怎樣從總RNA中提取mRNA

大多數真核細胞mRNA的3’端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脫氧核糖核苷（OligoT）可以與之配對結合，這就是提取mRNA最基本的原理。具體到實驗手段上，現在磁珠法、纖維素柱層析法都有在用。
磁珠法一般是用生物素標記OligoT，親和素標記磁珠（生物素和親和素間具有高度親和力）。實驗時生物素標記的OligoT與mRNA的polyA高效雜交形成復合體，此復合體又與標有親和素的磁珠結合。用磁性分離架就可以將這堆復合物分離出來。最后用無RNase去離子水將mRNA從復合物中洗脫下來即可。
寡聚dT纖維素柱層析法的大致流程：總RNA流經寡聚dT纖維素柱時，在高鹽緩沖液中，帶polyA尾的mRNA被特異地結合在柱上。降低鹽濃度，mRNA被洗脫。一般過兩次柱后，就可得到較高純度的mRNA。
當然有些mRNA沒有polyA尾巴，這種就比較難辦了，我最近的實驗就是在對付這種東西。如果你是拿mRNA做RT-PCR，其實一般是不必分離mRNA的，設計好引物就可以用總RNA做了。