SMARTTM5RACEPCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點，以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下，反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性，在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5 個(dC)殘基，退火后(dC)殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG)通用接頭引物配對后，轉換為以SMART序列為模板繼續延伸而連上通用接頭(figure 2 )。然后用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為上游引物，用一個基因特異引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作為下游引物，以SMART第一鏈cDNA為模板，進行PCR循環，把目的基因5‘末端的cDNA片段擴增出來。最終，從2個有相互重疊序列的3 / 5‘-RACE產物中獲得全長......閱讀全文
SMARTTM－5RACE－PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點，以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下，反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性，在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5個(dC)殘基，退
SMARTTM－5RACE－PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點，以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下，反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性，在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5 個(
SMARTTM－5RACE－PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點，以Oligo(dT)30?MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下，反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性，在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5個(dC)殘基，
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展，出現了許多克隆新基因的方法和手段，如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術（rapid amplification of cDNA
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展，出現了許多克隆新基因的方法和手段，如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術（rapid amplification of cD
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展，出現了許多克隆新基因的方法和手段，如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術（rapid amplification of cDNA
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展，出現了許多克隆新基因的方法和手段，如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術（rapid amplification of cDNA
PCR儀得不到全長的5’RACE－PCR產物
*CIP反應后的RNA降解產生了新的帶有5’磷酸的斷裂模板，可以同GeneRacer RNA Oligo連接。一定要小心操作，保證RNA無降解。 *CIP脫磷酸不完全，可以增加反應中CIP的量或減少RNA的量。 *PCR產生了雜帶，并不是真正的連接產物，可以使用上述建議優化PCR。
RACE－PCR簡介
近年來隨著生物技術的不斷發展，出現了許多克隆新基因的方法和手段，如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
3RACE－PCR
實驗概要?? ? ? ? This technique is used to obtain the 3'end of a cDNA, it requires some sequence information internal to the mRNA under study. The
cDNA－5’末端的快速擴增（5’RACE）
在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的 mRNA 5' 末端的序列特征結構的 cDNA 克隆更易失敗的了。通常存在于 cDNA 基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一條鏈往往 5' 末端不完整。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂
cDNA－5’末端的快速擴增（5’RACE）
實驗方法原理?在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的 mRNA 5' 末端的序列特征結構的 cDNA 克隆更易失敗的了。通常存在于 cDNA 基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一條鏈往往 5' 末端不完整。實驗材料?反轉錄酶末端脫氧核
cDNA－5’末端的快速擴增（5’RACE）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的 mRNA 5' 末端的序列特征結構的 cDNA 克隆更易失敗的了。通常存在于 cDNA 基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一條
PCR儀RACE的PCR結果有雜帶
RACE PCR雜帶或非特異性PCR條帶可能是由于以下原因： *GSP與其他cDNA的非特異性結合會導致在擴增目的產物時得到無關產物。 *GeneRacer引物和cDNA的非特異性結合會導致產生一端帶有GeneRacer引物序列的PCR產物。 *RNA降解。 *PCR管或試劑污染。 注
5端RACE升級版
實驗概要完成這個RACE需要全套反轉錄系統，當然選一個好的反轉錄酶（無RNase H），dUTP，taq酶，Uracil DNA glycosylase ，還有這幾條引物：?Adapter A?AUCUCGAGUUCGCGCCGGAUCC(T) 25 VN?cDNA synthesis and ad
RACEPCR克隆基因的幾點建議
摘 要：? RACE是一種快速克隆cDNA末端的方法，目前, 該方法被廣泛應用于未知堿基序列基因的克隆，尤其是SMART RACE技術更為人們所青睞。本文總結了我們實驗室用SMART RACE技術克隆基因的一些心得體會，希望對用RACE方法克隆基因的同行有些幫助。關鍵詞： RACE; RNA提取;
用經典－RACE－擴增－cDNA－的5’末端實驗
試劑、試劑盒 GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或總 RNA反轉錄緩沖液 RNA 酶 HRNasinSuperScriptII 逆轉錄酶dNTP 溶液DTTTECoCl2dATP 溶液脫氧核苷酸末端轉移酶加尾緩沖液 HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot
用經典－RACE－擴增－cDNA－的5’末端實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 GSP-RT 引物 poly(A)+RNA 或總 RNA 反轉錄緩沖液 RNA 酶 H RNasin SuperScriptI
用經典－RACE－擴增－cDNA－的5’末端實驗
這一實驗方案分為 3 個階段。 第 1 階段：反轉錄產生 cDNA 模板 ；第 2 階段：在第一鏈 cDNA 產物末端加 poly(A) 尾 ；第 3 階段：擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或總 RNA反轉錄緩
用新－RACE－法擴増－cDNA－的－5末端
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑 酶和酶緩沖液 核酸和寡核苷酸 儀器、耗材 特殊設備
用新－RACE－法擴増－cDNA－的－5末端
這一實驗方案分為 6 個階段。第 1 階段：降解 RNA 的去磷酸化; 第 2 階段：完整 RNA 去帽; 第 3 階段：RNA 寡核苷酸的制備; 第 4 階段：RNA 寡核苷酸與細胞 RNA 的連接; 第 5 階段：反轉錄; 第 6 階段：擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康
PCR儀為什么得不到RACE產物？
*加入Hela對照 *低質量的RNA模板 *逆轉錄失敗，SSII和SSIII非常適用于長模板cDNA的合成 *目的基因豐度太低，可以通過提高PCR的循環次數來解決，建議使用巢式PCR *目的基因沒有表達，可以通過使用兩條GSPs來分析cDNA中是否含有目的基因 *目的基因太長而不適合進
用新－RACE－法擴増－cDNA－的－5末端（一）
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸儀器、耗材 特殊設備實驗步驟 第 1 階段：降解 RNA 的去磷酸化一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙酸鈉，3mol/L,pH5.2乙醇二硫蘇糖醇（DTT)（0.1mol/L)苯酚/氯仿（1:1，體積比）2. 酶和酶緩沖液磷酸酶緩沖液，10X
用新－RACE－法擴増－cDNA－的－5末端（二）
第 3 階段：RNA 寡核苷酸的制備選擇離 T7 或 T3RNA 聚合酶作用位點下游約 lOObp 處可以線性化的質粒 [見圖 25-3(b)]。因為來自多克隆位點回文序列的引物用于 PCR 效果不好，因此比較理想的是用在多克隆位點克隆進某個插入片段的質粒。一個已經驗證過的質粒是 pBS-S
RACE的原理、應用和優缺點（二）
三、RACE 的應用 RACE技術主要是應用于對全長cDNA序列的獲得，但對該技術進行一定的修改后，也可在其它方面顯示出極高的應用價值。 首先，RACE技術可用于cDNA文庫的構建及篩選。Belyavaasky等(1989)用10個骨髓瘤細胞分離的總RNA，通過TdT加同聚尾、(dT)
RACE的原理、應用和優缺點（一）
一、RACE 的簡介 目前,全長基因的獲得是生物工程及分子生物學研究的一個重點。盡管已經有多種方法可以獲得基因的全長序列，但在很多生物研究中，由于所研究的目的基因豐度較低，從而使得由低豐度mRNA通過轉錄獲得全長cDNA很困難。近年來發展成熟的cDNA末端快速擴增(RACE)技術為從低豐度轉錄快速
RACE服務
這時我們可以根據基因的一段已知序列(或一段同源序列)，利用3'-Race方法獲得該基因的3'端序列，或者利用5'-Race方法得到該基因的5'端序列。服務流程:1、先由您提供背景資料，其中包括已知的DNA序列部分，RNA的情況，所擴增基因的估計長度，是否具有同源序列等
RACE技術擴增構建全長cDNA文庫
實驗概要利用RACE(利用PCR技術快速擴增全長mRNA)技術構建全長cDNA文庫是傳統C庫構建技術的改進。本實驗即是利用寡核苷酸帽法，進行全長C庫的構建，從而掌握RACE技術的原理與基本操作方法。實驗原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子結構作為標簽，用通用引物識別并配對標簽序
RACE技術在基因工程抗體中的應用
前言20世紀80年代后期，隨著分子生物學的迅速發展，使得人們可以通過基因工程技術對天然的分子進行人為的改造，這為抗體藥物帶來了新的突破點和希望。了解和闡明抗體分子的結構及功能，為人類疾病診斷及治療提供了新的推動力。基因工程抗體?為了解決傳統的鼠源性單抗存在的弊端,對鼠源性單抗進行改進以及人源化單抗的
PCR實驗技巧5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染