農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養 3、煙草葉片與對數生長期農桿菌的共培養 4、抗性再生植株的篩選 【用具】：超凈工作臺、搖床、恒溫培養室、高壓滅菌器、冰箱、培養瓶，培養皿、500 mL三角瓶、50 mL與500 mL燒杯、酒精燈、槍形鑷子、手術刀。 【藥品與水】：① 按照培養基要求準備藥品；② 材料表面消毒劑：70%乙醇0.1% HgCl2③ 無菌水；④ 卡那霉素（kan）、羧芐青霉素(Cb)；⑤ 帶有外源基因的農桿菌由實驗室提供。 培養基: 1、LB培養基100ml； 2、MS 鹽溶液（pH 7.0）100ml,分裝到50ml三角......閱讀全文
農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養
農桿菌介導的植物遺傳轉化
實驗概要以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。主要試劑70%乙醇0.1% HgCl2無菌水卡那霉素(kan)羧芐青霉素(Cb)培養基：LB培養基100ml；MS 鹽溶液(pH 7.0)100ml，
農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物 ?遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養 3、煙草葉片與對
農桿菌介導的遺傳轉化程序
實驗概要農桿菌侵染實驗實驗步驟(1) 農桿菌菌液的制備??將農桿菌接種于附加50mg/L Km、50mg/L Sm、50mg/L Rif的YEB固體培養基上，28℃暗培養，至長出單菌落。用接菌環挑取單菌落，接種在5mL含相應抗生素的YEB液體培養基中，于28℃，200r/min 培養過夜。待
農桿菌的轉化
實驗概要本實驗介紹了農桿菌感受態細胞的制備及轉化方法。主要試劑YEP固體培養基，含有相應抗生素的YEP培養基，0.15mM NaCl，20mM CaC12，液氮，選擇平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )主要設備培養箱，搖床，離心機，-80℃冰箱實驗步驟1.
根癌農桿菌介導的植物轉化－葉盤轉化法
一、原理以根癌農桿菌介導的遺傳轉化是目前最有效的途徑之一。根癌農桿菌對植物釋放的化學物質產生趨化反應，向植物受傷組織集中。經共培養后，受傷部位的化學誘導物透過農桿菌的細胞膜使Ti質粒上的Vir基因活化。Vir基因產物使Ti質粒上的T－DNA進入植物細胞，并整合到植物核基因組中。插入在T－DNA左右邊
農桿菌介導水稻轉化
實驗概要本實驗介紹了農桿菌介導的水稻轉化。主要試劑GUS染色液：100 mmol/L NaPO4 (pH7.0)；0.1% Triton X-100；10 mmol/L EDTA；0.5 mmol/L亞鐵氰化鉀頭抱霉素，乙醇，次氯酸鈉溶液主要設備高速離心機，培養箱，人工氣候室實驗材料水稻種子實驗步驟
農桿菌介導轉化擬南芥
實驗概要1. 學習真核生物的轉基因技術及農桿菌介導的轉化原理。2. 掌握農桿菌介導轉化擬南芥 的實驗方法，了解擬南芥的生理特點及在基因工程實驗中應用實驗原理擬南芥（Arabidopsis thaliana）是一種十字花科植物，二年生草本，高7～40厘米，花期3～5月。廣泛用于植物遺傳學、發育生物學和
農桿菌轉化法的原理
選擇一種特制的空質粒載體（如PBI121質粒載體），其上要求含有T-DNA邊界序列（此處可參見詞條雙元表達載體系統），在序列之間含有復制原點、抗性基因、GUS報告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位點（以上這些構成了一個T-DNA區）。先通過雙酶切反應酶切空質粒載體和目的基因，再通過酶連反應連
農桿菌轉化法培養抗蟲棉
（1）圖中A為基因表達載體；農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，在構建基因表達載體時，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．（2）①過程是將基因表達載
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗
試劑、試劑盒：緩釋肥 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?乙酰丁香酮? 儀器、耗材：盆缽 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗
試劑、試劑盒緩釋肥乙酰丁香酮儀器、耗材盆缽植物支撐器LB 培養基通用型試管YEP 固體培養基TSIM 培養基實驗步驟一、材料1. 母體植株的生長( 1 ) 將母體植株種植于 12 , 7F ( 直徑為 13 cm) 的盆缽中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons? M2 培養土，并施用
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗（二）
5. 轉基因幼苗的生長需要用到以下材料：( 1 ) Jiffy 7 泥炭顆粒（Jiffy 產品， Norway)( 2 ) 播種托盤及相應的 24 孔穴盤（可任選供應商）( 3 ) 適合播種盤大小的培養箱（可任選供應商）6. 轉基因植株的生長需要用到以下材料：( 1 ) 12F（直徑 12 cm）盆
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗（一）
試劑、試劑盒 緩釋肥乙酰丁香酮儀器、耗材 盆缽植物支撐器LB 培養基通用型試管YEP 固體培養基TSIM 培養基實驗步驟 一、材料1. 母體植株的生長( 1 ) 將母體植株種植于 12 , 7F ( 直徑為 13 cm) 的盆缽中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons ?M2 培養土，
農桿菌侵染擬南芥花序的轉化方法
制備轉化用的農桿菌菌液準備：1．滅菌 試管 400毫升細長燒杯2瓶，離心瓶4-6個（250ml）。2．試劑：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶）+Kan 1;1000，Rif1:500。? ?1/2MS+2%蔗糖（滅菌115度20分鐘），Silwet在-20℃貯存。3．步驟：共轉化農桿菌：
梨樹農桿菌轉化體系的建立
實驗概要??? 以西洋梨豐產為試材建立農桿菌轉化體系，將抗真菌γ-硫堇蛋白Rs-afp1基因轉入梨離體葉片獲得了抗病的轉化植株。?主要試劑1. YEB（5.0g/L牛肉胨，5.0g/LDifco Bacto提取物，1.0g/L酵母提取物，5.0g/L蔗糖，15g/L瓊脂，50mg/L卡那霉素，pH值
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料植物凝膠pBract 質粒pSoup 質粒試劑、試劑盒利福平卡那霉素儀器、耗材MG L 培養基實驗步驟1. 組織培養基的準備提前準備好所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 3 ) 。所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適的
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料：植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? pBract 質粒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料?植物凝膠pBract 質粒pSoup 質粒試劑、試劑盒?利福平卡那霉素儀器、耗材?MG L 培養基實驗步驟 1. 組織培養基的準備提前準備好所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 3 ) 。所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻
農桿菌感受態的制備和轉化
雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，
農桿菌感受態的制備和轉化
雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，
農桿菌感受態的制備和轉化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要原理是通過電擊法或CaCl2、RbCl(KCl)等化學試劑處理，使農桿菌細胞膜的通透性發生暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞。 實驗材料
農桿菌感受態的制備和轉化
農桿菌感受態細胞主要用于將目的基因導入植物細胞。實驗方法原理主要原理是通過電擊法或CaCl2、RbCl(KCl)等化學試劑處理，使農桿菌細胞膜的通透性發生暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞。實驗材料農桿菌重組質粒試劑、試劑盒鏈霉素YM液體培養基CaCl2溶液甘油儀器、耗材離心管E
轉基因技術農桿菌介導轉化方法的介紹
農桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，并誘導產生冠癭瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。 因此，農桿菌是一
農桿菌侵染植物相關的注意事項
根癌農桿菌侵染植物是一個非常復雜的過程。根癌農桿菌具有趨化性，即植物的受傷組織會產生一些糖類和酚類物質吸引根癌農桿菌向受傷組織集中。研究證明，主要酚類誘導物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，這些物質主要在雙子葉植物細胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中，這也是單子葉植物不易被根癌農桿菌侵染的原因。還
農桿菌感受態細胞的制備和轉化
實驗概要本實驗介紹了根癌農桿菌GV3101感受態細胞的制備及凍融法轉化。主要試劑利福平，LB培養基，NaCl，CaCl2，YEP培養基，卡那霉素主要設備搖床，高速離心機，低溫冰箱，水浴鍋實驗材料根癌農桿菌GV3101單菌落實驗步驟1. 根癌農桿菌GV3101感受態細胞的制備?? 1) 挑取單菌落GV
簡述轉基因植物的農桿菌介導法
農桿菌的Ti質粒可以作為載體。Ti質粒上有兩個區域，一個是T-DNA區，這是能夠轉移并整合進植物受體的區段；另一個是Vir區，它編碼實現質粒轉移所需的蛋白質。將待轉化的外源基因先克隆在大腸桿菌質粒上，然后將此質粒轉入不會引起冠癭瘤的農桿菌（這種菌的Ti質粒已除去了T-DNA），使外源基因通過同源
發根農桿菌能促使植物生根等重要作用
促使植物生根 Ri質粒能誘導轉化植物產生大量毛根，促進植物生根，已引起了人們的高度重視，被人們廣泛使用。1985年它被應用于蘋果與扁桃的插條以改善生根狀況，從而有益于對干旱的抵抗。Hatta等發現發根農桿菌能誘導棗樹的插條生根，Caboni等用野生發根農桿菌1855感染胡桃的微小切口，誘導出發
感受態制備：農桿菌感受態的制備和轉化
雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗
實驗材料?農桿菌細胞試劑、試劑盒?根癌農桿菌甘油原液抗生素儀器、耗材?MG L 液體培養基實驗步驟 1. 從根癌農桿菌甘油原液中吸取 400 μl 加入含 10 ml MG/L 液體培養基并添加相應抗生素的 50 ml 無菌管中，28℃、250 r/min 搖床振蕩培養過夜（17~20 h) 至 O