不同方法檢測乙肝的結果判讀建議及遵循原則

周建偉 濟寧醫學院附屬醫院檢驗科

    乙肝病毒感染的實驗室檢測方法主要有膠體金免疫層析法（GICA）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、化學發光法（CLA）以及熒光定量PCR（FQ-PCR）。現在，在同一實驗室中，往往存著這幾種方法的并存，或者不同實驗室使用的方法不同，這樣就容易造成結果的不一致。如果在某種情況下，同一個患者使用不同的方法檢測造成結果不一致，檢驗科或臨床怎么解釋呢？小編就此總結總結，供大家參考。

    1、GICA與ELISA、CLA

    GICA是一種快速、經濟的檢測方法，往往在大醫院急診或一些基層醫院作常規使用。由于試劑制備工藝、反應時間短、肉眼判讀有差異等的局限，該方法的特異性、敏感性均較低。故當發生該方法與ELISA、GLA不一致時，在標本無誤、重復檢測結果依舊的情況下，以后兩個方法的檢測結果為主要參考，解釋為方法學的局限性。

    2、ELISA與CLA

    目前，許多三級醫院都安裝了化學發光儀用于乙肝五項的定量檢測。相對于ELISA，CLA具有更高的敏感性和特異性。如果定量檢測的數值高于設定的參考值上限，而ELISA結果則陰性，這往往是檢測靈敏度的問題。CLA的靈敏度更高，所以具有較低的檢測限，而ELISA需要抗體或抗原達到一定的濃度時才能在OD值上呈現陽性的變化，故檢測限較高一些。這在開展定量檢測的檢驗科比較常見，尤其是定量檢測的五項指標往往出現一些罕見的模式，大約5%的幾率，就是這個原因。

    如果ELISA檢測的結果為陽性而CLA檢測的相應的指標低于參考值上限，那要考慮ELISA是否為假陽性，另一方面也可能是包被的抗原的不同或者是檢測的位點的不同，尤其是某些變異的乙肝病毒有可能其抗原決定簇發生變異而不能發生抗原抗體反應，從而影響結果檢測。

    3、五項指標檢測與HBV-DNA檢測

    無論是GICA，還是ELISA和CLA，都是檢測的血清中的抗原或抗體，而FQ-PCR檢測的是乙肝病毒DNA的量，這一點一定要明確。前三種方法檢測的抗原陽性，不一定HBV-DNA量就高；反之，FQ-PCR 檢測的HBV-DNA量高于參考范圍，其他三種方法檢測的HBsAg或HBeAg也不一定就呈陽性。從理論說一下大家就很明白了：乙肝病毒在組裝、增殖過程中，產生三種顆粒，即Dane顆粒、小球形顆粒和管形顆粒。Dane顆粒是完整的病毒體，包含HBV-DNA，而后兩者為病毒增殖過程中過剩的成分，含有HBsAg和HBeAg，但不含HBV-DNA。FQ-PCR檢測的HBV-DNA量與Dane顆粒的量近乎呈比例關系，但與小球形和管型顆粒不成比例關系；后兩者與HBsAg和HBeAg的濃度呈一定比例關系。說到這里，估計大家都明白了。

    所以，在乙肝病毒感染相關的實驗室檢測中，要注意遵循下面四個原則：

    第一，質控原則

    這是首先要保證的。結果不一致并進行科學解釋的前提是你的分析前、中、后的質控都是沒問題的；否則，錯誤的基礎上的一切討論都毫無意義。

    第二，檢測結果互不參考原則

    就是檢測五項指標的定性結果之間（GICA與ELISA）、定性與定量結果之間（GICA、ELISA與CLA）、五項指標結果與HBV-DNA定量結果之間（GICA、ELISA、CLA與FQ-PCR）不要相互參考，不要一種方法參考另一種方法來報告結果。比如，GICA與ELISA檢測結果不一致時，傾向于把GICA改成ELISA一致的結果；或者ELISA的結果參考CLA的結果進行報告，這都是不妥的。在實際過程中，估計還是有人這樣做的，僅僅是為了避免結果不好解釋；實際上，小編認為，不會解釋永遠不好解釋；避免不好解釋早晚會最終無法解釋，因為不可能所有的病人都同時檢測定性和定量吧？你總不會把定性和定量的同時檢測吧？你總不能避免患者在你這兒作定性檢測而在其他醫院作定量檢測吧？

    第三，不以一個結果否定另一個結果的原則

    我們都知道，方法學之間是有差異的，不同的檢測需要可以采用不同的方法。即使GICA具有特異性、靈敏度偏低的缺點，但它也有檢測速度快、經濟實用的有點；即使是CLA、FQ-PCR具有特異性、靈敏度高的優點，但也有檢測成本偏高、增加患者負擔的缺點。我們不能以形而上學的觀點，對凡與較先進的方法不一致的結果就認為是不可能甚至不正確的。理由有三：（一）不同檢測方法可能檢測的物質不同，在一定程度上沒有可比性；（二）不同的方法檢測的物質即使相同或相似，但尚沒有檢測的金標準，即沒有標桿去恒定，故不能盲目或經驗性地評判優劣；（三）以對錯判斷結果，不利于不同實驗室的認可與團結。如果有患者從別的醫院用GICA方法檢測的五項指標，這次到你這兒用的是CLA，你要是告訴患者或家屬說別的醫院查的不準，這容易制造矛盾，決不可為，況且這也是不科學的做法。

    第四，動態觀察的解釋原則

    在乙肝病毒感染的相關檢測結果解釋中，無論是檢驗還是臨床，都要遵循動態觀察的解釋原則。隨著CLA方法檢測五項定量的開展，少見甚至罕見乙肝五項的模式報告的越來越多，有些模式只是乙肝病毒感染后某個時期存在的，隨著病毒和機體免疫系統的“斗爭”，抗原或抗體水平可能會發生轉化或改變，則檢測的數值也會發生相應的變化。這部分內容已在11月11日【偉哥聊醫】中的“乙肝五項定量檢測罕見模式及實驗室處置參考”歸納，在此不再贅述。因此，要以動態觀察的原則進行科學、客觀的結果解釋。

    參考文獻
    趙廣德,劉勇.膠體金免疫試紙條(GICA)檢測乙肝HBsAg的方法學評價.中華微生物學和免疫學雜志, 2001; 21(Supl): 129.
    王淑春. 酶聯免疫吸附試驗檢測乙肝表面抗體陰性而電化學發光法檢測陽性二例報告.山西醫藥雜志, 2011; 40(10): 1042-1043.