準備干凈的配膠板和電泳槽注意 DNA 酶污染的儀器可能會降解 DNA ,造成條帶信號弱、模糊甚至缺失的現象選擇電泳方法 一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是只有幾個 bp 的差別應該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳;用普通電泳不合適的巨大 DNA 鏈應該使用脈沖凝膠電泳。注意巨大的 DNA 鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。正確選擇凝膠濃度 對于瓊脂糖凝膠電泳,濃度通常在 0.5 ~ 2 %之間,低濃度的用來進行大片段核酸的電泳,高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎,小心操作和使用質量好的瓊脂糖是解決辦法。注意高濃度的膠可能使分子大小相近的 DNA 帶不易分辨,造成條帶缺失現象。適合的電泳緩沖液 常用的緩沖液有 TAE 和 TBE ,而 TBE 比 TAE 有著更好的緩沖能力。電泳時使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果。注意電泳緩沖液多次使用后,離子強度降低, PH 值上升,緩沖性能下降,......閱讀全文
準備干凈的配膠板和電泳槽 注意 DNA 酶污染的儀器可能會降解 DNA ,造成條帶信號弱、模糊甚至缺失的現象 選擇電泳方法 一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是只有幾個 bp 的差別應該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳;用普通電泳不合適的巨
準備干凈的配膠板和電泳槽 注意 DNA 酶污染的儀器可能會降解 DNA ,造成條帶信號弱、模糊甚至缺失的現象 選擇電泳方法 一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是
瓊脂糖凝膠電泳可應用于:(1)DNA切膠回收;(2)DNA分離;(3)佐證DNA是否重組,質粒等是否切開以及其他分子生物學研究。實驗方法原理用瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。其分析原理與其他支持物電泳的最主要區別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網絡結構,物質分子通過時會受到阻
學習瓊脂糖凝膠電泳的基本原理; (2) 掌握使用水平式電泳儀的方法; (3)掌握核酸瓊脂糖凝膠電泳的基本操作 2實驗原理 瓊脂糖凝膠具有網絡結構,物質分子通過時會受到阻力,大分子物質在涌動時受到的阻力大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質和數量,而且還取決于分子大小
瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的,是由D-半乳糖和3、6-脫水-L-半乳糖結合的鏈狀多糖,含硫酸根比瓊脂少,因而分離效果明顯提高。瓊脂糖電泳具有以下優點:①瓊脂糖含液體量大,可達98%~99%,近似自由電泳,但樣品的擴散度比自由電泳小,對蛋白質的吸附極微;⑦瓊脂糖作為支持體有分辨率高、重復性好等優點;③電
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維,后者再聚合成半徑 20~30 n
在凝膠電泳中,首先應用的是瓊脂電泳,它具有下列優點:(1)瓊脂含液體量 大,可達98-99%,近似自由電泳,但是樣品的擴散度比自由電泳小,對蛋白質的吸附 極微。(2)瓊脂作為支持體有均勻,區帶整齊,分辨率高,重復性好等優點。(3) 電泳速度快。(4)透明而不吸收紫外線,可以直接用紫外檢測儀作定量測
實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維,后者再聚合成半徑 20~30 nm 的超螺旋結構。 實驗材料 DNA 樣品DNA 大小標準品
瓊脂糖凝膠電泳 1.??????用封邊帶封住塑料托盤開放的兩邊或清潔干燥的玻璃板的邊緣形成一個模具,置一個水平支架上。 2.??????配制足量的電泳緩沖液(1×TAE或0.5×TBE)用以灌滿電泳槽和配制凝膠。?配膠和灌滿電泳槽使用同一批緩沖液。 3.??????根據欲分離DNA片段大小用
瓊脂糖凝膠電泳可以用于:(1)檢測PCR結果;(2)分離不同大小的DNA條帶。 實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維,后者