肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。實驗材料 洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1）試劑、試劑盒 5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷與 1 份乙酸乙酯混合2:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-2 份庚烷與 1 份乙酸乙酯混合 100%(m V)三氟乙酸(TFA) 電泳緩沖液(pH 1.9 200~500 cpm 32P（用去離子水稀釋 32P 正磷酸鹽配制)或 2 mg／ml PTH-磷酸酪氨酸儀器、耗材 微量離心管45℃ 水浴適用于契侖科夫計數法的閃爍計數器TLC 平板(20 cm × 20 cm 100 μm 纖維素)65℃ 烘箱或風扇實驗步驟 1. 根據候選肽段的列表確定循環數。將循環數指定為^每一循環的起始體積為 20 μl。2. 在稱為反應管（微量離心管）的管子中將......閱讀全文
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
基本方案 手工EDMAN降解法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。 實驗材料 洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1） 試劑、試劑盒 5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／
肽中磷酸化氨基酸位置測定實驗
實驗方法原理 磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸降解后釋放出絲氨酸或蘇氨酸和自由磷酸鹽，而磷酸酪氨酸降解后釋放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。實驗材料 洗脫的磷酸肽（見輔助方案 1）試劑、試劑盒 5%(V／V)異硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷與 1 份
磷酸化位點分析實驗-確定磷酸化氨基酸類型
實驗材料蛋白樣品實驗步驟了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或
磷酸化位點分析實驗-確定磷酸化氨基酸類型
了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或磷酸肽的水解產物與磷酸氨
磷酸化位點分析實驗-確定磷酸化氨基酸類型
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 蛋白樣品 實驗步驟 了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型
環脂肽氨基酸順序的質譜測定
楊世忠 牟伯中? 呂應年 陳濤? (華東理工大學化學與制藥學院，上海 200237) 摘要：從一株枯草芽孢桿菌的培養液中分離到一種生物表面活性劑，紅外光譜、茚三酮顯色及質譜分析表明它是一種具有環狀結構的脂肽。質譜顯示脂肽的脂肪酸部分為β－羥基脂肪酸；氨基酸分析表明肽部分由4 個亮氨酸、1 個天門東
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
實驗方法原理 即使納噴 MS/MS 技術已經成功用于直接分析蛋白酶解產生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建議在質譜分析前作一些分離：(1) 磷酸肽在蛋白酶切產物中通常只占少數因此容易淹沒在低率度離子產生的總背景中，肽分離技術可濃縮分析物，因此會提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性標記并具有相同比
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
2D-PP 分離磷酸肽 RP-HPLC 分離磷酸肽 高分辨凝膠電泳分離磷酸肽 IMAC 分離／富集磷酸肽 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸化分析的原理研究的最常見的磷酸化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知發生的磷酸化還有精氨酸、組氨酸和賴氨酸的亞酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。這些修飾中的其中一些是化學不穩定的，通常觀察不到，除非采取特殊的保護措