抗原標記蛋白復合體純化實驗——變化起始材料和洗脫條件
實驗方法原理本方案以人 RNA 聚合酶 II（Pol II）為例，描述抗原表位標記蛋白的純化。RNA 聚合酶 II 是一個具有 12 個多肽（RPB1-12）的多亞基蛋白復合體。Pol II 最大的亞基（RPBl）具有一個唯一的七肽序列 Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser（YSPTSPS）的 C 端結構域（CTD）。這個序列在酵母中出現 26 次，人中出現 52 次。這個 CTD 可以被很多蛋白激酶磷酸化，造成通常在真核生物中存在的 Pol II 有三種形式。IIO 型的 Pol II 含有高度磷酸化的 CTD，而 IIA 型 Pol II 具有無或低磷酸化的 CTD。IIB 型的 Pol II 沒有 CTD，可能是由蛋白酶切割產生。另外，通過與一些通用轉錄因子和其他與染色質重塑、mRNA 加工和 DNA 修復相關的胞內蛋白結合，Pol II 能夠形成極大的蛋白復合體，即所謂的 Pol II 全酶。這個備擇方......閱讀全文
抗原標記蛋白復合體純化實驗——變化起始材料和洗脫條件
實驗方法原理本方案以人 RNA 聚合酶 II（Pol II）為例，描述抗原表位標記蛋白的純化。RNA 聚合酶 II 是一個具有 12 個多肽（RPB1-12）的多亞基蛋白復合體。Pol II 最大的亞基（RPBl）具有一個唯一的七肽序列 Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser（YSP
抗原標記蛋白復合體純化實驗——條件性表達FLAG標記
實驗方法原理有時導入的 FLAG 標記蛋白編碼序列在逆轉錄病毒介導的轉基因和藥物篩選建立的克隆化細胞系中不表達。這可能是由于外源基因產物沒有被調控的或組成型表達所造成的細胞毒性。為了克服這個問題，基于四環素的使用，一個可誘導的哺乳動物表達系統可以用來“打開”或“關閉” FLAG 標記蛋白的表達。在建
抗原標記蛋白復合體純化實驗
組成型表達FLAG標記 條件性表達FLAG標記 變化起始材料和洗脫條件 用P11離子交換層析柱 ? ? ? ? ? ?
抗原標記蛋白復合體純化實驗
實驗方法原理 首先通過逆轉錄病毒介導的轉基因（用于組成型表達）或四環素調控的系統（用于可誘導表達）建立表達抗原決定簇標記的蛋白復合體亞基的穩定細胞系。然后用抗原決定簇特異的單克隆抗體偶聯的小珠進行免疫親和純化，以沉降抗原決定簇標記的多亞基蛋白復合體。最后在中性 pH 或生理條件下洗脫回收，即可用
抗原標記蛋白復合體純化實驗——組成型表達FLAG標記
實驗方法原理首先通過逆轉錄病毒介導的轉基因（用于組成型表達）或四環素調控的系統（用于可誘導表達）建立表達抗原決定簇標記的蛋白復合體亞基的穩定細胞系。然后用抗原決定簇特異的單克隆抗體偶聯的小珠進行免疫親和純化，以沉降抗原決定簇標記的多亞基蛋白復合體。最后在中性 pH 或生理條件下洗脫回收，即可用于功能
抗原標記蛋白復合體純化實驗——用P11離子交換層析柱
實驗方法原理人 TATA 結合蛋白（TBP）能夠結合不同類型的細胞內蛋白以形成不同的蛋白復合體，如 SL1、TFIID 和 TFIIIB。這些蛋白質分別是通過 RNA 聚合酶 I、II 和 III 的轉錄所必要的。所有這些不同的蛋白復合體在核抽提物中都能找到。用一個層析步驟，如 P11 離子交換柱，
起始復合體
中文名起始復合體外文名pre-replicative complex 2(PRC2)定義DNA復制起點的引發體，亦稱為起始復合體。在DNA復制起點（簡寫為ori）形成。作用即為啟動DNA復制。
轉錄起始復合體
中文名轉錄起始復合體真核細胞啟動子上的TATA框轉錄因子TFIIA,TFIIB轉錄起始復起始轉錄的“分子機器”定義真核細胞中，啟動子上的TATA框與轉錄因子TFIID結合形成穩定的復合物，然后由其他轉錄因子（TFIIA,TFIIB,TFIIF,TFIIE,TFIIH等）和RNA聚合酶按一定順序與DN
起始點識別復合體的定義
中文名稱起始點識別復合體英文名稱origin recognition complex;ORC定 義在真核細胞染色體復制起點上與DNA結合，為DNA復制起始所必需的多亞基的蛋白質復合體。為蛋白質相互間作用提供了位點。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞遺傳（二級學科）
免疫純化實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區， 所以結合抗原的部位獲得充分暴露，從易于接近。免疫親和柱
免疫純化實驗
實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區， 所以結合抗原的部位獲得充分暴露，從易于接近。免疫親和柱制備完成后，抗原溶液即可以上樣，接著洗去污染物，然后洗脫抗
免疫純化實驗
在蛋白質純化方法中抗體親和純化是非常有效的方法之一。僅此一步常可獲得 1000～10 000 倍的純化。如果抗體與目的蛋白的結合的特異性得到證明，并且洗脫的目的蛋白沒有受到不可逆的損傷，那么可以認為免疫純化是極好的蛋白質純化方法，特別是用在純化過程的最后步驟。實驗方法原理制備免疫親和柱要求抗體首先共
制備和純化－mRNA－顯示蛋白實驗
實驗方法原理 實驗材料 DNA 庫不含甲硫氨酸的翻譯混合物試劑、試劑盒 MgCl2核苷三磷酸溶液轉錄緩沖液去離子超濾水T7 RNA 聚合酶固體 EDTA尿素緩沖液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶緩沖液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 連接酶緩沖液T4 DNA 連接酶乙酸鉀溶液兔網織
制備和純化－mRNA－顯示蛋白實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 DNA 庫 不含甲硫氨酸的翻譯混合物
制備和純化－mRNA－顯示蛋白實驗
實驗材料DNA 庫不含甲硫氨酸的翻譯混合物試劑、試劑盒MgCl2核苷三磷酸溶液轉錄緩沖液去離子超濾水T7 RNA 聚合酶固體 EDTA尿素緩沖液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶緩沖液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 連接酶緩沖液T4 DNA 連接酶乙酸鉀溶液兔網織紅細胞裂解物翻譯試劑盒氯化
細胞化學詞匯起始點識別復合體
中文名稱：起始點識別復合體英文名稱：origin recognition complex;ORC定 義：在真核細胞染色體復制起點上與DNA結合，為DNA復制起始所必需的多亞基的蛋白質復合體。為蛋白質相互間作用提供了位點。應用學科：細胞生物學（一級學科），細胞遺傳（二級學科）
肌肉肌球蛋白和肌動蛋白純化實驗_DEAE純化肌肉肌球蛋白
實驗材料肌肉肌球蛋白試劑、試劑盒焦磷酸鈉柱平衡緩沖液柱緩沖液高鹽緩沖液肌球蛋白-DEAE 透析緩沖液儀器、耗材SDS-PAGE實驗步驟一、準備 DEAE 柱和材料1. 準備貯存液和材料200 mmol/L 焦磷酸鈉（NaPPi )，pH 7.0用 HCl 和 H3PO4?調 NaPPi 溶液的 pH
肌肉肌球蛋白和肌動蛋白的純化實驗——肌球蛋白的純化
實驗材料冷凍肌肉試劑、試劑盒肌球蛋白抽提溶液儀器、耗材玻璃器皿實驗步驟1. 準備下面的貯存液（都冷卻到 4℃）。肌球蛋白抽提溶液：0.5 mol/L KCl，0.1 mol/L K2HPO4幾升冷的用玻璃器皿蒸餾過的水（dH2O）4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol/L C
放射免疫技術（RIA）標記抗原實驗的原理和步驟
原理當抗原遇到相應的抗體便形成抗原抗體復合物(Ag+Ab?Ag-Ab)，當用放射性同位素標記抗原再與相應的抗體結合便形成標記抗原和抗體復合物。即：*Ag+Ab?*Ag-Ab。當標記抗原和未標記抗原一起加入相應的抗體時則兩種抗原產生相互的競爭，而生成有標記抗原和抗體復合物以及非標記抗原和抗體復合物。生
病毒純化和蛋白純化區別
病毒純化和蛋白質純化都是生物制劑工程中常見的分離純化方法，但它們的對象不同，具體區別如下：1. 病毒純化與蛋白質純化對象不同。病毒純化的目標是將病毒從其它生物物質中進行分離和去除，以獲得單個且純凈的病毒顆粒，如用于疫苗生產的病毒載體，而蛋白質純化的目標是從生物體或來源中提取和純化單一或多種蛋白質，如
膠體金標記蛋白質的純化
標記好的免疫金探針必須經過純化處理才能用于IHC染色，尤其是免疫電鏡的染色。純化的目的就是除去其中未標記的蛋白質，未充分標記的膠體金及在標記過程可能形成的各種聚合物。其純化方法有超速離心法、色譜柱法以及以上二者相結合應用。（一）超迷離心法根據膠體金顆粒大小不同及蛋白質種類不同，離心的轉速和時間也不同
簡述前起始復合體形成的步驟
1、TATA結合蛋白 (TBP,TFIID的一個亞基) 與啟動子結合； 2、TFIIA與啟動子結合； 3、TFIIB與啟動子結合； 3、RNA聚合酶II和TFIIF與啟動子結合； 4、TFIIE加入復合體，并吸引TFIIH，有ATP酶及解鏈酶活性； 5、亞基中有AT
梯度洗脫的技術條件
①洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍于床體積，從而使分離的各峰不致于太擁擠。②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。③梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。
靶蛋白的放射標記實驗—酵母和細菌蛋白質代謝放射標記
實驗材料 細胞 儀器、耗材 基本培養基 實驗步驟 1. 接種細胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養基，于合適溫度中度振蕩培養過夜。 2. 用新鮮的基本培養基稀釋培養物，繼續溫育至 107?細胞/ml （酵母）或對數期中期（細菌）。 3. 5000
蛋白質復合體性質的研究
方案1 用 FLAG抗原表位標記蛋白質進行蛋白質免疫共沉淀 方案2 細胞裂解液中相互作用蛋白的親和純化 方案3 多蛋白質復合體的非變性瓊脂糖凝膠電泳實驗 方案4 BN-PAGE 蛋白質分析法 方案5 采用交聯法和質譜法對蛋白質復合體進行拓撲
皮膚試驗的條件和抗原制備
首先應當制備試驗用抗原，如有合格商品可直接購買。可以作為變應原的物質種類繁多，例如動物皮毛、家禽羽毛、鴿糞、昆蟲、螨類、真菌、花粉、雜草、物理粉塵和各種食品等都可能成為變應原。不同抗原的制備方法不同，但一般包括以下幾個步驟：①收集原料；②粉碎與勻漿；③脫脂與提取；④過濾與分離；⑤分裝保存。分裝保存之
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 氨芐青霉素甘油色氨酸儀器、耗材 電泳儀培養箱搖床試管實驗步驟 1. ?將編碼目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS質粒上的trxA基因3‘末端，構建符合讀框的融合基因，或者于pALtrxA-781的單一Rsr 2位點上插入短肽編碼序列。2. ?用含
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒氨芐青霉素甘油色氨酸儀器、耗材電泳儀培養箱搖床試管實驗步驟1. ?將編碼目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS質粒上的trxA基因3‘末端，構建符合讀框的融合基因，或者于pALtrxA-781的單一Rsr 2位點上插入短肽編碼序列。2. ?用含有重組硫
肌肉肌球蛋白和肌動蛋白的純化實驗
肌球蛋白的純化DEAE純化肌肉肌球蛋白實驗材料冷凍肌肉 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒肌球蛋白抽提溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒