質粒dna的轉化結果分析原理介紹

　　轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受體細胞一般是限制修飾系統缺陷的變異株，以防止對導入的外源的切割，用 R -M -符號表示。 此外，為了便于檢測，受體菌一般應具有可選擇的標記（例如抗生素敏感性、顏色變化等）。 但質粒 DNA 能否進入受體細胞則取決于該細胞是否處于感受態（competence）。所謂感受態是指受體細胞處于容易吸收外源 DNA 的一種生理狀態，可通過物理化學的方法誘導形成，也可自然形成（自然感受態）。 在基因工程技術中，通常是采用誘導的方法。 大腸桿菌是常用的受體菌，其感受態一般是通過用 CaCl2 在 0℃ 條件下處理細胞而形成，基本原理是： 細菌處于 0℃ 的 CaCl2 低滲溶液中，會膨脹成球形，細胞膜的通透性發生變化，轉化混合物中的質粒 DNA 形成抗 DNase 的羥基一鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，經 42 ℃ 短時間熱激處理，促進細胞吸收 DNA 復合物，在豐富培養基上生長數小時后，球狀細胞復原并分裂增殖，在選擇培養基上便可獲得所需的轉化子。