應用非標記探針法進行基因分型（五）
用相似的方法分析外顯子11（表3；補充圖2；補充表3；http://jmd.amjpathol.org），且所有外顯子11的RET序列變化用擴增子高分辨率熔解分析進行檢測（沒有顯示數據）。外顯子11的主要實驗用一個在致病密碼子630和634上的野生型探針。檢測的外顯子11的8個序列變化均有一個等位基因熔解溫度低于野生型（補充表2a；http://jmd.amjpathol.org）。這些樣品通過主要探針的△Tm值選擇的第二次實驗的特定突變探針分為3個突變組。特定突變探針在密碼子630和634位置有相同的序列改變（表2）。在第二次實驗，密碼子630或634的突變用一個位置探針和一至三個特定突變探針進行基因分型（補充圖2，b-i；http://jmd.amjpathol.org）。雖然密碼子631（GAC→GAT）樣品在主要實驗中檢測，這個序列變化在第二次實驗中在致病密碼子之外，且由于與每個特定突變探針有3個錯配，其熔解溫度低于野生......閱讀全文
應用非標記探針法進行基因分型（五）
用相似的方法分析外顯子11（表3；補充圖2；補充表3；http://jmd.amjpathol.org），且所有外顯子11的RET序列變化用擴增子高分辨率熔解分析進行檢測（沒有顯示數據）。外顯子11的主要實驗用一個在致病密碼子630和634上的野生型探針。檢測的外顯子11的8個序列變化均有一個等位基
應用非標記探針法進行基因分型（六）
外顯子14：多重探針分析???????主要實驗的外顯子14， 兩個野生型的探針同時用于一個反應，用來檢測所有已報道的外顯子14的突變，同時消除密碼子836（p.S836S）多態性（圖4；a和b；表3；補充表5；http://jmd.amjpathol.org）。WT14A探針在65℃-76℃
應用非標記探針法進行基因分型（二）
材料和方法樣品??????此報道中用到的野生型RET基因的DNA基因組樣品或有RET序列變化的樣品在以前描述過。RET基因序列變化改變RET蛋白的功能引發MEN2綜合癥的是突變，然而RET序列改變不會引發MEN2綜合癥是多態。不能確定意義的稀有的或不會引起MEN2綜合癥的RET基因序列變化成為“序列
應用非標記探針法進行基因分型（一）
RET原癌基因單個堿基的突變可以引發多發性內分泌腺瘤2型。RET突變傳統的基因分型方法是外顯子測序。一種閉管操作的基因分型方法已經成熟，此方法用的是一種飽和DNA染料，非標記探針及高分辨率熔解擴增子分析。此方法需要兩個連續的聚合酶鏈式反應階段，主要的和第二次實驗。主要的實驗共用7個反應和8個非標記探
應用非標記探針法進行基因分型（四）
外顯子10和11：多重突變熱點MEN2A和FMTC的主要突變位于外顯子10（密碼子609、611、618和620）和11（密碼子630和634），且野生型半胱氨酸的密碼子DNA序列“TGC”發生單核苷酸改變。外顯子10和11報道的序列變化>40（表1）。RET10外顯子的主要實驗包括兩個單獨的實驗和
應用非標記探針法進行基因分型（三）
高分辨率熔解 在高分辨率熔解儀器HR-1（愛荷華科技，鹽湖城，猶他州）上進行分析，將LightCycle毛細管加入HR-1中，0.3℃/s加熱。主要的實驗中，RET外顯子的擴增及非標記探針熔解數據從60℃到95℃采集。主要實驗分析了每個外顯子的擴增子及探針數據，除了外顯子14。因為所有報道的外顯子1
應用非標記探針法進行基因分型（七）
一般來說，用特定突變探針產生1/3結果。首先，當突變序列與特定突變探針互補時，突變等位基因的熔解Tm要高于野生型（△Tm為-2℃至-5℃）。第二，當突變在相同位置但是與特定突變探針序列不互補時，突變等位基因被野生型等位基因相似的Tm值及穩定性所遮蔽（野生型等位基因Tm±0.5℃）。在這種情況下，沒有
Lightscanner－和Lightscanner32－非標記探針法基因分型
Lightscanner 和Lightscanner32 非標記探針法基因分型載脂蛋白（ApoE）多重實驗密碼子112（T>C）密碼子158（C>T）實驗背景????? 載脂蛋白（ApoE）是一種糖蛋白，包括299個氨基酸，在身體調節膽固醇水平上起主要作用。膽固醇水平過高是冠心病的主要因素，在美國，
用PCR進行基因分型
與許多一次做數百塊Southern blots的研究人員一樣，我第一次用PCR做基因分型（genotyping）時覺得見效很快，不再需要等幾天才能看到結果，不再需要DNA顯微圖像或者操作紫外線了。隨著技術的不斷進步，RCR使基因組學和轉錄組學發生了翻天覆地的變化，甚至隨著免疫PCR的普及開始進軍蛋白
HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探針法
PCR－SSO（ASO）探針法1）常規提取DNA參見RFLP法?2）PCR擴增參見PCR-RFLP法?3）斑點雜交1．將5～20μl擴增產物，加變性液100～200μl室溫處理5～15min。2．在尼龍濾膜（預先用2×SSC浸濕2min）上真空點樣，每孔以10×SSPE 200μl沖洗，抽干，80℃
非放射性地高辛標記DNA探針法
實驗概要掌握非放射性地高辛標記DNA探針法。??實驗原理以往人們是用放射性同位素來標記探針DNA。近年來，非同位素標記方法發展很快，已有取代同位素標記法的趨勢。地高辛配基隨機標記DNA探針法，是較為成功的一種非同位素標記方法（Saiki等，1985）。其原理是：用化學方法把類固醇類半抗原地高辛分子連
用PCR進行基因分型2
質譜法原則上，添加到引物末端的核苷能夠直接依據質量，利用通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectroscopy，MALDI-TOFMS）直接檢測出來，這是一種不需標
用PCR進行基因分型1
與許多一次做數百塊Southern blots的研究人員一樣，我第一次用PCR做基因分型（genotyping）時覺得見效很快，不再需要等幾天才能看到結果，不再需要DNA顯微圖像或者操作紫外線了。隨著技術的不斷進步，RCR使基因組學和轉錄組學發生了翻天覆地的變化，甚至隨著免疫PCR的普及開始進軍蛋白
小片段法進行基因分型（一）
摘要：????? 背景：用于基因分型的高分辨率熔解曲線技術既簡單又有效。在以熔解為基礎的方法中，探針法是基因分型的黃金標準，可以將等位基因與目標的匹配完全區分開。小片段基因分型法是代替探針的基因分型法。異源雙鏈核酸分子的存在使得檢測純合子變得容易，其熔解峰的形狀有明顯的改變。純合子G/C或A/T的基
小片段法進行基因分型（二）
結果：??????? 圖1顯示的是校正之前的完整的熔解峰顯示。 從低溫和高溫內標及擴增子熔解的中部區分熔解信號。圖1：派生熔解曲線顯示校準和擴增子的熔解峰。左邊和右邊的峰是校準內標的峰。94的熔解剖面圖，接近76℃，從獨立的PCR反應中生成。校準分子沒有對其，純合子的擴增峰沒有清楚的分開。中部最窄且
HPV分型基因檢測的應用前景
近年來 HPVDNA 檢測逐步取代原有的宮頸癌篩查手段，其篩查CIN2+ 病變的敏感度明顯高于細胞學檢查。[7]HPV 檢測檢出宮頸高級別病變的敏感性較單獨細胞學檢測更好，幾乎等同于聯合篩查。高危型HPV檢測作為宮頸癌初篩策略具有較好的成本效能，隨著價值醫學理念的深入，單獨 HPV 檢測作為初篩
基因分型定量檢測技術的應用介紹
【1】傳染病的快速診斷及監測：未來的傳染病爆發后的檢測主要依靠基因芯片的快速初篩及診斷，做到24 h內明確病因，為防疫工作者提供可靠的數據，是指導控制疫情的必要手段。【2】分子流行病學資料分析：對于一些病因機制不清、病原體相關資料缺乏的傳染病可以用基因芯片進行研究，為歷史上爆發的傳染病之間的聯系提供
用標記獲救法進行基因定位
標記獲救法這是一種結合物理圖譜制作和遺傳學分析的基因定位方法，它適用于病毒等基因組較小的生物。以大腸桿菌噬菌體ΦX174為例，把野生型噬菌體的雙鏈復制型DNA分子用限制性內切酶HindⅡ切為13個片段，把每種片段和突變型 amg的DNA單鏈在使DNA分子變性并復性的條件下混合保溫，然后用各個樣品分別
高通量基因分型檢測平臺及其應用案例
Agripheno?高通量基因分型檢測平臺包括高通量Oktopure DNA提取儀、Nexar?模塊化內聯液體處理與分析系統、Soellex?高通量PCR水浴熱循環系統和Araya?內聯熒光檢測系統。Oktopure DNA提取儀采用磁珠的方法提取DNA，通量達到800個樣本/3小時。同時，適用于多
深海“探寶”這樣進行
? ? ? ? ? ?科考隊員在回收單拖體瞬變電磁儀。中國大洋協會供圖 6月中下旬，西南印度洋晴空萬里，海風徐徐。隨著科考隊員將微塑料采樣器回收至“向陽紅10”船甲板，中國大洋49航次第四航段科考作業順利收官。在30多天的時間里，科考隊員24小時輪班開展作業，強大的海底資源勘查設備輪番上
關于HLA分型高分辨分型應用的介紹
1、地中海貧血治療 2、造血干細胞移植異基因造血干細胞移植是現能根治重型Β地貧的方法。如有HLA相配的造血干細胞供者，應作為治療重型Β地貧的首選方法。 3、急性白血病，骨髓移植。 4、對ANLL療效較好。 ①同基因骨髓移植，供者為同卵孿生子。 ②同種異基因骨髓移植，供者為患者的兄弟姐妹
STR基因分型應用于細胞鑒定的意義
新買到的細胞，實驗室傳了幾代的細胞，又或者儲存于超低溫冰箱幾年不用的細胞，被污染了么？ 鑒定正確么？用它做研究會影響實驗結果么？ 沒有經過相應的細胞鑒定，使用了被污染的細胞，經過大量的實驗，寫出一篇論文，但是結論被推翻，論文被召回，大量的時間、物力和人力被浪費，一切都要從頭再來。 背景介紹應用于
基于－PCR－的基因分型實驗——用末端標記的引物－PCR－擴增－SSLP
試劑、試劑盒正向和反向引物10 X T4 多聚核苷酸激酶緩沖液ATPT4 多聚核苷酸激酶模板DNA10 X PCR 擴增緩沖液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶輕礦物油2 X 甲酰胺載樣液儀器、耗材96孔微量板熱循環儀用舊的X光膠片或者 Whatman 3MM 的過濾紙實驗步驟展
PCR熒光標記選擇探針法還是染料法？
?? 特異性熒光標記——探針法：? ?是目前臨床最常用的方法，在加入一對引物的同時再加入一對探針，特異性好，這里列舉的是TaqMan水解探針：一段與靶基因特異性結合的序列，分別在5’端加入熒光報告基團，3’端加入熒光淬滅基團。其核心是利用taq酶的5’-3’外切酶活性切斷探針，使得使熒光報告基團和熒
標記獲救法進行基因定位的方法介紹
每一種轉導噬菌體有一定的大小，只能攜帶一定長度的供體細菌的 DNA。例如大腸桿菌噬菌體PI的頭部中只能包裝大約分子量為5.8×10的DNA,大腸桿菌的染色體DNA的分子量是2.5×10,所以PI所能包裝的 DNA至多相當于大腸桿菌的遺傳學圖上相距兩分鐘這樣一段DNA分子。如果兩個基因能同時被轉導，這
標記獲救法進行基因定位的方法介紹
這是一種結合物理圖譜制作和遺傳學分析的基因定位方法，它適用于病毒等基因組較小的生物。以大腸桿菌噬菌體ΦX174為例，把野生型噬菌體的雙鏈復制型DNA分子用限制性內切酶HindⅡ切為13個片段，把每種片段和突變型 amg的DNA單鏈在使DNA分子變性并復性的條件下混合保溫，然后用各個樣品分別轉化受體細
SNP分子標記的原理及其分型方法的比較
美國學者Eric S. Lander于1996年正式提出單核苷酸多態性（SNP）為第三代分子標記以后，SNP已經廣泛應用于經濟性狀關聯分析、生物遺傳連鎖圖譜構建、人類致病基因篩選、致病風險診斷及預測、個體化藥物篩選等生物、醫學研究領域。在經濟作物育種領域，檢測SNP可實現對所需性狀的早期選擇。這
HPV分型基因檢測的簡介
HPV分型基因檢測指的是檢測多種基因型HPV的同時可以對HPV陽性結果進行基因分型的檢測技術。其利用包括PCR-熒光探針法或其他分子生物學方法在內的核酸檢測技術，以特定高危型HPV核酸（包括DNA和RNA）序列為檢測目的，對人宮頸樣本(如人宮頸脫落上皮細胞或分泌物等)進行體外定性檢測的試劑，以確
HPV分型基因檢測的意義
近年來，人類乳頭狀瘤病毒（HPV）的發現及分型為宮頸癌篩查提供了一個全新途徑。1976 年，Zur Hausen H 首次提出人類乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發病密切相關。隨后大量流行病學資料及研究已明確顯示 HPV 持續感染是宮頸癌發病的首要條件。絕大多數宮頸癌樣本都可檢出HPV，HPV陰
HLA基因分型方法：RFLP法
RFLP法1）常規制備DNA鹽析法1．用淋巴細胞分離液從抗凝血中分離出白細胞。2．每3ml細胞懸液加10ml紅細胞裂解液溶解紅細胞兩次，再加2ml白細胞裂解液溶解白細胞。3．加50μl 10％?SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白質，37℃過夜或55℃?3h。4．加0.25體積飽和醋酸鈉溶液，劇烈搖動1