關于重組子篩選的介紹
根據載體的遺傳特征篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。至今使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（MCS），它并不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β -半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用于可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。這樣，LacZ基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。由 α-互補而產生的LacZ+細菌在誘導劑IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在時產生藍色菌落，因而易于識別。然而，當外源DNA插入到質粒的多克隆位點后，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍白斑......閱讀全文
關于重組子篩選的介紹
根據載體的遺傳特征篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。至今使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（MCS），它并不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β -半乳糖苷酶的氨基
關于重組子的篩選方法介紹
1、抗生素篩選法：菌株為某種抗生缺陷型，而質粒上帶有該抗性基因（如氨芐青霉素，卡拉霉素等）這樣只有轉化子才能在含該抗生素的培養基上長出。本實驗利用抗生篩選轉化子。 2、互補法：至今使用的許多載體（如PUC系列）有含有一個大腸桿菌DNA的短區段，其中含有β－半乳糖苷酸基因（lacZ）的調控序列和
重組子的篩選的原理和方法
根據載體 的遺傳特征篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。現在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點(MCS)，它并不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而
重組子篩選的原理和實驗方法
根據載體的遺傳特征篩選重組子,如a-互補、抗生素基因等。現在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段， 中有β半乳糖苷酶基因(acZ)的調控序列和前146個氨基酸的編碼信息。 在這個編碼區中插入了一個多克隆位點(MCS),它并不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β半乳糖苷酶的氨基端而
關于重組子的基本信息介紹
重組子（recon）：兩個位于不同載體或染色體上的突變位點之間可發生交換產生野生型的最小單位，即不能由重組分開的基本單位。重組子（recombinant）另一定義是指，含有重組DNA分子的轉化細胞。 轉化（transformation）是將異源DNA分子導入另一細胞品系 [1] ，使受體細胞獲
重組質粒的篩選（抗生素平板篩選和α互補篩選）
重組DNA轉化受體細胞后，須在不同水平上進行篩選，以區別轉化子與非轉化子、重組子與非重組子以及鑒定所需的特異性重組子。在轉化過程中，并非每個受體細胞都被轉化；即使獲得轉化細胞，也并非都含有目的基因，所以需采用有效方法進行篩選。篩選的方法包括根據遺傳表型篩選、限制性內切酶分析篩選、核酸探針篩選、PCR
重組質粒的篩選與鑒定
摘要： 可以在蛋白質水平和目的基因功能水平等各個層次鑒定重組子。可以在 蛋白質 水平和目的基因功能水平等各個層次鑒定重組子.基因水平的鑒定有酶切鑒定、 PCR 鑒定、核酸雜交和基因序列分析等.蛋白質水平鑒定有插入失活雙 抗生素 對照篩選(例如 Te
重組病毒噬斑篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 轉染細胞溶解產物 BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞 試劑、試劑盒
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材6孔 35 mm 組織培養板杯狀超
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料 轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒 完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材 6孔 35 mm 組織培養板
關于DNA重組的重組修復介紹
有絲分裂和減數分裂期間由各種外源因子（例如紫外線，X射線，化學交聯劑）引起的DNA損傷都可以通過同源重組修復機制（HRR）來修復。 人類和嚙齒動物中減數分裂期間HRR所必需的基因產物的缺陷會導致不育 。人類HRR所必需的基因產物（例如BRCA1和BRCA2）的缺陷同時會增加患癌癥的風險。在細菌
關于基因重組的自然重組的介紹
自然界不同物種或個體之間的基因轉移和重組是經常發生的,它是基因變異和物種進化的基礎。自然界的基因轉移的方式有： 接合作用：當細胞與細胞、或細菌通過菌毛相互接觸時,質粒DNA就可從一個細胞（細菌）轉移至另一細胞(細菌）,這種類型的DNA轉移稱為接合作用（conjugation ）。 轉化作用（
重組質粒的連接、轉化及篩選
實驗材料 外源DNA 片段試劑、試劑盒 連接反應緩沖液T4 DNA 連接酶X-gal儲液IPTG儲液麥康凱選擇性培養基儀器、耗材 恒溫搖床臺式高速離心機恒溫水浴鍋電泳裝置電熱恒溫培養箱電泳儀移液槍eppendorf管
重組質粒的連接、轉化及篩選
第一節 概 述質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆 較小的DNA 片段(＜10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆 ,從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段, 然后體外使兩者相連接, 再用所得到重組質粒轉化細菌,即可完成。但在實
重組質粒的連接、轉化及篩選
實驗概要本技術以pBS質粒、E. coli DH5α為例介紹了重組質粒的連接、轉化及篩選。實驗原理本實驗所使用的載體質粒DNA為pBS，轉化受體菌為E.coli DH5α菌株。由于pBS上帶有Ampr 和lacZ基因，故重組子的篩選采用Amp抗性篩選與α-互補現象篩選相結合的方法。因pBS帶有Amp
重組質粒的連接、轉化及篩選
第一節 概 述質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆 較小的DNA 片段(＜10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆 ,從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段, 然后體外使兩者相連接, 再用所得到重組質粒轉化細菌,即可
重組質粒的轉化、篩選和鑒定
一、實驗目的1、學習克隆工作中最常用的雙酶切；2、學習將外源基因與質粒連接方法及操作技術；3、學習氯化鈣法制備大腸桿菌感受態細胞的技術；4、了解細胞轉化的概念及其在分子生物學研究中的意義。5、外源質粒DNA轉入受體菌細胞的技術以及篩選轉化體的技術。6、學習鑒定重組子的方法。二、 實驗原理重組子的建立
重組質粒的連接、轉化及篩選
重組質粒的連接、轉化及篩選主要用于獲得含有目的基因連接的重組子。實驗方法原理用特定的限制性內切酶切割載體DNA和外源DNA片段并進行純化，于體外使兩者相連接(若用T-載體，可直接用純化的PCR產物進行連接)，轉化宿主細菌后，利用藍白斑篩選原理對重組子進行挑選。由于載體上帶有Amp'和lacZ
重組質粒的連接、轉化及篩選
材料、設備及試劑 一、 材料 外源DNA片段: 自行制備的帶限制性末端的DNA溶液,濃度已知; 載體DNA: T-vector(Ampr ,lacZ),自行提取純化,濃度已知; 宿主菌: E. coli DH5α,或JM系列等具有α-互補能力的菌株。 二、 設備 恒溫搖床，臺式高速離心機，恒
陽性重組克隆的構建和篩選
實驗概要構建并篩選含有目的基因的候選陽性重組克隆。有助于理解目的基因與克隆載體的連接、轉化和篩選原理及流程。實驗原理1. 連接反應：利用經過限制性內切酶消化的線形載體與目的基因兩端暴露出的平末端或相同的粘性末端，使用T4 DNA 聚合酶將二者連接起來形成重組載體。2. 轉化過程：感受態細胞通過溫度敏
重組質粒的連接、轉化及篩選
重組質粒的連接、轉化及篩選主要用于獲得含有目的基因連接的重組子。實驗方法原理用特定的限制性內切酶切割載體DNA和外源DNA片段并進行純化，于體外使兩者相連接(若用T-載體，可直接用純化的PCR產物進行連接)，轉化宿主細菌后，利用藍白斑篩選原理對重組子進行挑選。由于載體上帶有Amp'和lacZ
重組克隆篩選（酶切鑒定）
【實驗目的】1.掌握質粒提取的基本方法的原理；2.學習和掌握限制性內切酶的使用方法。【實驗原理】重組克隆的篩選和鑒定是基因工程中的重要環節之一。不同的克隆載體和相應的宿主系統，其重組克隆的篩選和鑒定方法不盡相同。從理論上說，重組克隆的篩選是排除自身環化的載體、未酶解完全的載體以及非目的DNA片斷插入
重組片段的轉化及克隆和篩選
一、目的與原理轉化是指以質粒DNA或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。轉化技術在基因工程領域中占有極重要的地位。目前用得較多的轉化技術為將人工構建的重組質粒到如受體細胞，使重組質粒在受體細胞中穩定地復制和表達。二、材料和方法1.材料：大腸桿菌2.儀器：離心機，恒溫搖床，恒溫水浴，超凈工作臺，冰柜
重組DNA的轉化和藍白篩選
體外連接的重組DNA分子導入合適的受體細胞才能進行大量復制，增殖和表達，其首要目的是獲得大量的克隆基因。雖然PCR技術，體外轉錄及翻譯系統能部分達到大量擴增的目的，但畢竟受到體外操作的許多限制。重組質粒導入宿主細胞最常用的方法之一就是轉化（transformation）。轉化這一概念來源于遺傳學：細
重組質粒的轉化、篩選和鑒定操作
摘要： 學習克隆工作中最常用的雙酶切,將外源基因與質粒連接方法及操作技術. 一、實驗目的： ?1、學習克隆工作中最常用的雙酶切；2、學習將外源基因與質粒連接方法及操作技術；3、學習氯化鈣法制備 大腸桿菌 感受態細胞的技術；4、了解細胞轉化的概念及
關于轉染細胞篩選的介紹
1、確定抗生素作用的最佳濃度： 不同的細胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預試驗，確定抗生素對所選擇細胞的最低作用濃度。 1) 提前24 小時在96 孔板或24 孔板中接種細胞8 孔，接種量以第二天長成25%單層為宜，置CO2 孵箱中37℃培養過夜。 2) 將培養液換成含抗生
關于重組蛋白的介紹
重組蛋白的產生是應用了重組DNA或重組RNA的技術從而獲得的蛋白質。體外重組蛋白的生產主要包括四大系統：原核蛋白表達，哺乳動物細胞蛋白表達，酵母蛋白表達及昆蟲細胞蛋白表達。生產的蛋白在活性和應用方法方面均有所不同。根據自身的下游運用選擇合適的蛋白表達系統，提高表達成功率。
關于轉座重組的基本介紹
1944年，McClintock（1983年諾貝爾生理學或醫學獎獲得者）在研究玉米基因時發現：有些DNA片段可以在染色體DNA中移動位置。現已闡明：基因組DNA巾存在一些非游離的、能自復制或自剪切、并能以相同或不同拷貝在基因組中或基因組間移動位置的功能性片段，被稱為轉座元件（ transposa
關于基因重組的發展介紹
基因的分離定律1866年,奧地利學者G.J.孟德爾在他的豌豆雜交實驗論文中,用大寫字母A、B等代表顯性性狀如圓粒、子葉黃色等,用小寫字母a、b等代表隱性性狀如皺粒、子葉綠色等。他并沒有嚴格地區分所觀察到的性狀和控制這些性狀的遺傳因子。但是從他用這些符號所表示的雜交結果來看,這些符號正是在形式上代
關于重組修復的基本介紹
重組修復(recombination repairing)：復制含有嘧啶二聚體或其它結構損傷的DNA，但當復制到損傷的部位時，子代DNA鏈中與損傷部位相對應的部位出現缺口，新合成的子鏈比未損傷的DNA鏈要短一些。完整的母鏈與有缺口的子鏈重組，缺口由母鏈來的核苷酸片段彌補。合成重組后，母鏈中的缺口