cDNA宏陣列方法分離擬南芥的臭氧應答基因實驗(二)
注意事項1.所有的試劑必須用電阻高于 17. 6 的雙蒸水配制。2.提取 RNA 所用的玻璃器具必須于 180°C 烘烤至少 8 h 以滅活 RNase。除緩沖液外的所有溶液都要用 0 ?1 % DEPC水 配 制（見注釋 3)。 RNase 的污染主要來源于實驗人員的手，所以進行 RN A 實驗時需要戴一次性手套。3.DEPC 可與胺迅速反應，所以不能用來配制含有緩沖成分的溶液，比如 Tris 等。可用新鮮啟封的 Tris 結晶物制備無 RNase 的溶液。4.DEPC 可能致癌，應小心使用。 .5.R N A 的濃度可以通過取部分終產物測 OD26。確定。 OD26 q 為 1 的溶液中含 RNA約 45 / ig/mL。6.甲基化的 dCTP (5'-methyl dCTP) 代 替 dCTP 進 行 cDNA的第一鏈合成反應，防止片段內的 XAo I 位點被酶切 7.由于睡菌體Fl 的 gene II ......閱讀全文
基因合成實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?dNTPDAN聚合酶乙醇TE限制性內切核酸酶緩沖液儀器、耗材?水浴鍋培養箱實驗步驟 1.? 將兩種寡核苷酸各1 μg加入微量離心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×測序酶緩沖液。70℃加熱5 min，然后在合適的退火溫度下保溫5? min，取2 μl 留待以后
基因合成實驗
基因合成可應用于：（1）代謝通路合成；（2）基因網絡構建；（3）疫苗設計。難度系數??2.0共2人點評打分點評實驗，有機會獲丁當獎勵?+收藏?8人收藏基因合成實驗標簽： 基因 合成基因合成可應用于：（1）代謝通路合成；（2）基因網絡構建；（3）疫苗設計。基因合成實驗實驗方法原理基因合成是指在體外人工
基因合成實驗
基因合成可應用于：（1）代謝通路合成；（2）基因網絡構建；（3）疫苗設計。實驗方法原理基因合成是指在體外人工合成雙鏈DNA分子的技術，與寡核苷酸合成有所不同：寡核苷酸是單鏈的，所能合成的最長片段僅為100nt左右，而基因合成則為雙鏈DNA分子合成，所能合成的長度范圍50bp-12 kb。基因合成是用
基因合成實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 基因合成是指在體外人工合成雙鏈DNA分子的技術，與寡核苷酸合成有所不同：寡核苷酸是單鏈的，所能合成的最長片段僅為100nt左右，而基因合成則為雙鏈DNA分子合成，所能合成的長度范圍50bp-12 kb。基因合成是用人工方法合
基因置換實驗
—步基因破壞法 兩步基因置換法 質粒改組 構建融合蛋白 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌株7-1 BY4741
基因互補實驗
實驗方法原理?互補作用可以用來確定兩個突變是屬于同一基因還是屬于不同的基因。如果是同一基因內兩個不同位點的突變,它們就不能互補;如果是不同基因的突變則是互補的,此為基因間互補。有時同一基因內的兩個突變位點也能發生基因內互補,但基因內互補所恢復的酶活性一般最多只有野生型酶活性的25%,而基因間互補則為
基因互補實驗
實驗方法原理互補作用可以用來確定兩個突變是屬于同一基因還是屬于不同的基因。如果是同一基因內兩個不同位點的突變,它們就不能互補;如果是不同基因的突變則是互補的,此為基因間互補。有時同一基因內的兩個突變位點也能發生基因內互補,但基因內互補所恢復的酶活性一般最多只有野生型酶活性的25%,而基因間互補則為1
基因置換實驗———步基因破壞法
基因置換是酵母研究中最有效和最重要的技術之一。這種技術能使一個在染色體正常位置的基因與其離體條件下構建的等位基因進行置換，使置換前后的菌株僅僅在這個特殊的等位基因上存在遺傳差異。利用這種方法可以分析在基因克隆中由無效突變 (null mutationr) 或其他任何類型突變所引起的表型變化。無論在理
PCR基因擴增實驗
[實驗目的]通過本實驗學習PCR反應的基本原理與實驗技術。[實驗原理]多聚酶鏈式反應（polymerase chain reaction,PCR）的原理類似于DNA的天然復制過程。在待擴增的DNA片段兩側和與其兩側互補的兩個寡核苷酸引物，經變性、退火和延伸若干個循環后，DNA擴增2n倍。1．變性：加
報告基因實驗
實驗方法原理報告基因是一個分子生物學概念，它是指一類在細胞、組織/器官或個體處于特定情況下會表達并使得他們產生易于檢測、且實驗材料原本不會產生的性狀的基因。作為報告基因，在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件：①已被克隆和全序列已測定；②表達產物在受體細胞中本不存在，即無背景，在被轉染的細胞中
動物實驗技術：轉基因小鼠制備實驗
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，
轉基因小鼠制備實驗
實驗材料 小鼠試劑、試劑盒 HCGPMSG透明質酸酶戊巴比妥鈉儀器、耗材 顯微鏡鑷子持卵針注射針實驗步驟 1. ?選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。?2. ?47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合
動脈的基因轉移實驗
實驗材料 幼年家豬性別任意病毒或非病毒的包含編碼重組基因的載體試劑、試劑盒 阿斯匹林Telazol甲苯噻嗪異氟烷無菌的磷酸鹽緩沖溶液儀器、耗材 導管（適合豬用的）和器械標準的手術器械Balfour牽引器絲帶兩個氣囊導管壓力牽引器血液動力監護儀可吸收的縫線皮膚鎖環實驗步驟 1.在手術前 2 天，給幼年
轉基因小鼠制備實驗
實驗步驟 1. 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2. 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3. 第二天上午9:00前觀察
轉基因小鼠制備實驗
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。?2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。?3、第二天上午9:00前觀察供體、受
基因敲除的實驗步驟
構建重組基因載體絕大多數的基因敲除策略都是基于同源重組的機制，其基因載體包括載體骨架、靶基因同源序列和突變序列及選擇性標記基因等非同源序列，其中同源序列是影響同源重組效率的關鍵因素。用電穿孔顯微注射方法把重組DNA轉入受體細胞（一般是胚胎干細胞）核內。同源重組基因重組時以載體的同源序列取代染色體靶位
基因傳遞到肌肉實驗
實驗材料 新生的小鼠試劑、試劑盒 乙醇PBS膠原蛋白酶 分散酶 氯化鈣溶液F-10肌肉原代細胞培養基分化培養基儀器、耗材 用于斷頭術的器具或者是用于二氧化碳吸人的裝置鋒利的彎手術剪（滅菌） 組織培養板滅菌的剃刀刀片尼龍網桌面離心機膠原包被的組織培養板帶相位光軸的倒置顯微鏡實驗步驟 1.用斷頭術或者二
基因置換實驗——質粒改組
實驗材料酵母菌株7-2 2404質粒pDB141pRG68試劑、試劑盒誘變的pDB141 DNA儀器、耗材YPD 平板HC-leu平板5-FOA平板實驗步驟第 1 天將菌株 7-2 在 YPD 平板上劃線，30°C 培養。第 3 天挑一個豐滿的菌株 7_2 菌落，接種到 5 mlYPD 培養液，30
轉基因小鼠制備實驗
轉基因小鼠制備實驗可應用于：（1）動物發育研究；（2）研究細胞功能調控機制。實驗方法原理遺傳的基本物質是DNA，基因是位于染色體上有遺傳效應的DNA片段，對于儲存在生物全套染色體中的全部遺傳信息，可稱其為基因組。不同種類、不同個體的生物基因組成是不同的，對動物個體來說，非自身的基因成分屬于外源基因，
基因敲除的實驗步驟
實驗步驟構建重組基因載體絕大多數的基因敲除策略都是基于同源重組的機制，其基因載體包括載體骨架、靶基因同源序列和突變序列及選擇性標記基因等非同源序列，其中同源序列是影響同源重組效率的關鍵因素。用電穿孔顯微注射方法把重組DNA轉入受體細胞（一般是胚胎干細胞）核內。同源重組基因重組時以載體的同源序列取代染
基因傳遞到肝臟實驗
實驗材料 成年小鼠試劑、試劑盒 乙醇重組腺病毒懸液儀器、耗材 帶鐵絲蓋的鼠籠加熱燈小鼠限制器棉紗店注射器實驗步驟 1.一個鼠籠裝 6 只小鼠，加熱燈置鐵絲蓋上方 6~10in(15~25 cm) 給小鼠取暖。觀察小鼠，約 5 min 后，它們會在角落里縮做一團，準備注射。不要在角落的位置照射小鼠。2
基因置換實驗——兩步基因置換法
實驗步驟
染色體基因定位實驗
實驗方法原理基因是由平均1000～3000核苷酸組成的序列，在光學顯微鏡下是難以識別的。為顯示染色體上特定基因必須具備以下三個重要條件：1. ?需要具有能與目的基因相特異接合（互補）的核苷酸序列即探針（Probe）；2. ?需要有能與探針相結合的標記物（常用同位素和熒光素）；3. ?制備出良好的染色
轉基因植株的選擇實驗
實驗材料?幼胚盾片試劑、試劑盒?2 4-D AgNO3毒莠定特美汀草銨膦玉米素儀器、耗材?誘導培養基再生培養基實驗步驟 1. 將可能含有轉化細胞的幼胚盾片置于愈傷誘導培養基上培養產生愈傷組織，誘導培養基中添加 0.5 mg/L 2 ,? 4-D 和 10 mg /L AgNO3。對農桿菌處理
基因置換實驗——構建融合蛋白
實驗材料菌株BY4741質粒PDB118試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材YPD 平板YPD 液體培養基血球計數板SC-his平板實驗步驟YPD 平板 第 1 天將菌株 7-3 在 YPD 平板上劃單克隆，30°C 下培養兩天。第 3 天挑取單克隆，在 5 mlYPD 液體培養基中培養，30°C 過
表達譜基因芯片實驗
表達譜基因芯片可應用于：（1）疾病診斷；（2）新藥開發；（3）環境保護。實驗方法原理按照預定位置固定在固相載體上很小面積內的千萬個核酸分子所組成的微點陣陣列。在一定條件下，載體上的核酸分子可以與來自樣品的序列互補的核酸片段雜交。如果把樣品中的核酸片段進行標記，在專用的芯片閱讀儀上就可以檢測到雜交信號
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 乙醇 ? ? ? ?
基因擴增實驗室要求
對 PCR 實驗進行嚴格設置的惟一目的就是為了避免污染。原則上臨床基因實驗室應分為四個隔開的工作區域，并且每一區域都應有專用的儀器設備，即①試劑貯存和準備區；②標本制備區；③擴增反應混合物配制和擴增區；④擴增產物分析區。如使用擴增和產物檢測同時完成的熒光定量 PCR 方法，或全自動分析儀法如?Cob
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗試劑、試劑盒植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材EP 管移液槍實驗步驟1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適
基因表達的系列分析實驗
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技術的一種高靈敏度研究基因表達的方法，可得到 mRNA 文庫的定性及定量信息。自 1995 年此技術產生以來，發表了大量的相關文章，表明 SAGE 可同時檢測大量基因的表達水平的變化。實驗材料玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒溶液與緩沖液引