從抗血清、腹水或雜交瘤上清液中純化免疫球蛋白G組分
DEAE-Affi-Gel Blue層析法分級分離IgG實驗材料抗血清、腹水或雜交瘤上清液試劑、試劑盒DEAE-Affi-Gel Blue、加樣緩沖液、洗脫緩沖液、晶體形式的NaN3儀器、耗材移液槍、燒杯實驗步驟1）根據制造商的說明準備DEAE-Aff1-Gel Blue柱子。于4℃用5倍柱床體積的加樣緩 沖液平衡（7 mL柱床體積/mL抗血清或腹水）。2)于4℃下透析含1g的樣品40 h,中間換2次加樣緩沖液（每次換大約4 L）3)加樣上柱，速度為10 mL/h。以同樣的速度用3倍柱床體積的加樣緩沖液洗脫未結 合的蛋白質。4)用洗脫緩沖液以10 mL/h的速度洗脫結合的1gG組分。以10 mL為一組分分部收集 洗脫液，并儲存于4℃，直至合并各組分。5) 每組分取30?50 μl,用10% SDS-PAGE在還原條件下分析，檢測含1gG 的組分。在還原條件下，IgG的重輕鏈將分開，相應的分子質量分別為50 OOO Da和25 O......閱讀全文
從抗血清、腹水或雜交瘤上清液中純化免疫球蛋白G組分
實驗方法原理 雖然親和層析法是進行特異性抗體純化的首選，然而有時這種純化方式卻非必需，或者無法實施進行（如有時抗原量不充足）。實驗材料 抗血清、腹水或雜交瘤上清液試劑、試劑盒 飽和硫酸銨溶液（SAS)儀器、耗材 透析膜（MWCO 12 000?14 000）、渦旋混合器實驗步驟 1)于 4℃ 不斷攪
從抗血清、腹水或雜交瘤上清液中純化免疫球蛋白G組分
DEAE-Affi-Gel Blue層析法分級分離IgG實驗材料抗血清、腹水或雜交瘤上清液試劑、試劑盒DEAE-Affi-Gel Blue、加樣緩沖液、洗脫緩沖液、晶體形式的NaN3儀器、耗材移液槍、燒杯實驗步驟1）根據制造商的說明準備DEAE-Aff1-Gel Blue柱子。于4℃用5倍柱床體積的
從抗血清、腹水或雜交瘤上清液中純化免疫球蛋白G組分1
飽和硫酸銨沉淀IgG實驗方法原理雖然親和層析法是進行特異性抗體純化的首選，然而有時這種純化方式卻非必需，或者無法實施進行（如有時抗原量不充足）。實驗材料抗血清、腹水或雜交瘤上清液試劑、試劑盒飽和硫酸銨溶液（SAS)儀器、耗材透析膜（MWCO 12 000?14 000）、渦旋混合器實驗步驟1)于 4
蛋白質分離和分析——免疫沉淀
實驗步驟?基 本 方 案 1 用非變性去垢劑裂解細胞制成的懸液進行免疫沉淀材 料未標記或標記的細胞懸液P B S ，冰預冷非變性裂解緩沖液，冰預冷5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料（Sigma， Amersham Pharmacia Biotech)保存于含 0
單克隆抗體上清制備實驗
與多克隆抗血清相比，采用單克隆抗體（MAb）的最主要的優勢就是有可能得到大量的特異性單克隆抗體可供應用。MAb 制劑通常包括雜交瘤上清、由接種了雜交瘤的小鼠制備的腹水，以及純化的 MAb。雜交瘤上清容易制備，特別是用于制備大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的濃度則相對較低。為得到純化的制劑，可
抗原抗體反應的應用
（1）抗原：免疫動物是制備抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、細菌或者其他蛋白質抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必須與大分子載體連接。抗原的用量視抗原種類及動物而異，—次注射小鼠可以少至幾個微克，免、羊甚至更大的動物每次注射的量就相應增加，從幾百μg/次至幾mg/次。〔2）佐劑及乳化：佐劑可
免疫球蛋白G－(－I－g－G－)－的純化
硫酸銨沉淀可純化小鼠抗體的所有亞類和其他種屬抗體，本方案也可用于純化任何種 屬 的 IgM、 IgG 和 IgA。材 料腹水 或 MAb 上 清（單 元 1.4)VPBS飽 和 硫 酸 銨（SAS)硼 酸 鹽 緩 沖 液（可選）聚丙燏酰胺葡聚糖凝膠 S-200 Superfine (Pharmaci
抗原抗體反應的應用領域
免疫動物 （1）抗原：免疫動物是制備抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、細菌或者其他蛋白質抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必須與大分子載體連接。抗原的用量視抗原種類及動物而異，—次注射小鼠可以少至幾個微克，免、羊甚至更大的動物每次注射的量就相應增加，從幾百μg/次至幾mg/次。 〔2
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)3
雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體實驗方法原理在有少量酶標特異抗體但無法獲得純化抗原時，用該檢測方法篩選特異性抗體最為有效（圖1.1.4）。另外，這種方法也可利用那些結合同一抗原的不同單克隆抗體來繪制抗原表位圖。實驗步驟一、附加材料（其他材料見基本方案）包被抗體溶液（特異性針對待測種屬免疫球蛋白的
酶聯免疫吸附實驗—雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體
實驗步驟雙 抗 體 夾 心 ELISA 法檢測特異性抗體在有少量酶標特異抗體但無法獲得純化抗原時，用該檢測方法篩選特異性抗體最為有 效（圖 1.1. 4)。另外，這種方法也可利用那些結合同一抗原的不同單克隆抗體來繪制抗原表位圖。附 加 材 料（其他材料見基本方案）包 被 抗 體 溶 液（特異性針對待
免疫復合物的純化
實驗概要本實驗介紹了免疫復合物純化的基本操作步驟。主要試劑裂解緩沖液抗體蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％疊氮鈉裂解緩沖液配成10％(V／V)的混懸液，4℃保存)不含DTT的Laemmli樣品緩沖液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚藍)1mol／LDTT(
免疫球蛋白G(IgG)的純化
抗大鼠ic鏈單克隆抗體交聯瓊脂糖凝膠親和層析實驗步驟?一般情況下，單 克 隆 抗 體（尤其是大鼠源性）不能用 蛋 白A 或 蛋 白 G 交聯瓊脂糖凝膠層析純化，在此情況下，可使用抗大鼠Ig 輕鏈單克隆抗體交聯瓊脂糖凝膠層析柱來結合組織培養上清或腹水中的大鼠單克隆抗體，然后用逐步降低洗脫液p H 的方
免疫球蛋白純化技術——純化小鼠腹水中單克隆抗體
實驗方法原理根據離子交換原理，將經硫酸銨粗提的含McAbγ球蛋白上樣結合于層析柱上，通過增加洗脫液中的離子強度，洗脫并收集蛋白峰。實驗材料PBS試劑、試劑盒緩沖液儀器、耗材層析柱高效液相色譜儀實驗步驟1. ?腹水10000 g離心10 min，除去細胞和雜質，在4 ℃條件下逐滴加入飽和硫酸銨溶液，使
人用單克隆抗體質量控制技術指導原則2
3、特異性?測定單抗對靶抗原的特異性；對多株單抗識別的抗原決定簇進行相關性分析。?4、交叉反應?按附錄要求。?免疫組織化學法測定單抗與人體組織交叉反應，用冰凍及石蠟包埋的各種正常臟器組織測定。來源于腫瘤相關抗原的單抗應進行與各種腫瘤組織的交叉反應試驗。?5、效價測定?用適宜方法測定。（三）其他原材料
IgM的純化
大多數IgM類抗體是優球蛋白不溶于水，故可用雙蒸水透析純化IgM。對那些溶于水的IgM類抗體可用飽和硫酸銨沉淀。沉淀后可以采用顆粒排斥層析法(凝膠過濾)進一步純化。 顆粒排斥層析(size-exclusion chromatography)法又稱分子篩層析或凝膠過濾，是利用微孔凝膠分離
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)1
間接ELISA法檢測特異性抗體實驗實驗方法原理該檢測方法使用毫克級的純化或半純化抗原，能篩選抗血清和雜交瘤上清液中的特 異性抗體（圖1.1. 1)。Img純化抗原可用于80?800個微量滴定板的篩選。實驗步驟一、實驗材料：顯色劑：堿性磷酸酶標記的蛋白A (Sigma公司），堿性磷酸酶標記的蛋白G (
酶聯免疫吸附試驗—抗體檢測實驗－(ELISA－試驗)
實驗方法原理 該檢測方法使用毫克級的純化或半純化抗原，能篩選抗血清和雜交瘤上清液中的特 異性抗體（圖1.1. 1)。Img純化抗原可用于80?800個微量滴定板的篩選。實驗步驟 一、實驗材料：顯色劑：堿性磷酸酶標記的蛋白A (Sigma公司），堿性磷酸酶標記的蛋白G (Calbiochem公司），堿
馬傳貧病毒(EIAV)單克隆抗體的制備
材料與方法?1．抗原動物及免疫方法抗原為哈爾濱獸醫研究所保存的馬傳貧病毒株培養物制備的可溶性抗原。免疫動物為6～8周齡的Balb/c鼠。初次免疫用含完全佐劑抗原0.2ml（病毒含量為1.0×108／ml制備的可溶性抗原）腹腔接種，經2周再次免疫接種，應用不完全佐劑抗原0.2ml腹腔接種，再經3周強化
高親和力高純度零污染的細胞培養級抗體制備指南
單克隆抗體(monoclonal antibody，MAb)，是針對專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，主要原理是利用產生抗體的B細胞與骨髓瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。目前大量制備單抗的方法主要有兩種方法：一種是動物體內生產法（腹水制備），在小鼠腹腔內接種
單克隆抗體制備(McAb－production)的基本過程
抗原提純與動物免疫? 對抗原的要求是純度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原，可取1×107個細胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐劑并經充分乳化，如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用以動物免疫。? 選擇與所用骨髓瘤細胞同源的BALB/c健康小鼠，
雜交瘤技術基本程序與方法11
（A）免疫擴散法?這種方法簡便、準確，最常用。被檢的McAb樣品通常為雜交瘤細胞培養上清液，由于其中單抗的濃度較低，應先將其濃縮10-20倍左右再檢測。小鼠腹水中的單抗濃度雖很高，但也含有小鼠本身的各類Ig，它們也會與相應抗血清發生反應，使鑒定結果出現混亂，即使將腹水稀釋10-20倍后再檢測也不能完
單克隆抗體培養上清與腹水的制備——雜交瘤的大規模制備
實驗步驟附 加 材 料（其 他 材 料 見備選方案 1 )PBS, 4°C1.增 殖 雜 交 瘤（見備選方案 1 ，步 驟 1?4)，但與之前不同的是，當細胞生長密度適中或處于穩定生長期時停止培養。根據所需細胞數量配置多個 175 cm2 培 養 瓶（每個培養瓶可盛 2. 4L 培養基，每毫升培養基
酶聯免疫吸附試驗——抗體檢測實驗－(ELISA－試
間接ELISA法檢測特異性抗體實驗 備選方案1: 直接競爭ELISA法檢測可溶性抗原實驗 備選方案 2: 抗體夾心 ELISA 法檢測可溶性抗原 備選方案3：雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體 備選方案4：夾心ELISA法檢測同種型實驗
免疫沉淀實驗——抗Ig血清免疫沉淀放射性標記抗原
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒SDS儀器、耗材離心機搖床實驗步驟1. ?按基本方案進行，但以下說明的操作步驟已經修改：?（2a）按每毫升加入2 μl 正常血清的量對放射性標記抗原進行預澄清處理，加入適量的抗血清，于4℃放置12~18 h， 111 000 g 離心10 min，保留上清。?（4a）加入1
抗體檢測以及雜交瘤細胞的選擇
（一）抗體檢測用檢測抗體的方法從雜交細胞中篩選出生產指定抗體的雜交株是很重要的。檢測抗體的方法很多，從沉淀反應到放射免疫測定。由于細胞培養液中的抗體濃度通常是很低的，而且傳統的檢測方法多是以多價抗原與多克隆抗血清相反應。雜交瘤產生的抗體則是單克隆的，所以并不是每項方法都能適用。一定要選擇敏感的、快速
抗體檢測及雜交瘤細胞的選擇
（一）抗體檢測用檢測抗體的方法從雜交細胞中篩選出生產指定抗體的雜交株是很重要的。檢測抗體的方法很多，從沉淀反應到放射免疫測定。由于液中的抗體濃度通常是很低的，而且傳統的檢測方法多是以多價抗原與多抗血清相反應。雜交瘤產生的抗體則是單的，所以并不是每項方法都能適用。一定要選擇敏感的、快速的、一次又能檢測
辣根過氧化物酶標記試劑對果蠅類標本的染色檢測
實驗概要本實驗介紹了果蠅類標本的辣根過氧化物酶標記試劑染色檢測操作流程。實驗原理果蠅類標本被固定及透化處理后，可加入抗體。如同其他免疫組化技術一樣可以直接用標記的一抗，或者通過標記的二級試劑(能與一抗特異性結合)進行檢測。一般而言，直接標記一抗產生的信號更為清晰，背景較低。不足之處在于如檢測多種抗原
辣根過氧化物酶標記試劑對果蠅類標本的染...
實驗概要本實驗介紹了果蠅類標本的辣根過氧化物酶標記試劑染色檢測操作流程。實驗原理果蠅類標本被固定及透化處理后，可加入抗體。如同其他免疫組化技術一樣可以直接用標記的一抗，或者通過標記的二級試劑(能與一抗特異性結合)進行檢測。一般而言，直接標記一抗產生的信號更為清晰，背景較低。不足之處在于如檢測多種抗原
單克隆抗體技術：抗體檢測
用檢測抗體的方法從雜交細胞中篩選出生產指定抗體的雜交株是很重要的。檢測抗體的方法很多，從沉淀反應到放射免疫測定。由于細胞培養液中的抗體濃度通常是很低的，而且傳統的檢測方法多是以多價抗原與多克隆抗血清相反應。雜交瘤產生的抗體則是單克隆的，所以并不是每項方法都能適用。一定要選擇敏感的、快速的、一次又能檢
辛酸－硫酸銨法(bitterammonium－sulfate－law)從人血清中純化IgG
一、實驗目的初步掌握從血清中提取純化IgＧ的方法步驟。2. 了解辛酸－硫酸銨法純化IgG 的原理。二、實驗原理辛酸—硫酸銨法分兩步進行。第一步用辛酸沉淀雜蛋白，辛酸為短鏈脂肪酸，在酸性條件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig 蛋白質；第二步利用硫酸銨鹽析將Ig 沉淀下來，操作步驟如圖3－10所示