三篇NatureMethods：定位基因組的調控序列
科學家們利用染色質對DNase消化和Tn5轉座的敏感性，對基因組的調控序列進行定位和解讀。 近來越來越多的證據顯示，許多遺傳學差異并非直接影響基因，而是改變控制基因開/關的調控序列。近期Nature Methods雜志上發表了三篇文章，介紹了在基因組中定位調控序列的新技術，闡述了進行數據分析時面臨的主要問題。 活化的調控序列上結合有轉錄因子，轉錄因子是識別特定DNA序列的蛋白。一旦轉錄因子結合，就會招募其他蛋白，使附近的基因開始轉錄。在指定細胞中鑒定所有活躍的調控序列，對于理解基因組的作用機制非常重要。 常用的染色質免疫沉淀法，直接檢測與轉錄因子結合的DNA序列。這種方法一次只能提供一個轉錄因子的信息，而細胞中可能有數百個轉錄因子處于活躍狀態。 染色質由一系列盤繞著DNA的核小體組成。轉錄因子與基因組結合時，取代了核小體的位置，暴露出DNA，使其對酶的切割更為敏感。在此基礎上，人們可以利用染色質對......閱讀全文
逆轉錄PCR(RT-PCR)擴增基因特異片段
逆轉錄PCR(RT-PCR)擴增基因特異片段 一、實驗原理RT-PCR是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成?cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平，細胞中R
目的基因片段與載體連接
實驗概要本實驗介紹了目的基因片段與載體連接的操作步驟，有助于學會DNA片段的體外連接技術。實驗原理在Mg2 和ATP存在下，T4 DNA連接酶能催化載體分子的粘性末端與外源DNA的相同粘性末端聯接成重組DNA分子。主要試劑1. T4 DNA 連接酶2. 連接酶緩沖液3. 無菌ddH2O主要設備1.
目的基因片段與載體連接
1．目的學會DNA片段的體外連接技術。2．原理在Mg2+和ATP存在下，T4 DNA連接酶能催化載體分子的粘性末端與外源DNA的相同粘性末端聯接成重組DNA分子。3．器材旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml 微量離心管，雙面微量離心管架，臺式離心機，干式恒溫氣浴。易生物儀器庫：http
PNAS：片段篩選發現HIV逆轉錄酶抑制劑
近日，來自澳大利亞的科學家在國際學術期刊PNAS發表了一項最新研究進展，他們通過研究發現了三種針對HIV-1逆轉錄酶的片段化抑制劑，能夠有效抑制HIV-1逆轉錄酶活性，為HIV-1預防和治療藥物開發提供了重要信息。 基于片段篩選的方法可用于發現新的活性位點或變構抑制劑以進行治療干預。在該項研究
基因轉錄因子的相關介紹
轉錄因子(transcription factor)是起調控作用的反式作用因子。轉錄因子是轉錄起始過程中RNA聚合酶所需的輔助因子。真核生物基因在無轉錄因子時處于不表達狀態，RNA聚合酶自身無法啟動基因轉錄，只有當轉錄因子(蛋白質)結合在其識別的DNA序列上后，基因才開始表達。轉錄因子的結合位點
關于基因轉錄的基本介紹
基因轉錄是在細胞核和細胞質內進行的。它是指以DNA的一條鏈為模板，按照堿基互補配對原則，在RNA聚合酶作用下合成RNA的過程。基因轉錄有正調控和負調控之分。 如細菌基因的負調控機制是當一種阻遏蛋白(repressor protein)結合在受調控的基因上時，基因不表達；而從靶基因上去除阻遏蛋白
基因表達的轉錄機制介紹
轉錄過程由RNA聚合酶（RNAP）進行,以DNA為模板,產物為RNA。RNA聚合酶沿著一段DNA移動,留下新合成的RNA鏈。 基因組DNA由兩條反向平行和反向互補鏈組成,每條鏈具有5'和3'末端。這兩條鏈分別稱為“模板鏈”（產生RNA轉錄物的模板）和“編碼鏈”（含有轉錄本序列的
PCR擴增樣本DNA的HLA基因片段
一、PCR擴增體系1. 1.0uM 引物2. 300ng待測樣本基因組DNA3. 2.0U Taq多聚酶4. 200uM 各種dNTP5. 用1 X PCR緩沖液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.01%明膠）調至總體積100ul，并用50ul礦物
小片段法進行基因分型（二）
結果：??????? 圖1顯示的是校正之前的完整的熔解峰顯示。 從低溫和高溫內標及擴增子熔解的中部區分熔解信號。圖1：派生熔解曲線顯示校準和擴增子的熔解峰。左邊和右邊的峰是校準內標的峰。94的熔解剖面圖，接近76℃，從獨立的PCR反應中生成。校準分子沒有對其，純合子的擴增峰沒有清楚的分開。中部最窄且
小片段法進行基因分型（一）
摘要：????? 背景：用于基因分型的高分辨率熔解曲線技術既簡單又有效。在以熔解為基礎的方法中，探針法是基因分型的黃金標準，可以將等位基因與目標的匹配完全區分開。小片段基因分型法是代替探針的基因分型法。異源雙鏈核酸分子的存在使得檢測純合子變得容易，其熔解峰的形狀有明顯的改變。純合子G/C或A/T的基