磷酸化修飾蛋白質組學共性關鍵技術研究獲突破
近日，廣東省農業科學院農業生物基因研究中心晏石娟團隊聯合加拿大約克大學、德國馬普分子植物生理研究所等研究人員在磷酸化修飾蛋白質組學共性關鍵技術研發方面取得重大突破，首次搭建全自動在線磷酸化蛋白質組學分析技術平臺，解決了磷酸化蛋白質組學研究的一大瓶頸。相關研究以農業生物基因研究中心為第一完成單位在線發表于Green Chemistry。 可逆的翻譯后磷酸化修飾在蛋白質活性調節中起重要作用，參與調控多種生命過程。因此，對磷酸化修飾的全局表征和定量分析將有助于我們深入理解胞內代謝調控的分子機制。近十年來，液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）由于高靈敏度、高通量的優勢，已成為蛋白質組學研究的核心工具。 然而，由于磷酸化肽的豐度極低、電離效率差以及受非磷酸化肽的信號抑制，使得質譜無法直接分析磷酸化蛋白質組，在質譜分析前對磷酸化肽進行選擇性富集這一環節非常關鍵。迄今已報道多種富集材料，提供了微球、磁性顆粒、微量離心柱等多種應用形式的......閱讀全文
蛋白質磷酸化
Tyrosine Kinase Assay Using Synthetic Peptides?(T. Miller)Small synthetic peptide substrates are especially well suited for applications such as assay
蛋白質磷酸化的測定實驗
代謝標記 X射線片放射自顯影檢測32P標記的蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
Western Blot蛋白質磷酸化操作小貼士
WB 是檢測和定量磷酸化蛋白質的重要實驗方法，然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時候，會特別沮喪。在此給大家列出幾點小建議，希望能幫助您改善一下實驗結果。1、樣本是否表達：查閱資料或通過預實驗確定。2、對照設置：陽性和陰性對照。總蛋白抗體對照，對于特定時間的特定樣
Western Blot蛋白質磷酸化操作小貼士
WB 是檢測和定量磷酸化蛋白質的重要實驗方法，然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時候，會特別沮喪。 Azure君在此給大家列出幾點小建議，希望能幫助您改善一下實驗結果。 1、樣本是否表達： 查閱資料或通過預實驗確定。 2、對照設置：
蛋白質磷酸化最重要的機制
蛋白質磷酸化是調節和控制蛋白質活力和功能的最基本、最普遍，也是最重要的機制。蛋白質磷酸化主要發生在兩種氨基酸上，一種是絲氨酸(包括蘇氨酸)，另一種是酪氨酸。這兩類酸磷酸化的酶不一樣，功能也不一樣，但也有少數雙功能的酶可以同時作用于這兩類氨基酸，如MEK(促絲裂原活化蛋白激酶激酶mitogen-a
蛋白質磷酸化的最重要的機制
蛋白質磷酸化是調節和控制蛋白質活力和功能的最基本、最普遍，也是最重要的機制。蛋白質磷酸化主要發生在兩種氨基酸上，一種是絲氨酸(包括蘇氨酸)，另一種是酪氨酸。這兩類酸磷酸化的酶不一樣，功能也不一樣，但也有少數雙功能的酶可以同時作用于這兩類氨基酸，如MEK(促絲裂原活化蛋白激酶激酶mitogen-act
磷酸化蛋白質組學研究獲進展
中科院大連化物所生物技術部1809組封順、葉明亮、鄒漢法等人關于新型金屬離子固定化親和色譜固定相應用于磷酸化蛋白質組學的研究成果(Immobilized Zirconium Ion Affinity Chromatography for Specific Enrichment of Phosphop
蛋白質磷酸化的測定實驗—代謝標記
實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶實驗步驟1. 用 60 mm 或 100 mm 培養瓶，在完全培養基中培養細胞至所希望的密度。2. 用預熱的低磷酸培養基（無放射性磷酸鹽）沖洗兩次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培養基（50~100 μmol/L 無機磷酸）。3. 培養結束后，回收?
蛋白質磷酸化研究的相關方法節選
對于信號轉導科研來說，抗酪氨酸磷酸化抗體的出現是一個意義重大的事件。在沒有抗酪氨酸磷酸化抗體之前，蛋白質和酶的酪氨酸磷酸化只能通過非常危險的并且很費時的放射性實驗來檢測。而利用抗酪氨酸磷酸化抗體，則可以通過Western Blot或其它免疫學方法輕松地檢測到磷酸化信號。常規的檢測方法包括：用抗酪
蛋白質磷酸化的最重要的機制
蛋白質磷酸化是調節和控制蛋白質活力和功能的最基本、最普遍，也是最重要的機制。蛋白質磷酸化主要發生在兩種氨基酸上，一種是絲氨酸(包括蘇氨酸)，另一種是酪氨酸。這兩類酸磷酸化的酶不一樣，功能也不一樣，但也有少數雙功能的酶可以同時作用于這兩類氨基酸，如MEK(促絲裂原活化蛋白激酶激酶mitogen-act
蛋白質磷酸化調控基因表達的機制
組蛋白的磷酸化一般導致對應區域基因表達的上調。表觀遺傳調控包括DNA甲基化，組蛋白修飾（磷酸化，乙酰化，甲基化等）和小RNA調節，是在DNA序列的基礎上對基因表達的調節，是細胞分化的本質。如果除去表觀遺傳調控，人體各個細胞應該是一樣的，但是組蛋白修飾在DNA復制過程中不但可以被復制，也可以在相應蛋白
蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析慢性腎病并...（一）
蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析慢性腎病并發高血壓的病理機制慢性腎病病人一般會出現很多的并發癥，其中大多數腎損傷晚期病人都患有嚴重的高血壓。鹽是慢性腎病和高血壓發病的主要致病因素之一，但其中的病理機制仍然不清楚。本文利用蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析的技術，對慢性腎病并發高血壓的病理機制進行了全面
蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析慢性腎病并...（二）
Figure 2. Quantification and Gene Ontology analysis ofdifferentially phosphorylated peptides and proteins in (5/6Nx + NS)/(Sham + NS)and (5/6Nx +
非標記蛋白質的磷酸化作用分析實驗
免疫印跡分析 化學發光法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質樣品 試劑、試劑盒
磷酸化蛋白質組鑒定技術路線及經典案例
蛋白質翻譯后修飾（PTMs）幾乎參與了細胞所有正常生命活動的過程，并發揮十分重要的調控作用。蛋白修飾已經成為國際上蛋白質研究的一個極其重要的領域，目前研究比較成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。蛋白質磷酸化是生物體中最常見、最重要的一種蛋白質翻譯后修飾方式，它可以通過激發、調節諸多信號通路進而
蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析慢性腎病并發高血壓
慢性腎病病人一般會出現很多的并發癥，其中大多數腎損傷晚期病人都患有嚴重的高血壓。鹽是慢性腎病和高血壓發病的主要致病因素之一，但其中的病理機制仍然不清楚。本文利用蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析的技術，對慢性腎病并發高血壓的病理機制進行了全面系統性的分析。 Proteomic and p
蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析慢性腎病并發高血壓
慢性腎病病人一般會出現很多的并發癥，其中大多數腎損傷晚期病人都患有嚴重的高血壓。鹽是慢性腎病和高血壓發病的主要致病因素之一，但其中的病理機制仍然不清楚。本文利用蛋白質組和磷酸化蛋白質組聯合分析的技術，對慢性腎病并發高血壓的病理機制進行了全面系統性的分析。 Proteomic and p
利用植物蛋白質芯片研究蛋白磷酸化實驗
實驗材料：異丙基 β-D-硫代半乳糖苷 ? ? ?? 試劑、試劑盒：非變性裂解液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?非變性洗滌液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
用蛋白質組學方法繪制磷酸化位點圖譜
方案1 用帶有 Fe(Ⅲ) 和 Ga(Ⅲ)的 IMAC 純化磷酸化多肽 方案2 在 MALDI 分析之前或之后對磷酸化多肽進行堿性磷酸酶處理 方案3 結合固定化金屬離子親和介質和 MALDI-TOF-MS 直接分析方法對磷酸化多肽進行特征分析實驗 方
磷酸化蛋白質組鑒定技術路線及經典案例介紹
今天，小編跟您聊聊磷酸化蛋白質組鑒定！ 蛋白質翻譯后修飾（PTMs）幾乎參與了細胞所有正常生命活動的過程，并發揮十分重要的調控作用。蛋白修飾已經成為國際上蛋白質研究的一個極其重要的領域，目前研究比較成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。 蛋白質磷酸化是生物體中最常見、最重要的
利用植物蛋白質芯片研究蛋白磷酸化實驗
實驗材料異丙基 β-D-硫代半乳糖苷試劑、試劑盒非變性裂解液非變性洗滌液非變性洗脫液苯甲基磺酰氟儀器、耗材超聲勻漿器聚丙烯柱實驗步驟3.1 非變性條件下重組激酶的純化用于磷酸化篩選的激酶必須是可溶和有活性的，且無其他激酶參雜的純化激酶。因此，我們可以從 cDNA 表達文庫中，大量生產和純化組氨酸標記
細胞外囊泡中磷酸化蛋白質組學研究
蛋白磷酸化水平的變化可指針疾病的變化，但卻鮮有磷酸化蛋白被開發成為疾病診斷標記物。細胞外囊泡是由膜封閉的微環境，不受外界蛋白酶和其他酶的影響。這使得細胞外囊泡在體液中高度穩定，為開發磷酸化蛋白應用于醫學診斷提供了契機。今天為大家介紹一篇細胞外囊泡中磷酸化蛋白相關的文章：Phosphoproteins
利用植物蛋白質芯片研究蛋白磷酸化實驗
實驗材料?異丙基 β-D-硫代半乳糖苷試劑、試劑盒?非變性裂解液非變性洗滌液非變性洗脫液苯甲基磺酰氟儀器、耗材?超聲勻漿器聚丙烯柱實驗步驟 3.1 非變性條件下重組激酶的純化用于磷酸化篩選的激酶必須是可溶和有活性的，且無其他激酶參雜的純化激酶。因此，我們可以從 cDNA 表達文庫中，大量生產和純
大連化物所等對磷酸化蛋白質組分析方法研究
近日，中國科學院大連化學物理研究所生物分離分析新材料與新技術研究組（1809組）鄒漢法、葉明亮等在磷酸化蛋白質組分析新方法研究方面取得新進展。該團隊與加拿大西安大略大學教授李順成研究團隊利用生物分子之間的特異性識別作用建立了一種非抗體的酪氨酸磷酸化肽段富集新方法，顯著提高了酪氨酸磷酸化蛋白質組的分析
分子生物學蛋白質磷酸化分析技術
在所 有 的 翻譯后修飾中，可逆的磷酸化，幾乎調節著生命活動的整個過程，包括細胞的增殖、發育和分化，神經活動，肌肉收縮，新陳代謝，腫瘤發生等。據統計，哺乳動物細胞內有三分之一以上的蛋白質可以被磷酸化川，蛋白質的可逆磷酸化使得蛋白質組學研究更為復雜。 真核 生 物 細胞蛋白質中主要的磷酸化氨基酸為絲氨
分子生物學蛋白質磷酸化分析技術
在所 有 的 翻譯后修飾中，可逆的磷酸化，幾乎調節著生命活動的整個過程，包括細胞的增殖、發育和分化，神經活動，肌肉收縮，新陳代謝，腫瘤發生等。據統計，哺乳動物細胞內有三分之一以上的蛋白質可以被磷酸化川，蛋白質的可逆磷酸化使得蛋白質組學研究更為復雜。 真核 生 物 細胞蛋白質中主要的磷酸化氨基酸為絲氨
蛋白質磷酸化—X射線片放射自顯影檢測32P標記的蛋白質
實驗材料樣品試劑、試劑盒凝膠儀器、耗材Whatman 3MM 濾紙實驗步驟1. 單向或雙向凝膠電泳分辨?32P 標記的樣品。2. Whatman 3MM 濾紙上或者兩張塞璐玢膜（Bio-Rad) 之間吸干凝膠。用放射性墨水在凝膠邊緣標幾個點。3. 完全黑暗或安全光（用柯達 GBX-2 或 6B 濾光