如何提高蛋白質的表達量?
相信如何提高目的重組蛋白的誘導表達量是很多同學在研究中都會遇到的問題。泡了無數論壇,看了無數帖子,嘗試過IPTG的誘導濃度、培養基成分、誘導溫度、誘導時間,甚至讓別的公司幫忙做密碼子優化(將目的片段通過全基因合成的方式合成出來)。總的來說,提高IPTG濃度是可以提高目的蛋白的誘導表達量的,但一般也就用到1mM的濃度,再高對細胞有毒性; 培養基營養越豐富,表達量越高,所以如果追求表達量的話,就不要用LB培養基了,用自動誘導培養基吧; 誘導溫度,溫度越低表達量越低,但是可溶的比例一般來說會越高,所以如果追求表達量可以嘗試37℃或者42℃(沒試過42℃);誘導時間,這個跟培養基成分及供氧情況很有關系,如果供氧不足/營養不夠,提高時間會起到反效果。綜合而言,一般用的重組蛋白誘導表達條件是固定的,有時候要追求可溶表達,頂多就調整下誘導溫度(25℃)。條件就是:自動誘導培養基(不用額外的IPTG),37℃,20h。一般來說大分部蛋白的表達量......閱讀全文
蛋白A、蛋白G與蛋白L之間的差異
蛋白A (Protein A) 是金黃色葡萄球菌的一個株系的細胞壁蛋白,它通過Fc區與哺乳動物的IgG結合,天然的啟維益成提供的Protein A,42kDa,含有四個Ig Fc結合位點,其中2個是有活性的,而用于純化抗體的,一般是重組的protein A,含有4個Ig Fc區域結合位點。蛋
G蛋白的蛋白調控介紹
G蛋白在信號轉導過程中起著分子開關的作用。與GDP(紫色)結合后,G蛋白處于非活性狀態。GTP取代GDP后,G蛋白活化并傳遞信號。G蛋白形式多樣,大多數用于信號傳遞,有些則在諸如蛋白質合成中起重要作用。本文主要介紹異三聚體G蛋白,它由三條不同的鏈組成,分別為α(棕黃色)β(藍色)γ(綠色)。紅色部分
蛋白的常用蛋白鑒定方法
傳統的蛋白鑒定方法,如免疫印跡法、內肽的化學測序、已知或未知蛋白comigration分析,或者在一個有機體中有意義的基因的過表達通常耗時、耗力,不適合高流通量的篩選。目前,所選用的技術包括對于蛋白鑒定的圖象分析、微量測序、進一步對肽片段進行鑒定的氨基酸組分分析和與質譜相關的技術。 “滿天星”式的2
尿微量蛋白(尿微量白蛋白/蛋白尿)試驗
何為尿微量白蛋白(白蛋白)試驗?尿微量白蛋白試驗是對尿液中的蛋白質進行測定的篩選試驗。人體血液中有一種蛋白質稱為白蛋白。在正常情況下,幾乎無法在尿液中檢測到。只有在腎臟受損,尤其是損傷早期,它可以優先于其他腎損傷標志物在尿液中被檢測出,因此,尿微量白蛋白在診斷腎臟疾病、早期腎損傷等方面具有重要意義。
白蛋白球蛋白比值的概述
白蛋白在肝臟內制造,肝功能受損嚴重時白蛋白減少,降低程度與肝炎的嚴重程度相平行。慢性和重型肝炎及肝硬化患者血清白蛋白濃度降低。球蛋白是機體免疫器官制造的,當體內存在病毒等抗原時,球蛋白產生增加。慢性肝炎和肝硬化患者的白蛋白產生減少,而同時球蛋白產生增加,造成白蛋白/球蛋白比值(A/G)比值倒置。
球蛋白和清蛋白的區別
球蛋白是一種存在于人體中的血清蛋白,球蛋白是一種常見的蛋白,基本存在于所有的動植物體中。球蛋白具有免疫作用,因此也有人稱球蛋白為免疫球蛋白。白蛋白又稱為清蛋白,由肝實質細胞合成,是血漿中含量最多的蛋白質,占總蛋白的57%~68%。白蛋白主要生理功能包括:作為內源性氨基酸營養源;其具有相當的酸堿緩沖能
蛋白質代謝的降解蛋白
1、內源蛋白降解速度不同,一般代謝中關鍵酶半衰期短,如多胺合成的限速酶-鳥氨酸脫羧酶半衰期只有11分鐘,而血漿蛋白約為10天,膠原為1000天。體重70千克的成人每天約有400克蛋白更新,進入游離氨基酸庫。 2、內源蛋白主要在溶酶體降解,少量隨消化液進入消化道降解,某些細胞器也有蛋白酶活性。內
G蛋白的蛋白調控的簡介
G蛋白在信號轉導過程中起著分子開關的作用。與GDP(紫色)結合后,G蛋白處于非活性狀態。GTP取代GDP后,G蛋白活化并傳遞信號。G蛋白形式多樣,大多數用于信號傳遞,有些則在諸如蛋白質合成中起重要作用。本文主要介紹異三聚體G蛋白,它由三條不同的鏈組成,分別為α(棕黃色)β(藍色)γ(綠色)。紅色
轉運蛋白是不是就是載體蛋白
轉運蛋白:轉運蛋白是膜蛋白的一大類,介導生物膜內外的化學物質以及信號交換。脂質雙分子層在細胞或細胞器周圍形成了一道疏水屏障, 將其與周圍環境隔絕起來。盡管有一些小分子可以直接滲透通過膜,但是大部分的親水性化合物,如糖,氨基酸,離子,藥物等等,都需要特異的轉運蛋白的幫助來通過疏水屏障。因此,轉運蛋白在
球蛋白和清蛋白的區別
球蛋白是一種存在于人體中的血清蛋白,球蛋白是一種常見的蛋白,基本存在于所有的動植物體中。球蛋白具有免疫作用,因此也有人稱球蛋白為免疫球蛋白。白蛋白又稱為清蛋白,由肝實質細胞合成,是血漿中含量最多的蛋白質,占總蛋白的57%~68%。白蛋白主要生理功能包括:作為內源性氨基酸營養源;其具有相當的酸堿緩沖能