斑點雜交技術的方法和步驟
斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然后與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由于目的序列未與非目的序列分離,不能了解目的序列的長度。尤其當本底干擾較高時,難以區分目的序列信號和干擾信號。1、材料：待分析的DNA或RNA樣品，已標記的探針。2、設備：狹槽點樣器，真空泵，恒溫水浴，真空烤箱等。3、試劑：（1）100% 甲酰胺。（2）甲醛(37%)。（3） 20×SSC。（4）0.1mol/L NaOH。（5）硝酸纖維素濾膜。（6）濾紙。4、操作步驟：(1) 10μl樣品與20μl 100%甲酰胺、 7μl 37%甲醛、2μl 20×SSC混合。混合置于68℃，15分鐘后置冰浴中。(2) 用0.1mol/L NaOH清洗點......閱讀全文
斑點雜交技術的方法和步驟
斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然后與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由于目的
DNA斑點雜交方法步驟
①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用鉛筆在濾膜上標好位置，將DNA點樣于膜上，每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。④將膜烘干，密封保存備用。
分子雜交技術斑點雜交的操作步驟
(1) 10μl樣品與20μl 100%甲酰胺、 7μl 37%甲醛、2μl 20×SSC混合。混合置于68℃，15分鐘后置冰浴中。 (2) 用0.1mol/L NaOH清洗點樣器,再用無菌水充分沖洗。將一張經20×SSC浸潤的濾紙鋪在點樣器上,上面再鋪上一張經20×SSC浸潤1小時的硝酸纖維
斑點雜交技術的方法介紹
斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-D
斑點雜交的技術特點和應用
斑點雜交是指將待測的DNA變性后點加在硝酸纖維素膜（或尼龍膜、NC膜）上，用已標記的探針進行雜交，洗膜（除去未接合的探針），放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強度，主要用于基因缺失或拷貝數改變的檢測。
斑點雜交的DNA斑點雜交方法
①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用鉛筆在濾膜上標好位置,將DNA點樣于膜上,每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。④將膜烘干，密封保存備用。
斑點雜交的技術特點
斑點雜交是指將待測的DNA變性后點加在硝酸纖維素膜（或尼龍膜、NC膜）上，用已標記的探針進行雜交，洗膜（除去未接合的探針），放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強度，主要用于基因缺失或拷貝數改變的檢測。
斑點雜交技術介紹
斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然后與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由于目的
Northern雜交技術的方法和步驟
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖
Southern雜交技術的方法和步驟
Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。(3)?預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。(4) 讓探針與
斑點雜交方法——優化抗原和抗體濃度
斑 點 雜 交 方 法——優 化 抗 原 和 抗 體 濃 度?對于一個給定的抗原，最佳的抗體濃度依賴的抗原和抗體本身。抗原和抗體的親和力，以及一抗與二抗的特異反應都是不同的。最優抗原和抗體濃度可通過免疫印跡實驗中使用不同濃度的抗原和抗體作用確定。另外，更快和更簡單的方法是進行斑點印跡實驗。以下是使用
斑點雜交方法——優化抗原和抗體濃度
對于一個給定的抗原，最佳的抗體濃度依賴的抗原和抗體本身。抗原和抗體的親和力，以及一抗與二抗的特異反應都是不同的。最優抗原和抗體濃度可通過免疫印跡實驗中使用不同濃度的抗原和抗體作用確定。另外，更快和更簡單的方法是進行斑點印跡實驗。以下是使用超敏感信號底物進行的斑點印跡的操作方法。注：所有的抗體稀釋度假
斑點雜交的方法介紹
斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-D
斑點雜交的方法介紹
斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-D
斑點雜交方法的介紹
斑點雜交是指將待測的DNA變性后點加在硝酸纖維素膜（或尼龍膜、NC膜）上，用已標記的探針進行雜交，洗膜（除去未接合的探針），放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強度，主要用于基因缺失或拷貝數改變的檢測。 斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。
RNA斑點雜交方法
每個樣品至多加10μg總RNA（經酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化），方法是將RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯（DEPC）水，加5μl?甲醛/SSC緩沖液（10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA變性，然后取5-8μl點樣于處理好的濾膜上，烘干。
DNA斑點雜交方法
①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用鉛筆在濾膜上標好位置，將DNA點樣于膜上，每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。④將膜烘干，密封保存備用。
關于斑點雜交的方法介紹
斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri
完整細胞斑點雜交方法
應用類似檢測細菌菌落的方法，可以對細胞培養物的特異序列進行快速檢測，將整個細胞點到膜上，經NaOH處理，使DNA暴露、變性和固定，再按常規方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本，因為它使細胞直接
完整細胞斑點雜交方法
應用類似檢測細菌菌落的方法，可以對細胞培養物的特異序列進行快速檢測，將整個細胞點到膜上，經NaOH處理，使DNA暴露、變性和固定，再按常規方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本，因為它使細胞直接
DNA斑點雜交方法簡介
①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。 ②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。 ③用鉛筆在濾膜上標好位置，將DNA點樣于膜上，每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。 ④將膜烘干，密封保存備用。
完整細胞斑點雜交方法
應用類似檢測細菌菌落的方法，可以對細胞培養物的特異序列進行快速檢測，將整個細胞點到膜上，經NaOH處理，使DNA暴露、變性和固定，再按常規方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本，因為它使細胞
DNA斑點雜交方法（二）
核酸雜交法檢測病原微生物 核酸雜交技術是根據兩條互補的核苷酸單鏈可以雜交結合成雙鏈的原理所建立，用一段已知序列的放射性或非放射性標記的核苷酸單鏈做探針，與待檢標本中的DNA雜交來探查待檢標本中有無與之相互補的核酸。該方法特異性高，但敏感性低于PCR方法。 本實驗學習用非放射性標記物-地高辛(DI
RNA斑點雜交方法介紹
與上法類似，每個樣品至多加10μg總RNA（經酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化），方法是將RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯（DEPC）水，加5μl?甲醛/SSC緩沖液（10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA變性，然后取5-8μl點樣于處理好的濾膜上，烘干。
DNA斑點雜交方法（一）
斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot，它們有許多孔，樣品加到孔中，在負壓下
細胞親和層析的技術方法和步驟
DNA親和層析是利用親和層析的原理與技術分離能與特定DNA序列相互作用的技術方法。總的過程包括兩步，即：一、將某一類細胞中所有的蛋白質過含有該類細胞各種片段的DNA層析柱，用低濃度鹽溶液洗去不與DNA作用的絕大多數蛋白，用中濃度鹽溶液洗脫大部分與能DNA相互作用的蛋白。二、將第一步得到的能與DNA相
菌落原位雜交技術的方法和步驟
對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。1、材料：待檢測的細菌平皿，已標記好的探針，硝酸纖維素濾膜等。
關于RNA斑點雜交方法的介紹
與上法類似，每個樣品至多加10μg總RNA（經酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化），方法是將RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯（DEPC）水，加5μl 甲醛/SSC緩沖液（10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA變性，然后取5-8μl點樣于處理好的濾膜上，烘干。
關于DNA斑點雜交方法的介紹
①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。 ②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。 ③用鉛筆在濾膜上標好位置，將DNA點樣于膜上，每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。 ④將膜烘干，密封保存備用。
分子雜交技術斑點雜交的實驗簡介
斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然后與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由于