氨基轉移反應的定性鑒定
| 實驗方法原理 | 氨基移換酶也稱轉氨酶，它能催化α-氨基酸的氨基與α-酮酸的α-酮基互換，這種作用稱為氨基移換作用。它在生物體內蛋白質的合成與分解等中間代謝中，在糖、脂肪、蛋白質三類物質代謝的相互聯系、相互轉化上，都起著很重要的作用。任何一種氨基酸進行轉氨作用時，都由其專一的轉氨酶催化。它們的最適pH接近7.4。在各種轉氨酶中，以谷氨酸-草酰乙酸轉氨酶（簡稱谷草轉氨酶、GOT）及谷氨酸-丙酮酸轉氨酶（簡稱谷丙轉氨酶、GPT）活力最強。 |
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| 實驗材料 | 兔 |
| 試劑、試劑盒 | 磷酸緩沖液 谷氨酸溶液 丙酮酸溶液 碳酸氫鉀溶液 碘乙酸溶液 三氯醋酸溶液 丙氨酸溶液 標準谷氨酸溶液 水合茚三酮乙醇溶液 酚溶劑 |
| 儀器、耗材 | 解剖器具 離心機 恒溫水浴 干燥箱 臺秤 層析系統 |
| 實驗步驟 |
將兔擊暈，迅速解剖，取出肝臟，在低溫條件下剪碎。稱取勻漿后，離心取上清液，即為制備的酶液。體外氨基移換反應。紙上層析法檢查每人4個點（標準丙氨酸溶液、標準谷氨酸溶液、對照上清液、樣品上清液）。點樣放入層析罩內。用被酚所飽和的水溶液，平衡后，用帶小漏斗的玻璃管從層析罩上加飽合酚試劑25ml于層析缸內。然后，立即蓋緊塞子，當溶劑前沿達到距濾紙上端約2.5cm處，取出濾紙，晾干或吹干，以除去酚溶劑，噴灑0.1%茚三酮乙醇溶液，放入烘箱中顯色氨基酸與茚三酮反應，在濾紙上呈現紫紅色斑點。
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| 注意事項 |
1、取動物新鮮組織制備酶液，防止酶失活。 2、加碘乙酸抑制酶解作用。
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