注射器雙頭同步注射針座連接器或塑料 3 通道旋塞IOOml 燒杯1.取一只家兔、大鼠、小鼠或適用于免疫的倉鼠,采血并用 50m l 離 心 管 收 集 血 樣(見附 錄 2F)。從血樣中制備血清,檢 測 后 儲 存(見輔助方案)。2.振 蕩 CFA 使 不 溶 的 結 核 分 枝 桿 菌 分 散 。 4°C 下 加 2 ml C F A 至 2m l......閱讀全文

    免疫酶細胞化學實驗技術-3

    一、對照實驗  1.吸收實驗  應用尚無文獻報告的抗血清/自己制備的抗血清進行ICC染色時,需用相應的抗原吸收抗血清后,再孵育標本,判斷結果的可信性(結果應為陰性)。常用的吸收實驗分固相吸收和液相吸收兩種(見本書第一章 ),對于不能形成沉淀,難以用離心沉降法分離的一些小分子多肽類抗原,以固相吸收為佳

    淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備技術3

    抗體的制備方法與原理一、抗血清的制備  有了質量好的抗原,還必須選擇適當的免疫途徑,才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。  (一)用于免疫的動物  作免疫用的動物有哺乳類和禽類,主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所

    抗體的制備方法與原理

    一、抗血清的制備  有了質量好的抗原,還必須選擇適當的免疫途徑,才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。  (一)用于免疫的動物  作免疫用的動物有哺乳類和禽類,主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量,如

    熒光二抗如何選擇更好-根據一抗種屬及類型

    熒光二抗如何選擇更好-根據一抗種屬及類型二抗廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體,在免疫學反應中,經常需要針對試驗選擇不同的二抗,艾美捷能為您的科研工作提供最適合和最全面的二抗產品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時候要綜合

    植物病毒檢疫技術突破填補國內空白

    經過半年多的努力,中山檢驗檢疫局技術中心分子生物學實驗室27日傳出喜訊,該實驗室已經制備出我國最新頒布的檢疫性植物病毒李痘病毒、李屬壞死環斑病毒和侵染香蕉最為嚴重的病毒之一黃瓜花葉病毒的抗血清,價值超億元,該項技術填補了廣東檢驗檢疫系統在全國植物病毒方面無自制抗血清的空白。 據《南方都市報》報道,

    免疫細胞化學染色操作規程

    一、材料和試劑1、玻片:須用免疫組化專用玻片,或用2%多聚賴氨酸包被處理玻片。2、5-10%正常山羊血清封閉液,用PBS配。3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。4、0.01M  PH7.4  PBS5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20

    分子雜交技術(一)

    一、概述  前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交

    分子雜交技術(一)

    一、概述  前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交

    分子雜交

    一、雜交通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的

    HLA抗原的檢測(一)

      (一)HLA-A、B、C抗原的檢測  HLA-A、B、C抗原可用血清學方法鑒定,故又稱SD抗原(serologically defined antigen),常采用微量淋巴細胞毒性試驗(microlymphocytotoxicity test),又稱補體依賴細胞毒試驗(comp

    DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學

    一、DNA探針的應用  雖然一般認為DNA探針敏感度不如cRNA探針,但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。  在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探針基本相同,所不同的是:(1)雜交時需先在高溫80~95℃短時處理,使DNA探針及細胞內靶DNA變性,解離成單鏈,迅置于冰上冷卻。然

    選擇合適的二抗,不再糾結

    當你徘徊在如何選擇二抗,或不知怎樣選擇最合適的二抗時,你的眼神告訴我,你糾結了,但是這不是你的錯。而當看完以下內容,你將不會再糾結,否則,那將是我的錯。1. 弄清一抗的宿主物種是什么二抗指向一抗的物種。如果使用來源于兔的一抗,則需要來源于除兔以外的其它物種的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG 二抗可

    二抗如何選擇-論一抗與二抗種屬及類型區別

    二抗廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體,在免疫學反應中,經常需要針對試驗選擇不同的二抗,艾美捷能為您的科研工作提供最適合和最全面的二抗產品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般

    抗獨特型抗體及其在醫學研究中的應用(一)

      針對外來抗原的抗體分子(Ab1)可變區上Id可刺激機體產生相應的抗Id抗體(Ab2)。Ab2β具有與外來抗原相似的氨基酸排列順序或空間構型,它能夠在體內模擬始動抗原的作用。應用Ab2β的這一特性,可有目的地制備Ab2β,將其作為抗原的替代物用于基礎和臨床醫學研究。  一、抗獨特抗體的制

    流式細胞儀免疫磁珠親和板結合分離法分選c kit+肝癌細胞

    腫瘤干細胞研究需要獲取高純度、高活力、高增殖能力的腫瘤亞群細胞,并盡量避免混雜細胞、低活力、低增殖能力細胞對細胞亞群特性的干擾。筆者在前期研究的基礎上,比較了流式細胞儀分選(flow cytometry sorting,FCMS)、免疫磁珠分選(magnetic cell sorting,MACS)

    抗血清中去除交叉反應性抗體實驗

    本方案介紹一種通過抗血清與細菌裂解液共同溫育而從多克隆抗血清中去除與細菌編碼蛋白質發生反應抗體的方法。本節介紹的吸收方法僅僅適用于制備含有低滴度抗大腸桿菌抗體的抗血清。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液封閉液細胞懸浮緩沖

    抗體純化方法介紹

    抗體制備制備出效價高,特異性強,穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎,抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗,不同的免疫學實驗方法(如ELISA,IHC,IP,ICC,SDS-PAGE, WB等)對抗體的效價,濃度和純度有不同的要求。我們知道,一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體

    β-內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備

      β-內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備   目前,在我國奶牛養殖業中,青霉素和頭孢菌素等β-內酰胺類抗生素對奶牛乳房炎等疾病的控制起著十分重要的作用。由于一些奶牛養殖商戶濫用抗生素以及未嚴格遵守休藥期,致使牛奶中抗生素殘留超標,乳中殘留的抗生素嚴重危害食品安全和人體健康。我國政府對超過一定限

    M蛋白的檢測與鑒定

     一、M蛋白的基礎知識  M蛋白是漿細胞或B淋巴細胞單克隆大量增殖時所產生的一種異常免疫球蛋白,其氨基酸組成及排列順序十分均一,空間構象、電泳特征也完全相同,本質為免疫球蛋白或其片段(輕鏈、重鏈等)。由于它產生于單一克隆,又常出現于多發性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤病人的血或尿中,故稱

    Jackson ImmunoResearch 二抗選用指南

    Jackson ImmunoResearch  公司二抗選用指南( 此部分內容來源于 Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc  網站,如有疑問,請參考原網站)親和層析法純化的二抗    用親和層析法純化的抗體是指,利用耦

    ELISA試劑預防非特異性染色

    非特異染色的原因包括一抗和二抗與血清蛋白的相互作用,抗體與組織之間的離子相互作用,以及與能夠影響IHC檢測系統的內源分子的相互作用。這些問題會產生高背景,以及無法在適當的細胞位置觀察目的抗原。這種類型的染色問題可通過用封閉劑來封閉非特異相互作用來解決。在將樣本與一抗共同孵育之前,可開展這些步驟:預防

    多克隆抗體的免疫電泳操作流程

      (多克隆抗體)的免疫電泳實驗原理:   多克隆抗體的免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術,這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的實驗方法。在多克隆抗體的免疫電泳驗技術中,首先利用蛋白質的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術將蛋白質進行分離

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    褪黑激素ELISA試劑盒使用說明(一)

    1、應用范圍此試劑盒可用于人血清和血漿中褪黑激素的體外定量檢測。2、前言說明松果體因其在光周期現象中的重要作用,已經被人們認為是神經內分泌的傳感器。松果體主要分泌的激素是:N-乙酰-5-甲氧色胺和褪黑激素,褪黑激素一般是由色氨酸合成而來的。血漿褪黑激素的濃度可在夜間達到最高。褪黑激素特有的波動變化可

    原位雜交組織化學實驗技術5

    (8)熒光顯示:  ①生物素標記DNA探針的熒光顯示。  1)應用PBS含5%無脂干奶(5μl每張蓋片),也可用1%牛血清白蛋白(BSA)-PBS覆蓋孵育5min室溫,以封閉非特異性結合部位。  2)移除多余液體,加抗生素-FITC(5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA,5μl/cm2)。在濕

    凝膠內沉淀試驗

    最常用的凝膠為瓊脂糖。由于凝膠內沉淀試驗具有高度的敏感性和特異性,且設備簡單、操作方便,因而得到廣泛應用。該試驗利用可溶性抗原和相應抗體在凝膠中擴散,形成濃度梯度,在抗原與抗體濃度比例恰當的位置形成肉眼可見的沉淀線或沉淀環。適宜濃度的凝膠可視為一種固相的液體,水分占98%以上,凝膠形成網絡,將水分固

    直接或間接western blot檢測方法之抗體介紹

      在直接檢測方法中,酶直接連接到一抗上(圖1.5)。操作簡單,檢測步驟少。雖然直接檢測是快速和直接的,但它往往比間接檢測的靈敏度低,因為在這個過程中可以發生信號放大的步驟更少。此外,酶直接標記到一抗上可能會造成成本和資源上的限制。   間接western blot檢測方法   間接檢測方法

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