[大量制備生產單鏈噬菌體DNA]1.新鮮過夜培養的宿主菌XLI-Blue,以1:20稀釋在LB培養液中,在37℃培養擴增2小時。2.加1ml含單鏈cDNA的上清液。3.再于37℃繼續培養2小時。4.然后將全部溶液轉到500~1000mlLB中,生長5~6小時。5.9500rpm離心60分鐘,除去細菌碎片。6.向上清液中加等體積的 20%PEG,3.5M醋酸胺溶液,室溫下沉淀30分鐘。7.9500rpm離心45分鐘,把PEG沉淀懸浮在含有405mg/ml的SM溶液中,23℃35000rpm離心16~24小時,在管上部附近,噬菌斑會形成一個可見帶,針刺法收集可見帶,并對SM溶液透析,最后以酚、氯仿抽提,酒精沉淀噬菌體DNA。 [生物素標記] 1.取來自一個文庫的單鏈cDNA,先用生物素標記后,再與另一個不加生物素標記的cDNA以10:1進行雜交。 2.生物素標記物來自VectorLaboratories,取100μg的單......閱讀全文
當前,人類基因組研究的重心正在由“結構”向“功能”轉移,一個以基因組功能研究為主要內容的所謂“后基因組時代”(post-genomics),也即功能基因組(functional genomics)時代,即將到來。如何獲取基因的功能信息,即與人類重大疾病和重要生理功能相關的基因信息,就擺在了我們面前。
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
差減cDNA文庫法[第一條鏈cDNA合成]1.合成第一條cDNA鏈時,所有試劑應按下列順序依次加入:10×第一條鏈合成緩沖液 &nbs
基因克隆的常用方法 基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。