如何看出來細胞培養液體中有支原體
1. 觀察細胞的形態和生長特征:支原體污染比較嚴重時可出現生長減慢，有的培養基pH明顯變酸，并出現細胞病變，以此可依次對支原體污染進行檢測，但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能準確診斷。2. 分離培養法:大多數支原體可出現特有的典型菌落。因而可依次盡心檢測，該方法準確、可靠，但時間長，敏感性不夠高。3. DNA結合熒光素染色法:利用熒光染劑(bisbenzimide,Hoechst 33258)偵測支原體污染。熒光染料會結合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區域，因為支原體DNA中A-T含量占多數(55~80%)，所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經染色后，在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。......閱讀全文
支原體培養
支原體常用培養基為PPLO,很多公司都有出售.但血清（常用馬血清或豬血清）和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.還有改良的Frey's培養基，常用的微生物實驗技術書上都可以查到的。可以自己配制的。在液體培養基中通常要加入酚紅做指示劑的，當培養基由紅色變為黃色時，即可判定支原體的生長程度。
熒光檢測支原體
實驗方法原理 在無抗生素情況下，至少將細胞培養一周，將培養上清轉移至處于對數生長早期的指示細胞中，孵育 3~5d ，將細胞固定和染色，尋找細胞核之外的熒光。 實驗材料 來自于7天單層培養的無抗生素的細胞培養上清液或經離心后的上清液指示細胞 試劑、試劑盒 Hoechst
PCR 測定支原體
實驗材料Taq DNA多聚酶引物陽性對照DNA脫氧核苷三磷酸混合物三磷酸瓊脂糖1.3%TAE膠試劑、試劑盒磷酸緩沖鹽溶液液Tris醋酸EDTA6×加樣緩沖液引物儲備液儀器、耗材DNA抽提和純化系統基質的DNA抽提試劑盒熱循環儀實驗步驟一、DNA 標本的收集和制備1. 需要檢測支原體污染的細胞系，在收
支原體鑒別技術
支原體是一群目前所知能獨立生活的最小原核細胞型微生物。無細胞壁，具高度多形性，最小個體直徑200nm左右，可以通過濾菌器。在無生命的人工培養液中能生長繁殖，但營養要求高于一般細菌，在固體培養液中形成直徑為10—15u的小菌落，分中央與邊緣兩部分，中央部分長入培養液內，表面呈球形，在低倍鏡下觀察呈“荷
支原體CCU測定
丁香園網友“園中木”要做支原體CCU，而不知道這個初始菌液的濃度如何選，因缺少標準的0.5麥氏濃度，所以比較困惑，看了相關文獻有說將其定量到10的6次方左右，但又是如何定量的呢？網友“ljksbs”問答：這個我以前做過，只能用倍比稀釋法:取12只無菌試管，每管預先加入1.8ml支原體選擇性液體培養基
PCR 測定支原體
實驗材料 Taq DNA多聚酶引物陽性對照DNA脫氧核苷三磷酸混合物三磷酸瓊脂糖1.3%TAE膠試劑、試劑盒 磷酸緩沖鹽溶液液Tris醋酸EDTA6×加樣緩沖液引物儲備液儀器、耗材 DNA抽提和純化系統基質的DNA抽提試劑盒熱循環儀實驗步驟 一、DNA 標本的收集和制備1. 需要檢測支原體污染的細胞
熒光檢測支原體
實驗方法原理在無抗生素情況下，至少將細胞培養一周，將培養上清轉移至處于對數生長早期的指示細胞中，孵育 3~5d ，將細胞固定和染色，尋找細胞核之外的熒光。實驗材料來自于7天單層培養的無抗生素的細胞培養上清液或經離心后的上清液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
支原體的檢測
實驗材料 細胞儀器、耗材 培養瓶載物片蓋片顯微鏡實驗步驟 1. ?標本制備用尖鑷子從培養瓶中直接取出預先置入的支持物（長形蓋片；24 小時前置入），令細胞面向上，置放在載物片上，再覆以24 mmX 36 mm的較大蓋片；如不用支持物培養法，也可取少許培養液滴在載物片上，再覆以蓋片法觀察亦可。2. ?
支原體標本采集
?? 1．標本采集? ? 男性：用無菌棉拭子插入尿道約2cm處旋轉，靜止數秒鐘后取材。? ? 女性：支原體標本抹去宮頸口粘液，用無菌拭子插入宮頸管l－2cm旋轉取材。? ? 尚可用前列腺液、精液、尿液離心沉淀物作標本。? ? 2．接種?? ? 將標本洗入Uu或Mh液體培養基，或用濾菌器過濾接種。?
支原體的計數
支原體的計數不像一般的細菌采用一般的比濁法，因為支原體在液體培養基中的生長是澄清透明的，所以一般的比濁法無法用于支原體的計數！要采用CCU（即顏色改變單位法）！其原理在于通過支原體在液體培養基中的代謝活力為指標，來檢測支原體的相對濃度！具體做法：取12只無菌小試管，每管中加入1。8毫升的支原體液體培