蛋白質提取與制備(ProteinExtractionandPreparation)2
三、蛋白質提取與制備具體操作方法1、原料的選擇早年為了研究的方便，盡量尋找含某種蛋白質豐富的器官從中提取蛋白質。但至目前經常遇到的多是含量低的器官或組織且量也很小，如下丘腦、松果體、細胞膜或內膜等原材料，因而對提取要求更復雜一些。原料的選擇主要依據實驗目的定。從工業生產角度考慮，注意選含量高、來源豐富及成本低的原料。盡量要新鮮原料。但有時這幾方面不同時具備。含量豐富但來源困難，或含量來源均理想，但分離純化操作繁瑣，反而不如含量略低些易于獲得純品者。一般要注意種屬的關系，如鰹的心肌細胞色素C 較馬的易結晶，馬的血紅蛋白較牛的易結晶。要事前調查制備的難易情況。若利用蛋白質的活性，對原料的種屬應幾乎無影響。如利用胰蛋白酶水解蛋白質的活性，用豬或牛胰臟均可。但若研究蛋白質自身的性質及結構時，原料的來源種屬必須一定。研究由于病態引起的特殊蛋白質（本斯.瓊斯氏蛋白、貧血血紅蛋白）時，不但使用種屬一定的原料，而且要取自同一個體的原料。......閱讀全文
蛋白質提取與制備(Protein－Extraction－and－Preparation)2
三、蛋白質提取與制備具體操作方法1、原料的選擇早年為了研究的方便，盡量尋找含某種蛋白質豐富的器官從中提取蛋白質。但至目前經常遇到的多是含量低的器官或組織且量也很小，如下丘腦、松果體、細胞膜或內膜等原材料，因而對提取要求更復雜一些。原料的選擇主要依據實驗目的定。從工業生產角度考慮，注意選含量高、來源豐
蛋白質提取與制備(Protein－Extraction－and－Preparation)6
PH 值：與沉淀蛋白質或酶原理相同，結晶的溶液PH 值一般選擇在被結晶的蛋白質或酶的等電點附近，以利于晶體的析出。溫度：除少數情況外，通常選擇低溫條件進行。低溫條件對蛋白質和酶不僅溶解度低且不易變性。在中性鹽溶液中結晶時，溫度可在0℃至室溫范圍內選擇，在有機溶劑中結晶一般要求溫度較低。晶種：不易結晶
蛋白質提取與制備(Protein－Extraction－and－Preparation)1
蛋白質提取與制備蛋白質種類很多，性質上的差異很大，既或是同類蛋白質，因選用材料不同，使用方法差別也很大，且又處于不同的體系中，因此不可能有一個固定的程序適用各類蛋白質的分離。但多數分離工作中的關鍵部分基本手段還是共同的，大部分蛋白質均可溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液中，少數與脂類結合的蛋白質溶于乙醇、
蛋白質提取與制備(Protein－Extraction－and－Preparation)5
確定沉淀蛋白質所需硫酸銨濃度的方法將少量樣品冷卻到0～5℃，然后攪拌加入固體硫酸銨粉末，見蛋白質產生沉淀時，離心除去沉淀，分析上清液確定所要蛋白質的濃度，如它仍在溶液中則棄去沉淀，再加更多的硫酸銨于上清液中，直到產生蛋白質沉淀時止。以所要提取的蛋白質在溶液中的濃度對硫酸銨濃度作圖，得沉淀曲線，找出蛋
蛋白質提取與制備(Protein－Extraction－and－Preparation)3
水溶液提取：大部分蛋白質均溶于水、稀鹽、稀堿或稀酸溶液中。因此蛋白質的提取一般以水為主。稀鹽溶液和緩沖溶液對蛋白質穩定性好、溶度大，也是提取蛋白質的最常用溶劑。鹽溶液提取：以鹽溶液及緩沖液提取蛋白質進常注意下面幾個因素。鹽濃度等滲鹽溶液尤以0.02～0.05mol/L 磷酸鹽緩沖液和碳酸鹽緩沖液常用
蛋白質提取與制備(Protein－Extraction－and－Preparation)4
蛋白質提取液中，除包含所需要的蛋白質（或酶）外，還含有其它蛋白質、多糖、脂類、核酸及肽類等雜質。除去的方法有：1）核酸沉淀法該法可用核酸沉淀劑和氯化錳、硫酸魚精蛋白或鏈霉素等。必要時也可用脫氧核糖核酸酶除去核酸。即在粗勻漿中加入少量DNase,于4℃保溫30～60min，可使DNA 降解為足夠小的碎
蛋白質抽取(protein－extraction)
蛋白質在細菌中表現后，以反復的冷凍-解凍方法打破細胞，再用硫酸銨把蛋白質沉淀下來，此步驟可以去除大部份核酸、多醣、脂質等雜物。儀器用具：恒溫震蕩培養箱37℃；高速冷凍離心機及離心管 （使用20,000 rpm離心陀）使用高速離心機要注意： 離心機及離心陀的溫度要預冷完全，相對位置的兩只離心管要平衡好
Protocol－for－Protein－Extraction－for－proteomics
Protocol for Protein Extraction10 % w/v TCA/ acetone/ 0.07 % v/v -MercaptoethanolPlant cells are rich in compounds that interfere with the 2DE separat
蛋白質提取與制備
1蛋白質提取與制備蛋白質提取與制備蛋白質種類很多，性質上的差異很大，既或是同類蛋白質，因選用材料不同，使用方法差別也很大，且又處于不同的體系中，因此不可能有一個固定的程序適用各類蛋白質的分離。但多數分離工作中的關鍵部分基本手段還是共同的，大部分蛋白質均可溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液中，少數與脂類結合
Total－Protein－Extraction－with－TCAAcetone
We describe a procedure allowing extraction of total proteins that performs efficiently with a large variety of plant tissues, based on simultaneo
Protein－extraction－from－whole－tissues－for－IEF
Modified from that of Jay Thelen - University of Missouri-ColumbiaPhenol extraction followed by methanolic ammonium acetate precipitation - an effecti
蛋白質提取和純化
蛋白質提取和純化（主要內容如下）Protein Extraction?Protein PurificationProtein PrecipitationColumn PreparatioinQ & A Posted in the Method ForumProtein ExtractionWhole
蛋白質提取與純化技術2
2、等電點沉淀法 蛋白質在靜電狀態時顆粒之間的靜電斥力最小，因而溶解度也最小，各種蛋白質的等電點有差別，可利用調節溶液的pH達到某一蛋白質的等電點使之沉淀，但此法很少單獨使用，可與鹽析法結合用。 3、低溫有機溶劑沉淀法 用與水可混溶的有機溶劑，甲醇，乙醇或丙酮，可使多數蛋白質溶解度降低并析出，此法分
核酸提取(The－Extraction－of－Nucleic－Acid)
【實驗目的】 1．掌握核酸提取的基本原理和基本方法 2．掌握檢測核酸濃度及純度的原理及方法 ? 【實驗原理】 DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,因此DNA的提取也應是分子生物學實驗技術中最重要、最基本的操作。如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本談不
蛋白質與多肽提取分離方法2
?1.1.7 灌注層析（Perfusion Chromatography，PC）PC是一種基于分子篩原理與高速流動的流動相的層析分離方法，固定相孔徑大小及流動相速度直接影響分離效果。試驗證明其在生產、制備過程中具有低投入、高產出的特性。目前市場上可供應的PC固定相種類較多，適合于不同分子量的多肽分離
蛋白質分析技術(Analytical－Techniques－for－Protein)2
二、透析和超濾1.透析（Dialysis）：就是利用蛋白質分子不能通過半透膜（Semipermeable membrane）而小分子可以自由透過的性質，使蛋白質與小分子物質分開。作用：脫鹽、無機離子和小分子物質等。透析膜：動物膜、羊皮紙、火棉膠、賽璐玢或其他材料等。2.超濾（ultrafiltrat
蛋白質純化(protein－purification)實用技術2
7．密度多數蛋白質的密度在1.3~1.4g/cm3之間，分級分離蛋白質時一般不常用此性質，不過對含有大量磷酸鹽或脂質的蛋白質與一般蛋白質在密度上明顯不同，可用密度梯度法離心與大部分蛋白質分離。8．基因工程構建的純化標記通過改變cDNA在被表達的蛋白的氨基端或羧基端加入少許幾個額外氨基酸，這個加入的標
Preparation－of－tubulin2
DAY 2: Cycling preparation of MT protein.Keep the brains in an evacuated plastic ziplock bag buried in ice from the time of slaughter during transport
PREPARATION－OF－2％－FORMALDEHYDE－STOCK－SOLUTION－(2－METHODS)
METHOD 1:Formaldehyde preservative – 2% formaldehyde solution in protein-free phosphate-buffered saline (PBS).Prepare as follows:Add 2 g paraformaldeh
Large－Scale－Tubulin－Preparation——2
III. Pouring a 1L Phosphocellulose (PC) ColumnResin: Whatman P11 Cellulose Phosphate -- fibrous cation exchanger(1 gram of PC swells to about 4 ml pac
蛋白質（protein）概述
蛋白質是一種復雜的有機化合物，舊稱“朊”。蛋白質這一概念最早是由瑞典化學家永斯·貝采利烏斯于1838年提出，但當時人們對于蛋白質在機體中的核心作用并不了解。1926年，詹姆斯·B·薩姆納揭示尿素酶是蛋白質，首次證明了酶是蛋白質。第一個被測序的抗原肽蛋白質是胰島素，由弗雷德里克·桑格完成，他也因此獲得
酵母準備
Yeast DNA PreparationYeast Genomic Preparation? (Gottschling Lab)Rapid method for yeast genomic DNA isolation??Yeast DNA Preparation (rapid glass bead
蛋白質沉淀(Protein－Precipitation)濃縮方法原理及詳細解析2
二．硫酸銨的使用硫酸銨中常含有少量的重金屬離子，對蛋白質巰基有敏感作用，使用前必須用H2S處理：將硫酸銨配成濃溶液，通入H2S 飽和，放置過夜，用濾紙除去重金屬離子，濃縮結晶，100℃烘干后使用。另外，高濃度的硫酸銨溶液一般呈酸性（PH=5.0左右），使用前也需要用氨水或硫酸調節至所需PH。硫酸
蛋白質組樣品制備程序2
2）在4℃條件下以20000g的離心力冷凍離心60分鐘 （離心力務必達到或大于20000g）。3）移取上清溶液。若上清樣品不立即使用，則須儲存于-80℃（最佳條件）或-20℃的無霜冰箱中以防止蛋白質的降解。2、用初始緩沖液（Start buffer）交換處理細胞裂解液1）在上述細胞裂解液中，加入初始
蛋白質提取與純化技術
實驗概要大腸桿菌表達蛋白以可溶和不溶兩種形式存在，需要不同的純化策略。現在，許多蛋白質正在被發現而事先并不知道它們的功能，這些自然需要將蛋白質分離出來后，進行進一步的研究來獲得。分析蛋白質的方法學現已極大的簡化和改進。必須承認，蛋白質純化比起DNA克隆和操作來是更具有藝術性的，盡管DNA序列具有異乎
蛋白質提取與純化技術
?選擇材料及預處理 以蛋白質和結構與功能為基礎，從分子水平上認識生命現象，已經成為現代生物學發展的主要方向，研究蛋白質，首先要得到高度純化并具有生物活性的目的物質。蛋白質的制備工作涉及物理、化學和生物等各方面知識，但基本原理不外乎兩方面。一是得用混合物中幾個組分分配率的差別，把它們分配到可用機械方
蛋白質提取與純化技術
以蛋白質和結構與功能為基礎，從分子水平上認識生命現象，已經成為現代生物學發展的主要方向，研究蛋白質，首先要得到高度純化并具有生物活性的目的物質。蛋白質的制備工作涉及物理、化學和生物等各方面知識，但基本原理不外乎兩方面。一是得用混合物中幾個組分分配率的差別，把它們分配到可用機械方法分離的兩個或幾個
Size－and－Shape－of－Protein－Molecules2
The sedimentation coefficient of a protein is a measure of how fast it moves through the gradient. Increasing the mass of the protein will increase it
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究（苯酚法提取蛋白質）
1. 前言提取蛋白質是蛋白質組學研究的第一步。植物組織的蛋白質含量較低，并且存在多種非蛋白質成分，如細胞壁及貯藏多糖、脂質和酚類化合物，使蛋白質的提取難度增大 。植物蛋白質的可溶性與它們的細胞內定位關系密切，傳統的蛋白質提取方法是用水合緩沖液、去垢劑或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA
植物葉蛋白（the－plant－leaf－protein）的提取
一、實驗目的熟悉植物葉蛋白的幾種提取原理和方法，了解其意義及其應用價值。二、實驗原理植物葉蛋白或稱綠色蛋白濃縮物 (leaf protein concentration，簡稱LPC)，是從新鮮植物葉片中提取的高質量濃縮蛋白質，不僅是畜禽生長發育和生產畜產品的主要營養物質，而且目前也正成為人類的保