摘要雙向電泳(Two-dimensional(2D) gel electrophoresis)是一項基于蛋白的兩種不同特性:電荷和質量來分離蛋白的技術。首先基于蛋白固有電荷,通過等電聚焦(isoelectric focusing IEF)進行第一向蛋白分離,然后根據蛋白的質量,在第二向中通過SDS-PAGE電泳進行蛋白分離。使用這兩種不同的分離技術的結果是增高了對蛋白的分辨率。傳統的2D技術費用高昂、操作煩瑣和耗費時間。ZOOM? IPGRunnerTM系統提供了進行第一向等電聚焦簡單而快速的方法,無需使用礦物油。使用7cm ZOOM?固定pH梯度膠條(immobilized pH gradient IPG strips)的第一向電泳和使用NuPAGE? Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM? Gels的第二向電泳總共可以在3小時內完成。前言雙向電泳(Two-dimensional(2D) gel electrop......閱讀全文
電泳是在溶劑中通過電場轉移帶電分子,任何帶電的離子或者基團放置在電場中都將會遷移。除非在它們的等電點,大多數生物聚合物在任何pH值時都帶有凈電荷,它們將會以與電荷密度成比例的方式移動。分子在電場中的遷移取決于電場的強度、凈電荷、分子的大小和形狀、離子強度、粘度和分子移動介質的溫度。作為一種分析工具,
實驗材料膠條實驗步驟對一新樣品,常最先使用寬范圍、線性PH3.5-10梯度 但對大多數樣品,這樣做會喪失 pH4-7 區域的分辦率,許多蛋白質的 pI 值在該區域。利用非線性 pH3.5-10 IPG IEF 膠在一定程度緩解這個問題。 PH3.5-10 非線性膠條在 pH4-7 區域的梯度要比 p
Competitive RT-PCR Strategy for Quantitative Evaluation of the Expression of Tilapia (Oreochromis niloticus) Growth Hormone Receptor Type IQuantizatio
DEAE-Affi-Gel Blue層析法分級分離IgG實驗材料抗血清、腹水或雜交瘤上清液試劑、試劑盒DEAE-Affi-Gel Blue、加樣緩沖液、洗脫緩沖液、晶體形式的NaN3儀器、耗材移液槍、燒杯實驗步驟1)根據制造商的說明準備DEAE-Aff1-Gel Blue柱子。于4℃用5倍柱床體積的
We have also been able to detect expression of this receptor in all studied tissues, which is consistent with the pleiotropic nature of growth hormone
9. Spontaneous germination. Some genotypes result in spontaneous ascospore germination (for example, the unpigmented ascospores of per-1 Type I). A si
甲醛洋菜膠體電泳 (formaldehyde-agarose gel electrophoresis)甲醛是一種常用的RNA 變性劑。用于(1)RNA的分離測定(2)RNA提純。實驗方法原理rRNA 占細胞RNA總量的80~85%,以ethidium bromide 染色后,呈現于膠體上的兩個主要R
3. Characterization of the method precision and repeatability.a. Ensemble PCRs in the same conditions established before using quantities of
儀器、耗材DBMS實驗步驟3.1 PROTICdb 概述在輸入或瀏覽數據時,每個最終用戶需要一個 PROTICdb 賬戶(由您的管理員創建 ) 。作為一個新用戶,首先要創建一個新的項目。一旦建立,該項目就屬于這個用戶,這個用戶有權授予其他用戶訪問權限。為確保數據一致性的精確度,盡量不要用手動輸入操作
2012中國食品與農產品質量安全檢測技術應用國際論壇暨展覽會日程安排 由中國儀器儀表學會分析儀器分會和中國儀器儀表學會農業儀器應用技術分會聯合主辦的“2012中國食品與農產品質量安全檢測技術應用國際論壇暨展覽會”,將于2012年6月5日至6日在北京國際會議中心舉辦,大會將同期舉辦“中國儀
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒乙醇儀器、耗材電泳儀墊片樣品梳實驗步驟1. 用水性實驗室去污劑徹底洗擦制膠用玻璃平板,接著用熱水、去離子水、95%乙酵依次沖洗,晾干。 2. 用粘膠棒在玻璃平板的底部邊緣擦上一道粘痕,快速地將Gel Bond 膠片以疏水面向下放在平板上,隔
試劑、試劑盒葉片懸浮緩沖液EDTA 水溶液硫脲緩沖液硫酸銨溶液SDS 溶液儀器、耗材細胞等電聚焦電泳儀等電聚焦托盤及蓋實驗步驟3.1 葉和根組織的收集和沉淀蛋白( 1 ) 從植物的中部切取綠色葉片,迅速放入塑料袋里冷卻。如果沒有冰箱,可先放到冰上,再放入 -20°C 保存。( 2 ) 對于根部組織,
實驗材料DNA 樣品試劑、試劑盒適當的限制性內切核酸酶正常和重排控制 DNA6 X gel 加樣緩沖液3 X 和 2 X SSC預雜交液探針DNA雜交液高鹽洗液低鹽洗液儀器、耗材潔凈的海綿跑膠緩沖液的循環泵Whatman 3MM 過濾紙UV 交聯劑平臺搖床培養器G50葡聚糖凝膠柱水浴離心導管有合適的
實驗材料模板DNA試劑、試劑盒10XPCR擴增緩沖液混合引物Taq DNA 聚合酶輕礦物油Qiaex Gel Extraction Kit (Qiagen)2X 甲酰胺載樣緩沖液M13序列泳道內標TBE 緩沖液預雜交液地高辛標記的探針Oligo 清洗緩沖液阻滯液堿性磷酸鹽連接的抗地高辛Fab片段檢測
實驗材料經單向凝膠電泳分離后的蛋白質樣品儀器、耗材濾紙玻璃板玻璃棒InstaStain Blue Gel Stain Paper微波爐塑料容器實驗步驟1.電泳結束后,在一塑料容器中倒入足夠浸沒凝膠的水,例如,一塊典型的 mini 膠(8 cmXl0 cm 或 8 cmX8 cm) 需要 IOOml
隨著蛋白質組學概念的提出,雙向電泳(2D gel electrophoresis)一度曾變得很流行。近幾年,因質譜技術的快速發展,LC-MS的熱度似乎更高。然而,在某些應用上,雙向電泳更有優勢。 雙向電泳提供了整個樣品的鳥瞰圖,而這是質譜無法比擬的。它可以對樣品中復雜的蛋白質進行整體性
實驗步驟一、材料1.動物一 年 中 的 問 一 時 間 在 不 同 米 樣 點 潮 落 時 采 集 貽 貝 Lmk,35?45 mm 長)或者是貝殼長度為 5 cm 的 紫 貽 貝 edwfe)。其中一個采樣點是有記錄的清潔區域,在這里采集到的動物作為對照。2. 富含過氧化物酶體組分的分離在分離過程
凝膠過濾也稱排阻層析、分子篩層析和凝膠層析。本實驗目的是了解凝膠過濾層析法測定蛋白質分子量的基本原理,鞏固柱層析的操作方法。實驗方法原理凝膠過濾( Gel Filt ration ) 也稱排阻層析( Exclusion Chromatography)、分子篩層析(Molecular Sieve Ch
試劑、試劑盒尿素去污劑還原劑載體兩性電解質儀器、耗材IPG 凝膠實驗步驟一、第一向1. 固相 pH 梯度凝膠或凝膠條的準備固相 pH 梯度凝膠的灌注及聚合方法請參閱 固相 pH 梯度等電聚焦 有關章節,如需要可切成 3~5 mm 寬的膠條在 -20℃ 保存一年。為避免繁瑣和復雜的灌膠和切膠條程序和保
多種用于蛋內質組學研究的蛋白質分離方法得到了發展,如基因芯片技術的應用. 蛋白復合物的質譜直接分析、親和標簽的使用以及大規模酵母雙雜交篩選系統。但是,二維聚丙烯酰胺凝膠電泳 (two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis, 2-DE) 依然是大
實驗步驟 基 本 方 案 1 全套單鏈抗體噬菌體載體的構建材 料新鮮分離的小鼠脾臟或者 IO7 雜 交 瘤 細 胞(單 元 1*3)R N A 提取試劑R T -P C R 試劑D E P C 水寡 核 苷 酸 引 物(表 14. 3.1)DNA marker瓊脂糖膠回收試劑盒(Qiaqu
凝膠過濾層析(gel filtration chromatography)法又稱排阻層析或分子篩方法,主要是根據蛋白質的大小和形狀,即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質,多是交聯的聚糖類物質,使蛋白質混合物中的物質按分子大小的不同進行分離。實驗材料蛋白質試劑、試劑
蛋白質翻譯后修飾 (PTM) 在細胞生物調節中發揮著基本作用。PTM 是 mRNA 翻譯后蛋白質的酶促共價化學修飾。蛋白質化學修飾非常重要,因為它們會潛在地改變蛋白質的物理或化學性質、組成、活性、細胞定位或穩定性。實際上,在氨基酸或蛋白質的 N 端或 C 端加入或移除化學基團會導致大部分蛋白質發生變
儀器、耗材開放源代碼軟件實驗步驟3.1 實驗設計1. 平行設計不同凝膠之間部分蛋白質點的量變是不可控的。重復樣品之間或從蛋白質樣品制備到二維凝膠染色的任何步驟的生物學差異,都是這些不可控變化的原因。已經表明,批次效應(即不同系列同時運行電泳和染色的二維凝膠的變化)對二維電泳的結果影響很大,因此在實驗
實驗方法原理試劑、試劑盒RPMI1640完全培養基秋水仙胺固定液Giemsa染液儀器、耗材倒置顯微鏡玻璃針實驗步驟一、顯微切割中期染色體的制備1.取0.5mL外周血與含PHA的4.5mLRPMI1640培養液混合,在37℃培養細胞64?68h。2.收獲細胞前20min在培養基中加入25ml秋水仙胺(
實驗方法原理常規聚丙烯酰胺凝膠電泳后的檢測,對于不同的目的,應采用不同的檢測方法。由于這種電泳方法不破壞蛋白質的生物活性,所以可選用的檢測方法很多。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液Tris-甘氨酸緩沖液貯液電極緩沖液樣品緩沖液過硫醆銨濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液實驗步驟一、早期染色方法用染料和生物大
實驗材料dCTP試劑、試劑盒乙醇次氯酸鈉β-葡萄糖醛酸酶基因活性測定液溴化乙錠儀器、耗材培養室MS 培養基實驗步驟一、轉基因插入位點的數目第一代( T0)轉基因植株外源基因的插入位點數目,一般都是通過遺傳方法進行鑒定。雖然遺傳分析可以在任何世代進行,但是一般選擇轉基因植株自交,或與野生型測交后得到的