實時熒光定量PCR技術用于檢測插入的外源基因拷貝數
自 1994 年，第一例轉基因植物產品 Flavr Savr TM 西紅柿在美國上市，到 2003 年底，世界范圍內轉基因作物已遍布 18 個國家和地區，種植面積達 167.2 萬英畝 (6770 萬公頃 )( Ewen SWB,1999; 北國網 ) 。大量實踐使得植物轉基因技術已有了比較經典和成熟的技術路線。除了在商業領域內獲得抗性植株外，植物轉基因技術還延伸到植物生理學研究（生化反應途徑、植物抗病、抗逆性）以及生物反應器研究（藥物、疫苗等）中（ Khachatourians 2002 ）。一般經過上游表達載體的設計構建以及下游轉化體系的建立、轉化品系的篩選鑒定等一系列步驟后，即獲得 T 0 代轉基因植物。在轉化過程中，外源 DNA 隨機插入植物基因組內，插入的拷貝數和位點都不固定。插入外源基因的拷貝數低（ 1 或 2 個）能較好的表達，插入的拷貝數多則會導致表達的不穩定甚至基因沉默現象（ Flave......閱讀全文
實時熒光定量－PCR
? ? 實時熒光定量 PCR ，簡稱 RT-QPCR, 屬于 Q-PCR 的一種，目前該技術已得到廣泛應用，如：擴增特異性分析、基因定量分析、基因分型、 SNP 分析等。熒光定量 PCR 常用的方法是 DNA 結合染料 SYBR GreenⅠ的非特異性方法。? ? SYBR Green I 是一種結
實時熒光定量pcr儀技術原理
所謂real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術的發展過程中，兩個重要的發現起著關鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的
實時熒光PCR檢測技術
實時熒光PCR檢測技術眾所周知，PCR（聚合酶鏈反應）技術自從1985年問世以來，經過十幾年的發展，已成為實驗室的常規技術。它是現代分子生物學研究中不可缺少的手段，是一種極為敏感的放大系統。相比于傳統的臨床診斷方法，核酸診斷是分子水平上的診斷技術，可以彌補傳統臨床診斷方法的某些缺陷，比如，核酸診斷能
通過熒光定量PCR如何計算基因拷貝數
要得到確切的基因拷貝數，一定要做絕對定量，即用一系列已知拷貝數的標準品做標準曲線，然后根據CT值計算出樣本的起始模板的拷貝數。y=klgX+bX=10^((CT-b)/k)得到起始模板拷貝數ps：樣本的拷貝數要在標準曲線之內，如果超出了就要選能包含樣本的標準品
通過熒光定量PCR如何計算基因拷貝數
要得到確切的基因拷貝數，一定要做絕對定量，即用一系列已知拷貝數的標準品做標準曲線，然后根據CT值計算出樣本的起始模板的拷貝數。y=klgX+bX=10^((CT-b)/k)得到起始模板拷貝數ps：樣本的拷貝數要在標準曲線之內，如果超出了就要選能包含樣本的標準品
實時熒光定量PCR儀的技術原理
所謂real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術的發展過程中，兩個重要的發現起著關鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的
實時熒光定量PCR檢測系統的介紹
實時熒光定量PCR檢測系統也叫實時熒光定量核酸擴增檢測系統（英文全名是Real-time Quantitative PCR Detection System）,簡稱實時熒光qPCR,qPCR的核心是實時熒光定量PCR儀及與其配套的檢測分析軟件系統。聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain
實時熒光定量PCR（realtime－PCR）
實驗材料 細胞樣品試劑、試劑盒 RNA提取試劑盒熒光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆轉錄酶MMLV異丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2瓊脂糖溴化乙錠MOPS甲醛乙酸鈉EDTAEB溴酚蘭儀器、耗材 離心管離心機風光光度計電泳槽凝膠板Realtime PCR儀實驗步驟 一、 樣品
實時熒光定量PCR（realtime－PCR）
實驗步驟一、 樣品RNA的抽提?1. ?取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。2. ?兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的
實時熒光定量PCR（realtime－PCR）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。 實驗材料
實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統，就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同，只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析
實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統，就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同，只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機
實時熒光定量PCR簡介
熒光定量PCR檢測技術從誕生到現在已經有 8 年了，但是其應用在近四年才迅猛增長。在 Medline 數據庫中，用“ Taqman” 或 ”real time PCR” 作為關鍵詞檢索，在1996 年僅有 19 篇，在 1997 年僅有 28 篇，在 98 、 99 、2000 年分別達到了
實時熒光定量PCR原理
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法.?1.在熒光定量PCR技術中,有一個很重要的概念—— Ct值.C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到
實時熒光定量－PCR－原理
實時熒光定量 PCR 技術,是指在 PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個 PCR 進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量的方法。實時定量 PCR 技術是在常規 PCR 基礎上,添加了一條標記了兩個熒光基團的探針。一個標記在探針的5'端,稱為熒光報告基團(R);另一個
實時熒光定量－PCR技術原理與應用
聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析，分析的都是 PCR 終產物。但是在許多情況下，我們所感興趣的是未經
實時熒光定量－PCR技術原理與應用
聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析，分析的都是 PCR 終產物。但是在許多情況下，我們所感興趣的是未經 PCR
熒光定量PCR技術檢測食品轉基因
當前，國際社會對轉基因食品檢測技術路線主要有兩條：一是對外源基因表達產物蛋白質進行檢測；二是直接檢測外源基因DNA。隨檢測手段不斷提高，對食品轉基因檢測已從定性提高到定量水平 。對外源基因表達產物蛋白質檢測常用方法有酶聯免疫法（ELISA）、蛋白質印跡法（Westernblot）等，這些檢測方法大多
實時熒光定量PCR，檢測指標是什么
實時熒光定量PCR是檢測模板DNA的拷貝數、基因表達量、基因突變等的
實時熒光定量PCR檢測及臨床應用
實時熒光定量PCR技術的應用定量PCR是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Appliedbiosystems公司推出，它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團，利用對熒光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的
實時熒光定量PCR技術的優缺點匯總
? qPCR的優點? ? 方法成熟，配套儀器試劑齊全? ? 試劑成本中等? ? 操作簡單? ? 檢測敏感性高，特異性高? ? qPCR的缺點? ? 1.目的基因發生突變導致漏檢? ? 2.低濃度模板檢測結果無法確定? ? 3.使用標準曲線進行定量檢測時誤差較大。
實時熒光定量PCR的原理
5.PCR預實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率；6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測；7.實驗結果和數據分析，形成報告。收費標準優惠包干價：120元/樣/基因（SYBRgreenI法，相對定量）（含RNA提取，反轉錄，引物合成費用，上機測試費用（3個重復）；一個內參免費（內參3個重復） Ct值（C
實時熒光定量PCR的原理
所謂實時熒光定量PCR技術 ，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。檢測方法1.SYBRGreenⅠ法：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈
實時熒光定量PCR的原理
所謂實時熒光定量PCR技術 ，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。檢測方法1.SYBRGreenⅠ法：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈
普通PCR、實時熒光定量PCR、數字PCR技術的功能區別
?? 一、普通PCR技術? ? KARY MULLIS （1944.12.28-2019.8.7）? ? Kary Mullis于1983年發明了聚合酶鏈式反應法（polymerase chain reaction ，PCR），據說是載著女友開車的時候，忽然靈光一閃，想到了PCR原理（論開車的好處）
實時熒光定量PCR檢測系統的應用范圍
PCR檢測靈敏度高,檢測線性范圍寬,檢測精度和重復性好等突出優勢,因此被公認為世界用于臨床及科研的最先進核酸分子診斷技術,被美國FDA承認并推崇。檢測項目包括：食物等病原菌以及疾病病毒等病原體如：乙肝病毒HBV DNA,丙肝病毒HCV RNA,艾滋病病毒HⅣ RNA,沙眼衣原體CT,淋病雙球菌N
定量PCR目的基因與內參的Ct值差異大怎么解決
定量PCR目的基因與內參的Ct值差異大怎么解決實時熒光定量 PCR技術用于檢測插入的外源基因拷貝數 自 1994 年，第一例轉基因植物產品 Flavr Savr TM 西紅柿在美國上市，到 2003 年底，世界范圍內轉基因作物已遍布 18 個國家和地區，種植面積達 167.2 萬英畝 (6770 萬
定量PCR目的基因與內參的Ct值差異大怎么解決
定量PCR目的基因與內參的Ct值差異大怎么解決實時熒光定量 PCR技術用于檢測插入的外源基因拷貝數 自 1994 年，第一例轉基因植物產品 Flavr Savr TM 西紅柿在美國上市，到 2003 年底，世界范圍內轉基因作物已遍布 18 個國家和地區，種植面積達 167.2 萬英畝 (6770 萬
實時熒光定量pcr儀的PCR優勢
樣品到達域值水平所經歷的循環數稱為Ct值（限制點的循環數）。域值應設定在使指數期的擴增效率為最大，這樣可以獲得最準確，可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。
實時熒光定量PCR儀和基因擴增儀的區別
熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統和計算機分析處理系統，實時熒光定量PCR儀主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的，而普通的PCR儀是做定性分析和擴增基因片段，定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作，而反之就不行了，況且這樣代價太大了，一般的實驗室都不允許這樣做的。總之兩者的功能不能