小鼠骨髓間充質干細胞的原代取材

實驗概要

小鼠骨髓間充質干細胞的原代取材

主要試劑

75%酒精、含2% SP（Pen Strep）的DPBS、間充質干細胞培養液

主要設備

眼科剪、眼科鑷、手術剪、手術鑷、5 mL注射器、10 mL注射器、7號針頭、400目細胞篩、15 mL離心管、3.5 cm培養皿

實驗步驟

①斷頸法處死小鼠，用手術器械完整地取下小鼠后腿的脛骨和股骨，放在75 %的酒精中浸泡 5min。
②用手術器械剔除骨膜以及肌肉等組織，然后將脛骨和股骨在含有2% SP的DPBS中洗兩遍。
③將脛骨或股骨的兩端軟骨剔除，用消毒針頭在骨的一端穿一個小孔，用吸有間充質干細胞培養液的5 mL注射器（7號針頭）沖出骨髓（可反復沖兩遍），過400目細胞篩，制成單細胞懸液。
④將所得的細胞懸液移入一個15 mL離心管中，室溫1 000 r/min離心10 min，棄掉上清液。
⑤用間充質干細胞培養液重懸細胞，按每3.5 cm培養皿2×10⁶個細胞的密度接種，標記為原代細胞（P₀）。
⑥置于37℃、5% CO₂、飽和濕度的培養箱中靜置培養。
⑦24h后更換新鮮的間充質干細胞培養液，去除未貼壁細胞。以后每2～3天更換1次培養液。
⑧待細胞長至80%～90%融合時傳代。