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  • 發布時間:2020-09-14 22:08 原文鏈接: 原代細胞骨架的染色方法

    微絲的顯示方法步驟:
    1. 用液漂洗蓋片培養的原代細胞3次,每次30s;
    2. 用2%的甲醛/液固定原代細胞3min;
    3. 用0.5%的三硝基甲苯/處理3次,每次10min;
    4. 漂洗3次;
    5. 用羅丹明(rhodamine)標記的鬼筆環肽(phalloidin)(1:10)室溫中反應15min;
    6. 漂洗3次;
    7. 60%甘油+熒光防淬劑封片;
    8. 熒光顯微鏡觀察;

    微管的顯示方法:
    1. 用液漂洗蓋玻片的原代細胞3次,每次30s;
    2. 在室溫中用3%甲醛/固定20min;
    3. 用液再漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的液;
    4. 投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;
    5. 用漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的液;
    6. 向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體,令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上,覆以皿蓋,于37℃溫箱中放置45mimdash;1h;
    7. 向碟皿內勻速緩慢滴加,令蓋片浮起在液面,用鑷子夾出,按步驟3處理;
    8. 向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標記的二抗,其后操作按步驟6進行;
    9. 按步驟7和3操作;
    10.滴pH8.5的90%的甘油/少許于載玻片上,把小蓋片的原代細胞面覆在大蓋片上;
    11.將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察。

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