分子標記方法：AFLP原理和操作步驟
AFLP原理：AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后PCR反應的引物結合位點。實驗中，根據需要通過選擇在末端上分別填加了1～3個選擇性核苷的不同引物，可以達到選擇性擴增的目的。這些選擇性核苷酸使得引物能選擇性地識別具有特異配對順序的內切酶片段，進行結合，導致特異性擴增。實驗試劑：Taq酶、EcoRI/ MseIEcoRI/ MseI接頭、E+A引物M+C引物、T4DNALigaseE和M引物、瓊脂、過硫酸胺、丙烯酰胺、尿素、硝酸銀、甲酰胺、dNTPs、 二甲苯青、冰醋酸、玻璃硅烷、50bpMark操作步驟：（一）基因組DNA提取和純化參考大量提取DNA實驗方......閱讀全文
分子標記方法：AFLP原理和操作步驟
AFLP原理：AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘
分子標記—AFLP原理和操作步驟
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后
分子標記—AFLP原理和操作步驟
AFLP可用于：（1）構建遺傳連鎖圖譜；（2）利用AFLP快速鑒別與目的基因緊密連鎖的分子標記；（3）AFLP輔助的輪回選擇育種；（4）研究基因表達與調控；（5）分類和進化研究；（6）甲基化研究等。實驗方法原理AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的粘末端順
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順
AFLP分子標記實驗
其基本原理是：以PCR(聚合酶鏈式反應)為基礎，結合了RFLP、RAPD的分子標記技術。把DNA進行限制性內切酶酶切，然后選擇特定的片段進行PCR擴增(在所有的限制性片段兩端加上帶有特定序列的“接頭”，用與接頭互補的但3-端有幾個隨機選擇的核苷酸的引物進行特異PCR擴增，只有那些與3-端嚴格配對的片
AFLP標記技術
實驗概要AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來(附圖)。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的
ISSR分子標記的實驗原理及操作流程
ISSR（inter-simple sequence repeat）標記是一種類似RAPD，但利用包含重復序列并在3’或5’錨定的單寡聚核酸引物對基因組進行擴增的標記系統，即用SSR引物來擴增重復序列之間的區域。其原理具體是，ISSR標記根據生物廣泛存在SSR的特點，利用在生物基因組常出現的SSR本
RAPD分子標記的實驗原理及操作流程
RAPD標記RAPD技術的全稱是隨機擴增多態性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA)，此技術建立于PCR基礎之上，使用一系列具有10個左右堿基的單鏈隨機引物，對基因組的DNA全部進行PCR擴增，以檢測多態性。由于整個基因組存在眾多反向重復序列，因此須對每一隨機
分子標記的概念和方法特點
分子標記(Molecular Genetic Markers)是以個體間遺傳物質內核苷酸序列變異為基礎的遺傳標記，是 DNA 水平遺傳多態性的直接的反映。與其他幾種遺傳標記——形態標記、同工酶標記、細胞標記相比，DNA 分子標記具有的優越性有：大多數分子標記為共顯性，對隱性的農藝性狀的選擇十分便利；
非標記抗體免疫電鏡技術原理、材料和操作方法
（一） 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡操作步驟
1．經典法（1）將被檢病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀釋的特異性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃過夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min離心90min。（4）吸去上清，將離心管口倒置于濾紙上，吸去殘留液體。（5）沉淀物中加少量H2?
熒光素標記抗體的操作步驟
? ? ? ? ? ?FITC熒光素標記抗體的操作步驟??????www.runwelltac.com當FITC在堿性溶液中與抗體蛋白反應時，主要是蛋白質上賴氨酸的r氨基與熒光素的硫碳胺鍵（thiocarbmide）結合，形成FITC-蛋白質結合物，即熒光抗體或熒光結合物。一個IgG分子中有86個賴
RFLP和RAPD技術原理和操作步驟
原理：DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段長度多態性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據不同品種（個體）基因組的限制性內切酶的酶切位點
Southern印跡技術原理和操作步驟
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
間接法的原理和操作步驟
間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體
分子蒸餾的操作步驟
操作流程：??1、 安裝進樣器（順時針旋緊進樣器）、一、二、三級接收瓶，打開 冷卻水循環按鈕；?2、 打開刮膜器轉子，調整到指定轉速（不得超過400 r/min）；?3、 在液氮達到要求液位（不得少于冷凝柱體積1/2）后打開真空泵；??4、 待壓力不再下降，調整真空泵微調閥（不得低于0.5 mbar
Northern雜交操作步驟和DNA探針的制備與標記（2）
(4) 將1 ~ 2 μl RNA 上樣緩沖液加到乙二醛化的RNA 樣品中，然后馬上把RNA樣品加到凝膠加樣孔中，留著兩邊最外面的兩個孔不要加樣。將RNA 相對分子質量標準參照物加到最外面的孔中。(5) 以5V/cm 的電壓進行電泳，直到溴酚藍遷移大約8 cm。(6) 將凝膠放在保鮮膜上，在紫外燈下
Northern雜交操作步驟和DNA探針的制備與標記（1）
一．原理Northern 雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計其豐度的實驗方法，可以從大量的RNA樣本同時獲得這些信息。其基本步驟包括：1. 完整mRNA的分離2. 根據RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RNA進行分離3. 將RNA 轉移到固相支持物上，在轉移的過程中，要保持RNA 在凝膠中的相
ISSR（intersimple－sequence－repeat）分子標記的實驗原理及操作
ISSR標記ISSR（inter-simple sequence repeat）標記是一種類似RAPD，但利用包含重復序列并在 3’或5’錨定的單寡聚核酸引物對基因組進行擴增的標記系統，即用SSR引物來擴增重復序列之間的區域。其原理具體是，ISSR標記根據生物廣泛存在 SSR的特點，利用在生
膠體金標記實驗的操作方法與步驟
膠體金標記實驗的實驗過程主要包含以下步驟：膠體金標記蛋白的制備及其與膠體金之間的用量比例的確定、膠體金和蛋白的結合、膠體金標記蛋白的純化與質量檢測等。1、蛋白質的處理：膠體金標記蛋白的制備膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的p
非標記抗體免疫電鏡的操作步驟
1．經典法?（1）將被檢病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀釋的特異性免疫?血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃過夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min離心90min。（4）吸去上清，將離心管口倒置于濾紙上，吸去殘留液體。（5）沉淀物中加少量H
膠體金標記實驗操作步驟
1、蛋白質的處理：膠體金標記蛋白的制備 膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質的等電點時，則會聚集而失去結合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強度、蛋白質的分子量等都影響膠體金與蛋白質的結合。 （
FITC熒光素標記抗體的操作步驟
當FITC在堿性溶液中與抗體蛋白反應時，主要是蛋白質上賴氨酸的r氨基與熒光素的硫碳胺鍵（thiocarbmide）結合，形成FITC-蛋白質結合物，即熒光抗體或熒光結合物。一個IgG分子中有86個賴氨酸殘基，一般zui多能結合15～20個，一個IgG分子可結合2～8個分子的FITC，其反應式如下：F
舉例介紹親和標記的原理和方法
親和標記指用對具有特異的親和性物質中導入化學反應基團的試劑，有選擇地修飾存在于活體高分子的對應結合部位的官能基。因根據親和標記的目的而設計的試劑，對相應的活體高分子具特異的親和性，故形成試劑與活體高分子的特異的復合體，結果在結合部位試劑之濃度特別高，因而結合部位的官能基得到良好的修飾。例如，對以芳香
SNP分子標記的原理及其分型方法的比較
美國學者Eric S. Lander于1996年正式提出單核苷酸多態性（SNP）為第三代分子標記以后，SNP已經廣泛應用于經濟性狀關聯分析、生物遺傳連鎖圖譜構建、人類致病基因篩選、致病風險診斷及預測、個體化藥物篩選等生物、醫學研究領域。在經濟作物育種領域，檢測SNP可實現對所需性狀的早期選擇。這
熔點儀的工作原理和操作步驟
工作原理 熔點儀是按照藥典規定的熔點檢測方法而設計的，該儀器利用電子技術實現溫度程控，初熔和終熔數字顯示。應用了線性校正的鉑電阻作檢測元件，并用電子線路實現了快速“起始溫度”設定及四檔可供選擇的線性的升溫速率。儀器采用藥典規定的毛細管作為樣品管，通過高倍率的放大鏡觀察毛細管內樣品的熔化
PCRDGGE實驗原理和操作步驟
【實驗目的】 1．了解PCR-DGGE技術的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm
PCRSSCP實驗原理和操作步驟
【實驗目的】1．了解PCR-SSCP技術的原理。2．了解并熟悉PCR-SSCP技術的步驟。 【實驗原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等創建的篩查突變的新技術。它是一種簡單、快速、經濟的點突變篩查手段。PCR-SSCP技術的基本原理是PCR擴增后的DNA片段經變性成單鏈DNA，
熔點儀的工作原理和操作步驟
工作原理? ? 熔點儀是按照藥典規定的熔點檢測方法而設計的，該儀器利用電子技術實現溫度程控，初熔和終熔數字顯示。應用了線性校正的鉑電阻作檢測元件，并用電子線路實現了快速“起始溫度”設定及四檔可供選擇的線性的升溫速率。儀器采用藥典規定的毛細管作為樣品管，通過高倍率的放大鏡觀察毛細管內樣品的熔化過程，清