實驗方法原理
實驗材料 膽堿酯酶
試劑、試劑盒 Tris-HCl氯化乙酰膽堿氯化鎂NaOH
儀器、耗材 自動滴定器
實驗步驟
空白對照:保持 pH 7.4,持續記錄幾分鐘每次 0.01 mol/L 氫氧化鈉的用量。
樣品:加入酶溶液(例如 0.1~1 ml),保持 pH 7.4,并記錄 5 min 每次 0.01 mol/L 氫氧化鈉的用量。
計算 25℃ pH 7.4 時,每分鐘一個單位水解的 1 umol 乙酰膽堿。
注意事項
其他
試劑:
0.02 mol/L Tris-HCl,pH7.4
2.2 mol/L 氯化乙酰膽堿(Mr=181.7;40 g 溶于 100 ml 水中,碘化丁酰膽堿,Mr=301.2)
0.2 mol/L 氯化鎂(MgCl2·6H2O;Mr=203.3;4.1 g 溶于 100 ml 水中)
0.01 mol/L 氫氧化鈉標準溶液作為滴定劑,加入自動滴定器的滴管中
膽喊酯酶,溶于 H2O 中,1 mg/ml