蛋白質核酸相互作用研究方法介紹

　　蛋白質和核酸是組成生命的主要生物大分子，研究蛋白質－核酸相互作用、蛋白質－蛋白質相互作用是后基因組時代重要的研究領域之一。專注蛋白相關研究， 金開瑞可提供凝膠電泳遷移率EMSA、染色質免疫沉淀ChIP、RNA Pull Down / DNA Pull Down、熒光素酶報告基因、酵母單雜交等多種蛋白質－核酸相互作用研究服務，幫助您理清轉錄調控過程，預測互作蛋白，加速研究進程。1） 凝膠電泳遷移率EMSA        凝膠遷移或電泳遷移率檢測（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）是一種檢測蛋白質和DNA序列相互結合的技術，可用于定性和定量分析；目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用，是轉錄因子研究的經典方法。　　金開瑞提供EMSA檢測技術服務，幫助您檢測DNA結合蛋白、RNA結合蛋白、特定的蛋白質，并可進行未知蛋白的鑒定。2）染色質免疫沉淀ChIP        染色質免疫沉淀技術（Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP）是將樣品中同抗體靶蛋白相互作用的DNA隨免疫復合物沉淀，是研究體內蛋白質與DNA相互作用的有力工具，利用該技術不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾以及轉錄因子與基因表達的關系。3）RNA Pull Down / DNA Pull Down        蛋白質與RNA的相互作用是許多細胞功能的核心，如蛋白質合成、mRNA組裝、病毒復制、細胞發育調控等。RNA Pull Down使用體外轉錄法標記生物素RNA探針，然后與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白質復合物。該復合物可與鏈霉親和素標記的磁珠結合，從而與孵育液中的其他成分分離。復合物洗脫后，通過western blot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與RNA相互作用。        金開瑞現提供RNA pull down/ DNA Pull Down檢測技術服務, 使用特異性二抗進行檢測，能有效避免抗體重鏈對結果的信號干擾。并且金開瑞配套有世界上最先進的質譜儀，能顯著提升檢測效果。4）熒光素酶報告基因        雙報告基因用于實驗系統中作相關的或成比例的檢測，通常一個報告基因作為內對照，使另一個報告基因的檢測均一化。理想的雙報告基因方法應該使用戶能夠以螢火蟲熒光素酶所具有的速度，靈敏和線性范圍對同一樣品中的兩個報告基因同時測定。　　金開瑞應用Promega 公司的雙熒光素酶報告基因檢測(DLR)系統，提供DLR檢測服務。5）酵母單雜交        酵母單雜交技術最由酵母雙雜交技術發展而來的，通過對報告基因的表型檢測，分析DNA與蛋白之間的相互作用，以研究真核細胞內的基因表達調控。由于酵母單雜交方法檢測特定轉錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和可靠性，現已被廣泛用于克隆細胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的特定轉錄因子。        　　RNA Pull Down 在博客最早就進行了系統地介紹，也在上一篇lncRNA-ZFAS1擴增促進肝癌轉移中應用到，實屬現階段研究蛋白質-核酸相互作用的常用手段。另外上一篇提到的RIP技術，雖然是利用抗原抗體特異性沉淀RNA-蛋白復合物，但最終目的是為了研究細胞內RNA 與蛋白結合情況，了解轉錄后調控網絡動態過程，助力發現miRNA 的調控靶點。
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