| 實驗步驟 |
方法1:利用液體處理自動機械工作平臺從20ul全血中進行基因組DNA的高產率分離
這個方法用于對在液體處理自動機械，如BiomekFX和Biomek2000實驗自動工作平臺（BeckmanCoulter)上安裝的96孔板內的20ul血液樣品進行處理。如果用單頭的設備對單個板進行處理，所需的時間還不到lh。
將血液與去垢劑-促溶劑、裂解/結合緩沖液混合，既可以破壞細胞及其核膜，又可以使
蛋白質變性。釋放出的DNA被吸附在裂解/結合緩沖液中的MagneSil顆粒表面，而粘有靶復合體的磁珠被外部磁場捕獲到樣品板孔的側面，隨后裂解液作為廢液而被去除。殘留的污染物經下面的一系列洗滌過程被去除：首先用裂解/結合緩沖液，然后用鹽洗滌液，最后用乙酵/鹽洗滌液以除去最后殘留的微董亞鐵血紅素。磁珠干燥后，在一個傳熱板上用TE緩沖液或水來洗脫DNA。
一、材料
1.特殊的設備
3臺單位置的實驗用自動定位器（BeckmanCoulter)
4套P250盒裝吸頭（BeckmanCoulter)
4X4位置實驗用自動定位器（BeckmanCoulter)
96孔收集板（Promega,A9161或類似產品）
96孔吸頭洗滌自動實驗用定位器（BeckmanCoulter)
裝有單艙和一個96孔移液器頭的BiomekFX自動機械工作平臺（BeckmanCoulter)
深孔MagnaBot96孔磁性分離裝置（Promega)
深孔多孔板（Marsh,AB-0932[2.2ml]和AB-0787[1.2ml]或類似產品）
傳熱板（Promega,Z3271或類似產品）.
加熱和冷卻自動實驗用定位器（BeckmanCoulter)
MagnaBot邊條，l/8in(lin=2.54cm)(Promega)
回旋振蕩式自動實驗用定位器（BeckmanCoulter)
底部為錐形的96孔儲液器（InnovativeMicroplates，S30014或類似產品）
吸頭裝卸自動實驗用定位器（BeckmanCoulter)
2.其他
MagneSil血液基因組高產董系統（Promega;該系統包括乙酵洗海液、抗泡沫試劑、裂
解緩沖液、鹽洗滌液、洗脫緩沖液和MagneSil順磁性顆粒）
3.細胞和組織
全血、口腔涂片或樣品污染物
二、方法
1.將400ul裂解緩沖液和40ulMagneSil顆粒加到200ul血樣中，利用劇烈的機械混合裂解白細胞，并使釋放出的DNA與磁性顆粒（PMP)結合。
2.用MagnaBot磁場捕獲顆粒，棄去液體。
3.用360ul裂解緩沖液徹底洗滌PMP。
4.用MagnaBot磁場捕獲顆粒，棄去液體。
5.用360ul鹽緩沖液徹底洗滌PMP。
6.用MagnaBot磁場捕獲顆粒，棄去液體。
7.重復步驟5和6，使鹽洗滌的總次數達到2次。
8.用360ul乙醇洗滌緩沖液徹底洗滌PMP。
9.用MagnaBot磁場捕獲顆粒，棄去液體。
10.重復步驟8和9，使乙酵洗滌緩沖液洗滌的總次數達到3次。
11.在一個加熱塊上干燥PMP以除去所有殘留的乙醇洗滌緩沖液。
12.在80°C加熱塊上與210ul洗脫緩沖液劇烈混合以洗脫DNA。孔內溫度約為65°C。
13.將洗脫出的DNA儲存于-20°C。
方法2:從污染物和口腔涂片中分離基因組DNA的DNAIQ分離法
DNAIQ分離系統利用了一種嶄新
的DNA分離方法。利用MagneSil化學可以對多種樣品中一定量的DNA進行捕獲和釋放。顆粒有一定攜帶DNA的能力，若DNA過多則只能結合一定董
的核酸（圖9-6)。因此，通常此方法用于分離約l00ngDNA的實驗，而不必考慮樣品量的大小。用 100ul 洗脫緩沖液洗脫 DNA
使其終濃度達到 lng/ul。結果由該方法分離到的 DNA 不需要進行純化后的定量。圖 9-7 給出了這個方案的流程。
一、材料
1.緩沖液、溶液和試劑
二硫蘇糖酵（DTT)，lmol/L
乙醇，95%?100%
異丙醇
裂解緩沖液
確定使用裂解緩沖液的總量（表9-3)。毎100ul裂解緩沖液（隨DNAIQ系統一起提供）中加入1ul 1moL/L的DTT，顛倒數次使其混合，標記已加有DTT并注明日期。裂解緩沖液在室溫下儲存不得超過1個月。
2. 特殊設備
抗氣溶膠的微量吸頭
DNAIQ 離心架筐（Promega,V1221)
加熱塊
MagneSphere 技術磁分離架（Promega)
微量離心管，1.5 ml 圓錐形（Promega，V1231)
3. 其他
DNAIQ 系統（Promega; 該系統包括樹脂、裂解緩沖液、2X 洗滌緩沖液和洗脫緩沖液）
微量離心管，1.5 ml(Promega，V1231)
二、方法
1. 將樣品（見表 9-3) 置于 1.5 ml 微量離心管中。切記：推薦用量的樹脂可捕獲 DNA 的最大量約為 l00ng。
2.
加適量備好的裂解緩沖液，不同樣品需用不同體積的裂解緩沖液，參見表 9-3 的第 2欄（裂解緩沖液 1) 以確定適合的用量。蓋上管蓋，將試管置于
95°C 加熱塊上放 30 min。對于小污斑，替代方法是將受污染材料置于一個裝有 1.5 ml 微量離心管的 DNAIQ
離心柱內，并向柱內加入 100?150ul 裂解緩沖液。小心蓋上管蓋，95°C 加熱 30 min#如果使用圖 9-7
中所示的微量離心管和離心柱，那么絕大部分的緩沖液將會留在離心管內，繼續進行第 4 步。若樣品所需裂解緩沖液的體積超過150ul,
不宜使用該方法。
3. 從加熱塊上移去試管，將裂解緩沖液和樣品轉移到 1.5 ml 微量圓錐形離心管內的離心柱中。為得到最大量的污染物應將裂解緩沖液與受污染的基質一起離心，這一點很重要。
4. 在室溫下以最大轉速離心 2 min, 移去離心柱。
5. 高速渦旋振蕩樹脂儲存瓶 l0s 使其徹底混合，將 7ul 樹脂加到 DNA 溶液中，加樹脂時要保持重懸狀態以獲得相同的結果。
6. 高速渦旋振蕩樣品/裂解緩沖液/樹脂混合物 3s，室溫下保溫 5 min。
7. 高速渦旋振蕩試管 2s, 將其置于磁架上將會立刻出現分離現象。
8. 小心移棄所有溶液，切勿破壞管側面上的樹脂。
9. 加入 100ul 裂解緩沖液，從磁架上移開試管，高速渦旋振蕩 2s。
10. 將試管重新放置到磁架上，移棄全部裂解緩沖液。
11. 加入 100ul1X 洗滌緩沖液，從磁架上移開試管，高速渦旋振蕩 2s。
12. 將試管重新放置到磁架上，移棄全部洗滌緩沖液。
13. 重復步驟 11 和 12 兩次，以使總洗滌次數達到 3 次，最后一次洗滌后要移棄所有溶液。
14. 打開試管蓋，在磁架上風干樹脂 5 min。
15. 加入 l00ul 洗脫緩沖液。
16. 蓋上管蓋，高速渦旋振蕩試管 2s, 將試管置于 65°C 5 min。
17. 從加熱塊上移開試管，高速渦旋振蕩 2s 后，立即將試管置于磁架上。
18. 將溶液轉移到新容器內，DNA 的濃度約為 1ng/ul，可以直接用于擴增反應。DNA 溶液可在 4°C短期儲存，或在-20°C 或-70°C 長期儲存。
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