病毒性心肌炎患者血漿外泌體生物標志物研究進展

　　病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）是由多種病毒感染引起心肌炎癥病變，該疾病臨床確診比較困難，到目前為止，心內膜活檢仍然是VMC確診的金標準，由于心肌活檢難度大，并且存在創傷風險，導致其在臨床上不能廣泛開展。有研究報道，血液外泌體可能在柯薩奇B病毒引起的VMC發病的病理生理機制中扮演重要角色。通過比較心血管疾病患者血漿外泌體差異蛋白質組，有可能篩選出隱藏的生物學信息，這將為尋找敏感特異的生物標志物及新的藥物靶點提供新的思路。

　　河南省人民醫院心內科趙宗磊等分別收集河南省人民醫院（2016年1月至2017年12月）Control組健康人及VMC組患者血漿標本各50份，按照隨機數字表法選取Control組（n=5）與VMC組（n=5）空腹血漿標本各1 ml，分別利用超速離心法提取血漿外泌體后，采用差異凝膠雙向電泳（DIGE）技術進行蛋白質分離，經差異分析軟件處理后，采集VMC組和Control組之間差異>2倍的蛋白質點，通過應用基質輔助激光解吸電離-飛行時間/飛行時間質譜（MALDI-TOF/TOF MS）對差異蛋白點進行鑒定。各組隨機采取40份血漿外泌體標本，采用VMC特異性差異蛋白進行酶聯免疫吸附實驗（ELISA）驗證。分析健康對照組（Control組）與病毒性心肌炎組（VMC組）血漿外泌體中的差異蛋白質組，篩選可能與VMC早期診斷密切相關的蛋白標志物。

　　結果發現，VMC組與Control組血漿外泌體蛋白組相比較，共篩選出10個差異蛋白點，包括8個上調蛋白點，2個下調蛋白點。經質譜鑒定后，表達上調的蛋白包括角蛋白2（KRT2）、角蛋白5（KRT5）、角蛋白9（KRT9）、角蛋白77（KRT77）、角蛋白78（KRT78）、鋅-α2糖蛋白（AZGP1）、觸珠蛋白（HP）和視黃醇結合蛋白4（RBP4）；表達下調的蛋白是CD5抗原樣蛋白（CD5L）和補體C1q亞基B（C1QB）。選取RBP4進行ELISA驗證，結果表明，與Control組[（64.5±2.6）μg/L]相比較，VMC組[（148.7±3.9）μg/L]血漿外泌體中RBP4特異性表達上調（P<0.05），與DIGE結果一致。