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原理IgG是免疫球蛋白（Immunoglobulin，簡稱IgG）的主要成分之一，分子量約為15萬~16萬，沉降生活費數約為7s。IgG是動物和人體血漿的重要成分之一。血漿蛋白質的成分多達70余種，要從血漿中分離出IgG，首先要進行盡可能除去其他蛋白質成分的粗分離程序，使IgG在樣品中比例大為增高，然后再純化而獲得IgG。鹽析法是粗分離蛋白質的重要方法之一。許多蛋白質在純水或低鹽溶液中溶解度較低，若稍加一些無機鹽則溶解度增加，這種現象稱為“鹽溶”（Salting in）。而當鹽濃度繼續增加到某一濃度時，蛋白質又變得不深而自動析出，這種現象稱為“鹽析‘（Salting out）。這些現象的原理大致是由于蛋白質是親水膠體，帶有羧基解離的負電荷或氨基解離的正電荷，其極性基團使分子間相互排斥，同時與水分子形成水膜，這些因素保證蛋白質形成溶于水的溶膠狀態。當加入少量鹽時，增多了蛋白質分子上的極性基團，因而增大了蛋白質在水中溶解度，......閱讀全文
（一）原理IgG是免疫球蛋白（Immunoglobulin，簡稱IgG）的主要成分之一，分子量約為15萬~16萬，沉降生活費數約為7s。IgG是動物和人體血漿的重要成分之一。血漿蛋白質的成分多達70余種，要從血漿中分離出IgG，首先要進行盡可能除去其他蛋白質成分的粗分離程序，使IgG在樣品中比例大為
鹽析法是粗分離IgG的重要方法原理IgG是免疫球蛋白（Immunoglobulin，簡稱IgG）的主要成分，分子量約為15萬~16萬，沉降生活費數約為7s。IgG是動物和人體血漿的重要成分。血漿蛋白質的成分多達70余種，要從血漿中分離出IgG，首先要進行盡可能除去其他蛋白質成分的粗分離程序，使IgG
實驗材料熒光色素試劑、試劑盒抗體實驗步驟熒光色素的選擇 可以產生明亮熒光的染料物質，稱熒光色素 (fluorochrome) 。目前常用的熒光色素有以下幾種：(1) 異硫氰酸熒光素 (Fluorescein isothiocyanate, FITC): 在堿性條件下， FITC 的異硫氰酸基在水溶液
⑴ 區帶電泳：玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可。加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度 (NH4)2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。⑵ 瓊脂雙相雙擴散鑒定：預先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗 IgG血清進行雙相雙擴散，如IgG提純
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。 隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。一、原理蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數
免疫球蛋白提取技術 實驗方法原理 隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可
（12）IgG的純度鑒定，可采用下列方法之一鑒定。①玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度（NH4）2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。②瓊脂雙相雙擴散鑒定預先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗IgG血清
免疫球蛋白提取技術可應用于：（1）推知機體的體液免疫功能；（2）診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。實驗方法原理隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數采用二步法以上相結合的方法，特別是以硫酸銨提純為基礎，再經過層析柱的方法來提高免
ELISA原理 ELISA利用抗原抗體之間專一性結合之特性，對標本進行檢測；由于結合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計 其結合 機制後，配合酵素顯色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進行定量分析。根據待測樣品與結合機制的不同，ELI
在臨床檢驗中一般采用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標記的抗原或抗體（結合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制
實驗方法原理 硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來。各種蛋白質的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液
IgG的分離與提純實驗可以用于：制備酶標抗體或熒光抗體。實驗方法原理硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出
抗體制備制備出效價高，特異性強，穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎，抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗，不同的免疫學實驗方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）對抗體的效價，濃度和純度有不同的要求。我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體
3.1.3 包被用抗原 用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養物等，須經提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細菌和病毒抗原可以從其培養物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中
（五）免疫的具體方法1、直接法免疫血清的制備取體重2～3Kg的雄雞1只，免疫前采血8～10mL，測其正常抗體。靜脈注射新城疫弱毒新鮮尿囊液病毒2mL，同時腹腔注射8mL，2～4d后同法再免疫一次。第二次免疫后七天試血，血清凝集價在1︰320以上為合格即可全采血；如果不合格，可在第二次免疫后10d左右
鹽析法純化免疫球蛋白 DEAE-Sephadex A-50柱層析純化免疫球蛋白 Sepharose CL-4B親和柱層析純化IgG及IgG亞類 高效液相色譜純化小鼠腹水中單克隆抗體 單克隆抗體親和層析柱純化重組人α2a干擾素（rHuIFN-
實驗概要免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。本實驗對禽血清IgG和IgA進行了分離純化。實驗原理免疫球蛋白包括IgG、IgM、IgA、IgE和I
斑點免疫滲濾試驗的基本原理是：以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應和洗滌在一特殊的滲濾裝置上以液體滲濾過膜的方式迅速完成。斑點免疫滲濾試驗最初是從斑點ELISA基礎上發展起來建立的，應用的結合物是酶標記的，稱為斑點酶免疫滲濾試驗。90年代初發展了以膠體金為標記物的斑點免疫滲濾
3.2.3 結合物的制備 酶標記抗體的制備方法主要有兩種，即戊二醛交聯法和過碘酸鹽氧化法。（1）戊二醛交聯法：戊二醛是一種雙功能團，它可以使酶與蛋白質的氨基通過它而聯結。堿性磷酸一般用此法進行標記。交聯方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中，反應后即得酶標記抗體。ELI
3.2 結合物 結合物即酶標記的抗體（或抗原），是ELISA中最關鍵的試劑。良好的結合物應該是既保有酶的催化活性，也保持了抗體（或抗原）的免疫活性。結合物中酶與抗體（或抗原）之間有恰當的分子比例，在結合試劑中應盡量不含有或少含有游離的（未結合的）酶或游離的抗體（或抗原）。此外，結合物尚要
4、禽血清IgG的分離與提純（Na2SO4法）（1）試劑①5%葡聚糖硫酸鹽②0.02Mol/L MnCl2溶液③無水硫酸鈉④pH8.2硼酸鹽緩沖液⑤0.06Mol/L pH7.4PB液（2）操作方法①取禽血清10ml加5%葡聚糖硫酸鹽液，0.40ml和0.025Mol/L MnCl21.00ml充分
免疫酶細胞化學免疫酶細胞化學是免疫細胞化學（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應存在的前提條件下，借助于酶細胞化學的手段，檢測某種物質（抗原/抗體）在組織細胞內存在部位的一門新技術：即預先將抗體與酶連結，再使其與組織內特異抗原反應，經細胞化學染色
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) ：是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后
目前動物用單抗，在動物疫病診斷和檢疫、妊娠檢測、性別鑒定等方面有廣泛的應用，大多以診斷試劑(盒)的形式提供，其中核心試劑為標記的單抗。下面將介紹最常用的幾種標記技術。1．酶標記(1)辣根過氧化物酶(HRP)標記辣根過氧化物酶(HRP)標記單抗和多克隆抗體的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基用
人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質的
許華林 張曼人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質