糖尿病及其并發癥的實驗室檢測及方法學評價

（一）體液葡萄糖的檢測

    酶法為推薦使用的測定方法（如：己糖激酶法或葡萄糖氧化酶法）。

    1. 標本收集和貯存     

    大多數臨床實驗室采用血漿或血清測葡萄糖濃度，而大多數床旁測定葡萄糖的方法使用的是全血。使用不同的標本應采用不同的參考值。

    室溫下，血細胞中進行的糖酵解使血中葡萄糖減少，在獲得標本后應盡快測定。

    通過向標本中加碘乙酸鈉或氟化鈉可抑制糖酵解作用，使血葡萄糖在室溫下穩定3天。

    2. 已糖激酶法     

    （1）原理：在有已糖激酶(hexokinase)和Mg2+存在下，葡萄糖被ATP磷酸化為6-磷酸葡萄糖。在NADP+參與下，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶將6-磷酸葡萄糖氧化為6-磷酸葡萄糖酸，同時NADP+轉變為NADPH+H+。NADPH生成量與標本中葡萄糖含量成正比，可以在340 nm波長監測NADPH吸光度變化，定量葡萄糖。用從酵母中獲得的G-6-PD，需NADP+作為輔因子。如使用細菌來源的G-6-PD，則以NAD+作為輔因子，NADH的生成量也在340nm測定。

    （2）評價：該法準確度和精密度高，特異性高于葡萄糖氧化酶法，適用于自動化分析，為葡萄糖測定的參考方法。輕度溶血、脂血、黃疸、氟化鈉、肝素、EDTA和草酸鹽等不干擾本法測定。

    3. 葡萄糖氧化酶法

    （1）原理：葡萄糖氧化酶（glucose oxidase, GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫（H2O2），再加入過氧化物酶和色原性氧受體（如聯大茴香胺，4-氨基安替比林偶聯酚），生成有色化合物，比色定量。

    （2）評價：GOD高特異性催化β-D-葡萄糖。而葡萄糖α和β構型各占36%和64%。要使葡萄糖完全反應，必須使α-葡萄糖變旋為β-構型。某些商品試劑中含有變旋酶，可加速變旋過程。也可延長孵育時間，通過自發性變旋來轉化。過氧化物酶的特異性遠低于GOD。尿酸、維生素C、膽紅素、血紅蛋白，四環素和谷胱甘肽等可抑制呈色反應（通過與H2O2競爭色素原受體），用Somogyi過濾可以除去大部分干擾物質。

    4. 尿葡萄糖測定     

    尿糖檢測快速、廉價和無創傷性，適用于大規模樣本的篩選。

（二）酮體的檢測

    酮體（ketone  bodies）由乙酰乙酸、β-羥丁酸和丙酮組成。最主要的來源為游離脂肪酸在肝臟的氧化代謝產物。

    由于尿酮體檢測的方便性，已廣泛用于1型糖尿病的病情監測。

    尿酮體測定：Acetest和Ketostix法都適于對尿酮體的測定。其特異性和靈敏度與測定血清時相同。

（三）乳酸和丙酮酸的檢測

（四）糖化蛋白的檢測

    糖基化是指通過非酶促作用將糖基加到蛋白質的氨基酸基團上。測定糖化蛋白（glycated  protein）可為較長時間段的血糖濃度提供回顧性評估，而不受短期血糖濃度波動的影響。

    1. 糖化血紅蛋白     

    糖化Hb的形成是不可逆的，其濃度與紅細胞壽命（平均120天）和該時期內血糖的平均濃度有關，不受每天葡萄糖波動的影響，也不受運動或食物的影響，所以糖化Hb反映的是過去6~8周的平均血糖濃度，這可為評估血糖的控制情況提供可靠的實驗室指標。

    糖化Hb的測定方法的原理有多種：①根據電荷差異：離子交換層析，高效液相層析（HPLC），電泳和等電聚焦電泳：②根據結構差異：親和層析和免疫測定法；③化學分析：比色法、分光光度法。

    2．果糖胺     

    除了血紅蛋白，葡萄糖也可通過非酶促糖基化反應與其他蛋白（如清蛋白，膜蛋白，晶狀體）結合形成酮胺（ketoamine）。由于清蛋白的產生比血紅蛋白快（清蛋白半壽期約為20天），所以糖化清蛋白的濃度反映的是近2~3周血糖的情況，

    3．糖化終末產物

（五）尿清蛋白排泄試驗

    糖尿病患者有很高的腎臟損害風險。大約1/3的1型糖尿病者最終發展為慢性腎衰。常規檢查發現尿清蛋白排泄（urinary albumin excretion, UAE）的增加，持續性尿蛋白定性陽性（相當于尿清蛋白排泄率≥200μg/min），提示已有明顯的糖尿病性腎病。

（六）胰島素與胰島素抗體的檢測

    1．胰島素測定   

    2. 胰島素抗體    

    胰島素抗體檢測方法均為免疫學方法，如RIA、免疫親和層析法等。

（七）胰島素原的檢測

（八）C-肽的檢測

    測定C肽比胰島素有更多優點。因為肝臟的代謝可以忽略，所以與外周血胰島素濃度相比，C肽濃度水平可更好地反映β細胞功能。C肽不受外源性胰島素干擾且不與胰島素抗體反應。

（九）胰高血糖素的檢測