【分享】siRNA轉染成功的主要關鍵

　　siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素，細胞轉染實驗中經常會遇到siRNA轉染，下面介紹一下siRNA轉染成功的主要關鍵點。

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　　 1.設計合成有效的siRNA

　　 RNAi的核心需要siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。siRNA的設計合成首先很重要，最優的設計可以用最小的工作濃度取得滿意的沉 默效果，減少副反應的發生。siRNA的設計可以通過檢索,優先選用經過驗證的siRNA或設計多對siRNA。需要強調的是，需要同時設置陰性對照以排 除非特異沉默現象和陽性對照以確認整個實驗體系的有效性。

　　 2.合成的siRNA注意純度和工作濃度

　　 siRNA的合成需要注意的是一定要選用高純度的siRNA，siRNA的純度直接關系到轉染效率和沉默效率。siRNA的工作濃度和siRNA的設計、細胞種類、目標基因有關。建議一定進行相關的預實驗優化各條件。

　　 3.選擇合適的siRNA轉染試劑

　　 選擇合適的siRNA轉染試劑是的RNAi實驗成功另一個關鍵。由于細胞毒性對siRNA實驗的影響非常大，可以直接影響實驗結論和結果，所以一定選擇低毒性的轉染試劑，看一個轉染試劑毒性是否低，有一個簡單的方法，看轉染的過程和要求，比如要 求的細胞密度越大，說明毒性越大，比如轉染復合物容許和細胞孵育的時間越短，說明毒性越大。除了低毒性，還最好操作簡便，越簡單越好，比如有的轉染試劑要 求轉染前換無血清培養基或低血清培養基，轉染后又要有血清培養基，實際上，由于培養條件的頻繁變化，可能會對細胞表達模式產生影響，對后續的mRNA和蛋 白分析也同樣產生影響，最終影響實驗的可靠性。