病毒DNA的提取實驗——拭子標本中病毒DNA的提取

拭子標本

TE 緩沖液裂解液蛋白酶K

離心機棉簽

預操作：將采有口腔、鼻腔或生殖道等處分泌物標本的棉簽置于 2 ml 生理鹽水中，洗下標本。若標本在 4 h 內處理，可置于室溫保存，否則需 4℃保存。

1. 將生理鹽水中的標本以 2 000 r/min 離心 5 min, 沉淀細胞。

2. 吸去上清液，若有血液殘留，可1 ml TE 緩沖液懸浮細胞，移至Ep管中，重復離心1次。

3. 去上清液，如仍有血液殘留，可重復第 2 步，直至沉淀物中無紅細胞痕跡為止。

4. 用 50~300μ1 裂解液懸浮細胞，使細胞達到 10~1000 個/μl 。

5. 用 55℃,1 h 消化裂解細胞，釋放 DNA, 然后 95℃ ,10 min 滅活蛋白酶 K 。

6. 10000 r/min 離心 5 min, 取上清液做 DNA 模板。

1. TE 緩沖液由 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 和 1 mmol/L EDTA 組成。

2. 裂解液由 50 mmol/L KCl、10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3)、2.5 mmol/L MgCl₂、100 μg/ml 蛋白酶 K 、1% Laureth-12 和 0.5%Tween-20 組成。