相互作用蛋白鑒定實驗
實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為一種穩定蛋白質合成、可進入細胞核并與 LexA 操縱子位點結合、不激活基于 LexA 操縱子的報道基因的轉錄。LexA 融合的誘餌蛋白必須是不能激活其他報道基因轉錄的在 EGY 48 株（或者相關的 EGY 191）中表達 LexA 融合蛋白不能在缺失 Leu 的培養基上生長，并且在含有 X-gal 的培養基上生長 的克隆是白色的。這種典型的誘餌蛋白質粒被用于在「相互作用蛋白捕獲」 中篩選文庫中的相互作用蛋白。實驗材料 編碼目的蛋白的 DNA質粒（PEG202、pSH18-34、PSH17-4、pRFHM1 和 pJK10......閱讀全文
相互作用蛋白鑒定實驗
鑒定誘餌蛋白（半乳糖苷酶） 鑒定誘餌蛋白（LacZ 的活性分析） 相互作用蛋白捕獲 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達
相互作用蛋白鑒定實驗
實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為
相互作用蛋白鑒定實驗——相互作用蛋白捕獲
實驗方法原理實驗要經過兩次連續大量的酵母菌平板篩選過程。酵母菌含有 LexA 融合探針、報道基因和插入PJG4-5（見圖19.1.6）的 GAL 啟動子控制下的 cDNA 表達文庫。最近，已有可供用于這個系統的文庫。實驗材料攜帶適當質粒組合的酵母菌試劑、試劑盒完全（CM）缺失成分液體培養基含有如下指
相互作用蛋白鑒定實驗——鑒定誘餌蛋白（LacZ的活性分析）
實驗方法原理捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為一種穩定蛋
相互作用蛋白鑒定實驗——鑒定誘餌蛋白（半乳糖苷酶）
通過確定與之結合的其他蛋白質來理解某種特定蛋白質的功能，常常是十分有用的方法。這可以通過從文庫中選擇或篩選與靶蛋白相互作用的新蛋白來實現。現有一種特別有用的方法即雙雜交系統或相互作用阱， 用來測定新的相互作用蛋白，這種方法采用充當「試管」的酵母菌和一種報道系統的轉錄激活作用來識別結合蛋白。本方法也可
誘餌蛋白特性鑒定實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 CM培養基儀器、耗材 水浴鍋培養箱電轉儀實驗步驟 一、lacZ激活試驗?1. ?采用標準的亞克隆技術，將編碼目的蛋白質的DNA插入pEG202的多接頭中，構建一個符合讀框的融合蛋白。2. ?將下列組合的質粒，分別按“乙酸鋰轉化法”轉化酵母菌EGY48。（1）pBait+
誘餌蛋白特性鑒定實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
誘餌蛋白特性鑒定實驗
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒CM培養基儀器、耗材水浴鍋培養箱電轉儀實驗步驟一、lacZ激活試驗?1. ?采用標準的亞克隆技術，將編碼目的蛋白質的DNA插入pEG202的多接頭中，構建一個符合讀框的融合蛋白。2. ?將下列組合的質粒，分別按“乙酸鋰轉化法”轉化酵母菌EGY48。（1）pBait+pSH1
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串聯質譜對磷酸
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料 測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材 螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟 這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒二硫蘇糖醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?碘代乙酰
相互作用蛋白的捕獲實驗
實驗材料?酵母菌試劑、試劑盒?CM培養基乙酸鋰PEGTEDMSO甘油氨芐青霉素儀器、耗材?離心機分光光度計搖床培養箱實驗步驟?1.? 為了轉化文庫，將約20 ml 含pSH18-34和pBait 的酵母菌EGY48培養液接種到Glc/CM-Ura-His 省卻成分液體培養基中，于30℃培養過夜。2.
相互作用蛋白的捕獲實驗
相互作用蛋白的捕獲試驗要經過兩次連續大量的酵母菌平板篩選過程。酵母菌含有lexA 融合合探針，報道基因和插入pJG4-5的GAL啟動子控制下的cDNA表達文庫。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒CM培養基乙酸鋰PEGTEDMSO甘油氨芐青霉素儀器、耗材離心機分光光度計搖床培養箱實驗步驟1. ?為了轉化文庫，
相互作用蛋白的捕獲實驗
基本實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌 試劑、試劑盒
裸子植物鑒定實驗_松科鑒定
實驗材料蘇鐵帶球果新鮮材料、蘇鐵大抱了葉新鮮葉片（或臘葉標本）、銀杏臘葉標木（或新鮮葉片）銀杏種子縱切片油松新鮮材料（或臘葉標本）油松葉橫切片、側柏新鮮材料（或臘葉標本）試劑、試劑盒乙酸洋紅儀器、耗材顯微鏡鑷子解剖針載玻片蓋玻片滴管培養皿吸水紙實驗步驟（三）松科 Pinaeeae油松 ( 圖 2-2
蛋白的常用蛋白鑒定方法
傳統的蛋白鑒定方法，如免疫印跡法、內肽的化學測序、已知或未知蛋白comigration分析，或者在一個有機體中有意義的基因的過表達通常耗時、耗力，不適合高流通量的篩選。目前，所選用的技術包括對于蛋白鑒定的圖象分析、微量測序、進一步對肽片段進行鑒定的氨基酸組分分析和與質譜相關的技術。 “滿天星”式的2
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相互作用緩沖液PK 緩沖液還原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗滌緩沖液 1 洗滌緩沖液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP儀器、耗材 與待篩選蛋白結合的膜或濾膜Sephadex G-50 轉柱實驗步驟 材
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
細菌鑒定實驗
實驗方法原理 玻片凝集反應（slide agglutirlation）是將已知的抗體直接與未知的顆粒性抗原物質（如細菌，立克次體，鉤端螺旋體等）混合，在有適當電解質存在的條件下，如兩者對應便發生特異性結合而形成肉眼可見的凝集物，即為陽性：如兩者不對應便無凝集物出現，即為陰性。此法屬定性試驗，
Far－Western分析蛋白質相互作用實驗
分析蛋白質混合物 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 待分析的樣品 編碼目的蛋白的
Far－Western分析蛋白質相互作用實驗
實驗方法原理 實驗材料 待分析的樣品編碼目的蛋白的 cDNA（已經克隆到體外表達載體中）試劑、試劑盒 1 × SDS 上樣緩沖液麗春紅 S 染液封閉緩沖液 I封閉緩沖液 II體外轉錄 翻譯試劑盒PBS35S-甲硫氨酸探針純化緩沖液探針稀釋緩沖液儀器、耗材 微量過濾離心柱聚偏氟乙烯（PVDF）／硝化纖
Far－Western分析蛋白質相互作用實驗
使用 Far Western blot 分析蛋白質相互作用時，目的蛋白固定在一個固體支持膜上，然后用非抗體蛋白探測。 Far Western blot 能夠用于識別復雜的蛋白復合物中蛋白質的特異性相互作用。實驗材料待分析的樣品編碼目的蛋白的 cDNA（已經克隆到體外表達載體中）試劑、試劑盒1 × S
對基于微管的運動蛋白進行性質鑒定實驗
通過微管滑行來觀察基于微管的運動蛋白活性實驗材料微管試劑、試劑盒PME 緩沖液儀器、耗材培養皿實驗步驟1. 在一個培養皿里堆一些潮濕的濾紙片，放一塊蓋玻片到上面。加 50 μl 含運動蛋白的溶液到蓋玻片的表面并涂開。蓋上蓋子在室溫放 5~10 分鐘，使蛋白黏附在玻璃上。2. 轉移蓋玻片，用室溫的含
對基于微管的運動蛋白進行性質鑒定實驗
實驗材料 微管試劑、試劑盒 聚賴氨酸溶液儀器、耗材 蓋玻片實驗步驟 1. 準備該顯微檢測所需的蓋玻片：(1) 蓋玻片在 200 μg/ml 聚賴氨酸溶液中室溫過夜。(2) 玻片在盛有 15 ml 蒸餾水的培養皿中翻轉洗滌 4 次，每次 10 分鐘。(3) 洗過的蓋玻片風干并存放在無灰塵的容器中直到使
對基于微管的運動蛋白進行性質鑒定實驗
通過乳膠珠沿微管的移動來觀察基于微管的運動蛋白活性 通過微管滑行來觀察基于微管的運動蛋白活性 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 微管
對基于微管的運動蛋白進行性質鑒定實驗
通過乳膠珠沿微管的移動來觀察基于微管的運動蛋白活性通過微管滑行來觀察基于微管的運動蛋白活性實驗材料微管 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒聚賴氨酸溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
蛋白質提取分離純化鑒定的實驗方案
一.血清ǐ-球蛋白的初步提取1. 血細胞與血清分離：取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm離心20min .棄沉淀,留上清備用(沉淀為血細胞，上部為血清).2. 乳糜粒分離：4000rpm 10°C離心10分鐘,采用密度梯度離心梯度液配置：離心管下部3/4容積加血漿，上部1/4容積
蛋白質提取分離純化鑒定的實驗方案
一.血清ǐ-球蛋白的初步提取1. 血細胞與血清分離：取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm離心20min .棄沉淀,留上清備用(沉淀為血細胞，上部為血清).2. 乳糜粒分離：4000rpm 10°C離心10分鐘,采用密度梯度離心梯度液配置：離心管下部3/4容積加血漿，上部1/4容積
裸子植物鑒定實驗_銀杏科鑒定
實驗材料蘇鐵帶球果新鮮材料、蘇鐵大抱了葉新鮮葉片（或臘葉標本）、銀杏臘葉標木（或新鮮葉片）銀杏種子縱切片油松新鮮材料（或臘葉標本）油松葉橫切片、側柏新鮮材料（或臘葉標本）試劑、試劑盒乙酸洋紅儀器、耗材顯微鏡鑷子解剖針載玻片蓋玻片滴管培養皿吸水紙實驗步驟（二）銀杏科 Ginkgoaceae銀杏 ( 圖