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RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce Toxic Phenotype." RNA Accepted (2006).）他們給細胞轉染特定基因的單條siRNA后運用全基因組芯片檢測技術鑒定表達上調/下調1.5到3倍的靶基因數量。研究人員發現在這種情況下有大量的基因被非特異性的調控著。siRNA正義鏈和反義鏈與脫靶基因的互補水平有高有低，并且每條siRNA所引發的脫靶基因表達譜也不盡相同，反映了序列依靠性的脫靶效應。簡單來說，Off-target效應就是指干擾shRNA序列進入了microRNA途徑，通過microRNA途徑，其可以不受完全互補的限制而調控大......閱讀全文
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
實驗概要本文介紹了RNA干擾的原理及基本實驗方法，包括了siRNA的設計、siRNA的制備和siRNA的轉染等方法，及RNA干擾實驗中的注意事項。實驗原理近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。證據表明；一個稱為Dicer
基因和siRNA選擇RNAi實驗的通量可從沉默單個感興趣的基因，到少量相關基因或同一個通路上的基因，到全基因組高通量篩選，取決于需要解決的生物學問題。siRNA的設計至關重要。轉染優化用于RNAi實驗的細胞應當有效轉染siRNA。轉染必須經過優化確保siRNA的濃度是最低的有效濃度以避免非特異性效應
通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。證據表明；一個稱為Dic
步驟包括:(一)siRNA的設計1. 在設計RNAi實驗時，可以先在以下網站進行目標序列的篩選：GenesilAmbion2. RNAi目標序列的選取原則：(1)從轉錄本（mRNA）的AUG起始密碼開始，尋找“AA”二連序列，并記下其3'端的19個堿基序列，作為潛在的siRNA靶位點。有研究
dsRNA消化法的主要優點在于可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟，為研究人員節省時間和金錢（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不過這種方法的缺點也很明顯，就是有可能引發非特異的基因沉默，特別是同源或者是密切相關的基因。現在多數的研究顯示 這種情況通常不會造成影