病毒感染細胞實驗（二）
三、質粒DNA在大腸桿菌里轉化連接上目的基因的質粒轉化大腸桿菌是為了讓目的基因在大腸桿菌里擴增，然后提取質粒，以下是質粒DNA在大腸桿菌里轉化的三步驟。3.1大腸桿菌感受態細胞的制備1）從大腸桿菌平板上挑取一個單菌落于3mlLB培養基的試管中，37℃振蕩培養過夜。2）取0.4ml菌液轉接到40mlLB液體培養基中，37℃振蕩培養2~3h3）菌液轉移到50ml離心管中，冰上放置10min4）4℃離心10min（4000r/min）5）倒出培養液，將管口倒置以便培養液流盡6）用冰浴的0.1mol/L氯化鈣10ml懸浮細胞沉淀，立即冰浴30min7）4℃離心10min（4000r/min）8）倒出上清液，用冰浴的0.1mol/L氯化鈣2ml懸浮細胞（冰上放置）9）分裝細胞，200ul一份，4℃保存3.2質粒DNA的轉化1）取200ul新鮮制備的感受態細胞，加入質粒DNA2ul混勻，冰浴30min2）離心管放到42℃保溫90s3）冰浴2......閱讀全文
病毒感染細胞實驗（二）
三、質粒DNA在大腸桿菌里轉化連接上目的基因的質粒轉化大腸桿菌是為了讓目的基因在大腸桿菌里擴增，然后提取質粒，以下是質粒DNA在大腸桿菌里轉化的三步驟。3.1大腸桿菌感受態細胞的制備1）從大腸桿菌平板上挑取一個單菌落于3mlLB培養基的試管中，37℃振蕩培養過夜。2）取0.4ml菌液轉接到40mlL
病毒感染細胞實驗
病毒感染細胞實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 病毒包裝的原理質粒DNA為能轉錄出慢病毒遺傳物質（RNA），但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質粒，其同時連有目的基因和
病毒感染細胞實驗
病毒感染細胞實驗可以用于：（1）將目的基因整合到大多數真核細胞。（2）將目的基因包裝成病毒來感染細胞，從而得到表達滿足實驗需求。實驗方法原理病毒包裝的原理質粒DNA為能轉錄出慢病毒遺傳物質（RNA），但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質粒，其同時連有目的基因和報告基因，psPAX2為能表達慢病
病毒感染細胞實驗（一）
實驗方法原理 一、病毒的種類病毒有很多種，常見的有慢病毒和腺病毒1.1慢病毒1.1.1原理慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種。構建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學合成的siRNA 和基于瞬時表達載體構建的普通 siRNA 載體相比，一方面可以擴增替代瞬時表達載體使
慢病毒感染目的細胞實驗步驟
1. 感染預實驗以 24 孔培養板為例，同時進行目的細胞和工具細胞的感染預實驗。工具細胞可選擇 293T（人胚腎上皮細胞）、H1299（人肺癌細胞）或其它細胞。實驗材料：培養基、24 孔培養板，移液槍，槍頭， EP 管，細胞計數板、冰盒、廢液缸等。（根據目的細胞情況，可酌情使用 Polybrene）
有什么方法可以提高病毒感染細胞實驗效率
1.提前一天細胞鋪板提前一天將細胞種植在24孔板中，以感染時細胞融合度在50%左右為宜(懸浮細胞根據需要調整，不要采用過高的細胞密度)。2.感染⑴將2ul的EnvirusTM-LV用25μl無血清稀釋液稀釋，充分混勻，制成EnvirusTM-LV稀釋液。4℃靜置5分鐘。注：感染懸浮細胞，建議增大En
樹突細胞的分離實驗（二）
1.將2 管 I m l 的 4000U /m l 膠 原 酶 D 稀 釋（足夠用于2 0 個脾臟）： Im l 加 入 9m l H B S S(稀 釋 至 400U /m l ，步 驟 8 使用）， I m l 加 入 39m l 的 H B S S (稀 釋 至 100U /ml)。置
細胞共培養實驗介紹（二）
4.?實驗流程簡介?將40-60ul的受體細胞懸浮液種到slide中間小室，根據你的細胞類型密度控制在5-10×104cells/ml；2.?將40-60ul的飼養層細胞懸浮液種到slide的其他8個小室；3.?細胞貼壁后，移去各小室培養基，并洗脫掉未貼壁細胞，再加400-600ul培養基到大wel
細胞周期測定實驗（二）
一、常見問題1. ?Q：要做胃粘膜組織的DNA含量及倍體檢查，但取材后要等幾個星期才會做流式細胞術檢查，請問：胃組織要怎樣保存好呢？用低溫保存，還是用乙醇固定？或者固定后再低溫下保存？?A：我做過乳腺細胞的DNA含量測定，取得組織以后，先處理成單細胞懸液，然后再加70%冰乙醇固定，要保證冰乙醇的最終
細胞轉染實驗的實驗步驟第二次細胞傳代
1） 在轉染后24小時，觀察實驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。2） 再次進行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8X105個細胞/35mm培養皿將細胞重新放入培養皿中。3） 在正常條件下培養24小時后按照染色要求條件固定。
關于病毒感染實驗診斷的實驗診斷介紹
1、病毒感染實驗診斷— 顯微鏡檢查 （1）用光學顯微鏡直接檢查病毒包涵體，作為病毒感染的初步診斷。在普通光學顯微鏡下，胞漿或胞核內的包涵體呈現嗜酸或嗜堿性染色，大小和數量不等。包涵體檢查可作為病毒感染的輔助診斷，不是特異性試驗，可配合組化染色技術進行診斷。 （2）用電子顯微鏡直接檢查高濃度病
病毒感染的實驗室診斷
四、特異性抗體的檢測特異性抗體的檢測病毒感染后通常誘發針對病毒一種或多種抗原免疫應答，特異性抗體效價升高或lgM抗體出現有輔助臨床診斷的價值。(一)補體結合試驗(CF) CF分二個階段：1.抗原與抗體(一個為已知，一個為待檢)混合，加入定量補體，若抗原與抗體相對應，則補體被消耗；2.在上述混合物
二倍體細胞壽命實驗
二倍體細胞( diploid cell)具有有限的增殖能力，此增殖能力決定于供體的物種與年齡，如小鼠細胞分裂約12次，雞細胞分裂約25次，成年人成纖維細胞體外能倍增20代，胚胎成纖維細胞能倍增50代，故可采用分離的二倍體細胞觀察藥物對壽命的影響，由于體外細胞的衰老與體內的衰老有一定相關性，可預測
原代細胞基本實驗技術小結（二）
D?原代細胞傳代技術 一、貼壁細胞的消化法傳代 1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。 2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。 3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養液終止消化
二倍體細胞壽命實驗
二倍體細胞( diploid cell)具有有限的增殖能力，此增殖能力決定于供體的物種與年齡，如小鼠細胞分裂約12次，雞細胞分裂約25次，成年人成纖維細胞體外能倍增20代，胚胎成纖維細胞能倍增50代，故可采用分離的二倍體細胞觀察藥物對壽命的影響，由于體外細胞的衰老與體內的衰老有一定相關性，可預測
Science揭開致命病毒感染細胞之謎
由來自荷蘭癌癥研究所、哈佛醫學院、德國基爾大學和美國陸軍傳染病醫學研究所(USAMRIID)的科學家們組成的一個國際研究小組，闡明了在西非流行的一種致命病毒：沙拉沙病毒（lassa virus）感染細胞的機制，他們發現拉沙病毒利用了出乎意料的兩步過程來進入細胞。發表在《科學》（Science）雜
昆蟲細胞高MOI桿病毒感染
高MOI（?Multiplicity Of Infection，等于用于感染的病毒數目與細胞數目的比值）感染是生產蛋白的最好方法。這有兩個原因。一是不用考慮DIP（Defective Interfering Particles，即只包裝入部分基因組的病毒顆粒）的形成，因為關心的是細胞或者培養液中的蛋
巨細胞病毒感染診斷方案
? 巨細胞病毒感染診斷方案 ??? 中華醫學會兒科學分會感染消化學組? (1998年11月，湖北宜昌) ??? 巨細胞病毒感染( cytomegalovirus infection )是由人巨細胞病毒( human cytomegalovirus，CMV )引起的人類感染性疾病。CMV感染
關于病毒感染實驗診斷的基本介紹
于病毒感染實驗診斷，病毒是一類非細胞型微生物，由一個核酸長鏈和蛋白質外殼構成，個體極小，可通過細菌濾器，需用電子顯微鏡才可觀察到。病毒僅含一種核酸作為遺傳物質，沒有代謝系統和酶只能在活細胞內寄生，以復制的方式進行增殖。人體各組織器官均可被病毒感染，所致疾病見于全身各個系統。由于病毒感染所致疾病臨
細胞培養常用設備及實驗技巧（二）
細胞的復蘇 細胞復蘇的原則——快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。具體操作 一、實驗前準備：1.將水浴鍋預熱至37℃。2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。3.在超凈工作
誘導多能干細胞毒性實驗（二）
Figure 3. 化合物IC50值由曲線擬合給出采用SoftMax Pro軟件的曲線擬合功能，確定四種不同的化合物的IC50值。神經元神經元的毒性體現在數量減少或神經突觸的長度減少上(甚至存在于不影響細胞的數量或存活力的情況下)。通過成像實驗不僅可以檢測神經元細胞的主體，同時還可以檢測神經元細胞的
細胞融合實驗——聚乙二醇法
實驗方法原理細胞融合的誘導物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應用最廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡便，且融合效果穩定。PEG的促融機制尚不完全清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發生結構重
流式細胞儀實驗方法（二）
第二部分 細胞因子 細胞內細胞因子的流式細胞儀檢測 一、簡介隨著研究的進展，僅僅對細胞進行定量和活性的檢測已不能滿足需要。在單細胞水平研究細胞因子的表達能力對研究細胞因子在疾病中的作用越來越顯的重要無比。目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學、限制
巨細胞病毒感染的基本介紹
巨細胞病毒感染癥是由巨細胞病毒（CMV）引起的先天性或后天性感染。感染巨細胞病毒后的臨床表現和轉歸與個體的免疫功能狀態密切相關。免疫功能正常者因密切接觸感染者的分泌物感染人巨細胞病毒，多表現為隱性感染，部分為單核細胞增多癥樣表現。免疫功能缺陷者因輸血（血液制品）或器官移植等感染CMV或CMV再活
巨細胞病毒感染癥的介紹
巨細胞病毒感染癥是由巨細胞病毒（CMV）引起的先天性或后天性感染。感染巨細胞病毒后的臨床表現和轉歸與個體的免疫功能狀態密切相關。免疫功能正常者因密切接觸感染者的分泌物感染人巨細胞病毒，多表現為隱性感染，部分為單核細胞增多癥樣表現。免疫功能缺陷者因輸血（血液制品）或器官移植等感染CMV或CMV再活
巨細胞病毒感染癥的概述
巨細胞病毒感染癥是由巨細胞病毒（CMV）引起的先天性或后天性感染。感染巨細胞病毒后的臨床表現和轉歸與個體的免疫功能狀態密切相關。免疫功能正常者因密切接觸感染者的分泌物感染人巨細胞病毒，多表現為隱性感染，部分為單核細胞增多癥樣表現。免疫功能缺陷者因輸血（血液制品）或器官移植等感染CMV或CMV再活
巨細胞病毒感染癥的病因
由CMV引起的先天性或后天性感染，CMV是雙鏈DNA病毒，屬于皰疹病毒群，僅在人與人間傳播，其形態與其他皰疹病毒相似，對宿主或組織培養細胞有明顯的種屬特異性，人類CMV僅能在人胚纖維母細胞中分離、培養。1.傳染源患者和不顯性感染者可長期或間歇從唾液、淚液、宮頸分泌物、尿液、精液、糞便、血液或乳汁
巨細胞病毒感染癥的診斷
1.不能以其他病因解釋的慢性肝病或遷延性間質性肺炎；2.臨床類似傳染性單核細胞增多癥，但抗EB病毒衣殼抗原的嗜異凝集試驗陰性，往往發生于手術（尤其開心手術）后接受大量新鮮血者；3.接受免疫抑制劑治療的慢性消耗性疾病患者（如白血病惡性腫瘤）、接受器官移植的受者，如發生較嚴重的肺炎，往往是CMV感染
如何治療巨細胞病毒感染？
1.可應用各種抗病毒制劑如更昔洛韋、抗巨細胞病毒的免疫球蛋白制劑、干擾素及轉移因子等。 2.丙氧鳥苷有防止CMV擴散作用。如與高滴度抗CMV免疫球蛋白合用，可降低骨髓移植的CMV肺炎并發癥死亡率。 3.要注意對癥治療和護理工作，隔離病兒，對其排泄物要進行消毒。
昆蟲細胞的低MOI桿病毒感染
感染懸浮細胞是使桿病毒系統生產蛋白的普遍方法。懸浮培養的細胞很容易從10ml擴大到100L。一般來說，懸浮的細胞在無血清的培養液中培養。這種培養液許多公司有售，比如Life Technologies、Hyclone、Biowhitaker、JRH Biosciences、Expression Sys