轉染細胞的穩定篩選實驗
實驗材料 轉染細胞試劑、試劑盒 抗生素培養基胰酶儀器、耗材 6孔板24孔板96孔板CO2培養箱濾紙片培養瓶實驗步驟 1．確定抗生素作用的最佳濃度：不同的細胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預試驗，確定抗生素對所選擇細胞的最低作用濃度。1) 提前24 小時在96 孔板或24 孔板中接種細胞8 孔，接種量以第二天長成25%單層為宜，置CO2 孵箱中37℃培養過夜。2) 將培養液換成含抗生素的培養基，抗生素濃度按梯度遞增（0, 50, 100, 200,400, 600, 800 和1000μg/ml）。3) 培養10-14 天以絕大部分細胞死亡濃度為準,一般為400-800μg/ml,篩選穩定表達克隆時可比該濃度適當提高一個級別維持時使用篩選濃度的一半. 2．轉染按前面的步驟進行。 3．轉染72 小時后按1:10 的比例將轉染細胞在6 孔板中傳代，換為含預試驗......閱讀全文
實驗是否需要篩選穩定株？
實驗是否需要篩選穩定株？能夠達到穩定表達的方法不止穩定株一種哦。我們使用慢病毒感染細胞，也一樣可以達到穩定表達的效果。什么原理呢？*慢病毒是整合型的逆轉錄病毒載體，感染細胞后，攜帶的外源片段會直接整合入細胞的基因組DNA中，并能夠隨細胞分裂穩定傳代。所以對于大多數實驗，包括細胞周期、凋亡、增殖等功能
轉染細胞的穩定篩選實驗
本實驗主要用于獲得含目的外源基因的真核細胞。實驗方法原理外源基因轉染真核細胞后整合入基因組DNA，能夠長期存在于細胞中，隨染色體復制而傳給子代。外源基因進入培養細胞一般要經過幾天才能夠整合入基因組DNA。實驗材料轉染細胞試劑、試劑盒抗生素培養基胰酶儀器、耗材6孔板24孔板96孔板CO2培養箱濾紙片培
轉染細胞的穩定篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 外源基因轉染真核細胞后整合入基因組DNA，能夠長期存在于細胞中，隨染色體復制而傳給子代。外源基因進入培養細胞一般要經過幾天才能夠整合入基因組DNA。 實驗材料
轉染細胞的穩定篩選實驗
實驗材料?轉染細胞試劑、試劑盒?抗生素培養基胰酶儀器、耗材?6孔板24孔板96孔板CO2培養箱濾紙片培養瓶實驗步驟?1．確定抗生素作用的最佳濃度：不同的細胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預試驗，確定抗生素對所選擇細胞的最低作用濃度。1) 提前24 小時在96 孔板或24 孔板中接種細
篩選穩定表達細胞株轉染后多久藥物篩選
穩定細胞株篩選是一個長期的過程，穩定細胞株篩選優化，有許多條件需要摸索，而且是從源頭開始①在構建載體時，目的基因直接整合到細胞染色體組上，最好不要通過先瞬轉在篩選穩定細胞株的這種方法，因為轉染效率沒有保證②高表達載體的構建，哺乳動物表達量一直是它自身的缺點，最好根據高表達載體定向的馴化細胞，提高蛋白
G418篩選穩定表達細胞系
1.G418的配制：取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸餾水至10ml，過濾消毒，4度保存。2.細胞培養：取待測培養細胞，制備成細胞懸液，按等量接種入多孔培養板中，培養6小時左右開始加藥。3.制備篩選培養基：在100ug/ml~1000ug/ml范圍內確定幾個梯度，比如先做個100
免疫篩選實驗
實驗材料 cDNA試劑、試劑盒 BHI氯霉素NaOHSSC氯仿異戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸鈉免疫沉淀緩沖液儀器、耗材 轉子硝酸纖維濾膜離心管微量多孔洗滌儀實驗步驟 1. ?往微量滴定板的每孔中加入250 μl 含適當抗生素的選擇性BHI培養液，并分別接種獨立的cDNA克隆，37℃溫育過
免疫篩選實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 cDNA 試劑、試劑盒
免疫篩選實驗
根據抗原-抗體相互作用的原理從群體中選出目的物的技術。如用抗體檢測表達型的基因文庫所合成的蛋白質，從而篩選出目的基因的克隆。實驗方法基本方案 實驗材料 cDNA? 試劑、試劑盒 BHI 氯霉素 NaOH SSC 氯仿 異戊醇 TES SDS mRNA 甲硫氨酸 乙醇 乙酸鈉 免疫沉淀緩沖液? 儀器、
免疫篩選實驗
根據抗原-抗體相互作用的原理從群體中選出目的物的技術。如用抗體檢測表達型的基因文庫所合成的蛋白質，從而篩選出目的基因的克隆。實驗材料cDNA試劑、試劑盒BHI氯霉素NaOHSSC氯仿異戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸鈉免疫沉淀緩沖液儀器、耗材轉子硝酸纖維濾膜離心管微量多孔洗滌儀實驗步驟1.
G418篩選穩定表達細胞系PROTOCOL
1.G418的配制： 取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸餾水至10ml，過濾消毒，4度保存。2.細胞培養：取待測培養細胞，制備成細胞懸液，按等量接種入多孔培養板中，培養6小時左右開始加藥。3.制備篩選培養基：在100ug/ml～1000ug/ml范圍內確定幾個梯度，比如先做個10
YAC實驗——YAC文庫篩選
實驗步驟1. ?YAC中心實驗室用于篩選文庫的方法進展很快。2. ?將一塊或多塊微量滴定板微孔中的YAC克隆轉印到尼龍膜上，用單拷貝探針進行雜交，就可以篩選YAC文庫了。3. ?然而，由 于雜交實驗的信噪比較低以及制備所有的轉印尼龍膜所需的花費巨大，絕大多數實驗室已采用PCR方法來篩選文庫。4. ?
重組病毒噬斑篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 轉染細胞溶解產物 BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞 試劑、試劑盒
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材6孔 35 mm 組織培養板杯狀超
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料 轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒 完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材 6孔 35 mm 組織培養板
核轉位篩選實驗（一）
優點·?可重復性表型檢測· 既高通量又不犧牲質量的圖像獲取· 應用交互式預覽，大大減少分析設置時間·?統一的統計方法使結果更準確??躁郁癥（BD）是一種高度遺傳性的心理疾病，它影響到全球大概1%的人口。1949 年鋰被第一次應用于躁郁癥，到目前為止鋰仍是治療BD 的主要藥物。然而在一半的病例中，鋰并
高通量篩選神經毒性實驗
優點：完全自動化的圖像獲取與分析 ?快速得到每個細胞的多表型參數 ?實時監測活細胞的毒性，可持續幾分鐘至幾天 神經系統對許多毒性化合物以及自然環境中生成的有害物質非常敏感。在疾病發生過程中，神經毒性可以對大腦或者外周神經系統造成短暫或持續性的損傷，例如脊髓損傷，中風，創傷性腦損傷等。同時這種神經毒性
核轉位篩選實驗（二）
利用交互式的靈活的軟件分析數據MetaXpress? 軟件中的Translocation-Enhanced 應用模塊可以被用來鑒定核中以及定量與細胞核相關的其余部分中?-catenin-EGFP 的量（圖3）。對細胞核區間的劃分來源于被Hoechst 核染料染色的區域。然后用第二種波長的光（
G418篩選慢病毒感染穩定細胞株
用慢病毒篩選穩定細胞株，以G418篩選方法為例，篩選出穩定整合Neomycin抗性基因的細胞系。A、?G418抗生素最優濃度篩選?每種細胞對抗生素的敏感性不同，因此，準備建立穩定細胞系之前，需要確定能夠在10-14天殺死細胞的最佳濃度。方法如下：1、將細胞稀釋到1000個細胞/mL，接種到24孔板，
融合蛋白的免疫篩選實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LB頂層瓊脂糖疊氮鈉第一抗體儀器、耗材 硝酸纖維素濾膜實驗步驟 1. ?在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文庫的滴度，宿主菌為大腸桿菌LE392菌株，每個平板使用7 ml 1%LB頂層瓊脂。2. ?選擇適當的滴度鋪平板，于37℃溫育8 h。?3. ?
融合蛋白的免疫篩選實驗
基本方案 IPTG法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
實驗方法原理 Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶 RNA 分子特異性結合
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾
轉化克隆的篩選和鑒定實驗
實驗原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。實驗試劑1. LB培養基(加抗菌素)2. PCR用試劑3. 引物4. 質粒提取用試劑5. 酶切需要的限制性內切酶及其緩沖液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/L Mg
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗
實驗方法原理 SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的存在，可以形成發夾、假結、凸環、G-四聚體等多種空間結 構，它
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的存在，可以形
裸眼篩選重組桿狀病毒實驗
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，病毒粒子呈桿狀，基因組為雙鏈環狀DNA分子，DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內，大小在90~180 Kb 之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒瓊脂糖儀器、耗材解剖顯微鏡倒置顯微鏡實
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液 125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材 空氣培養箱平頭鑷子 裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維