SMARTTM5RACEPCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5個(dC)殘基,退火后(dC)殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG)通用接頭引物配對后,轉換為以SMART序列為模板繼續延伸而連上通用接頭(figure 2 )。然后用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為上游引物,用一個基因特異引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作為下游引物,以SMART第一鏈cDNA為模板,進行PCR循環,把目的基因5‘末端的cDNA片段擴增出來。最終,從2個有相互重疊序列的3' / 5‘-RACE產物中獲得全長cDNA,或者通過分......閱讀全文
SMARTTM 5'-RACE PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5個(dC)殘基,退
SMARTTM 5'-RACE PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5 個(
SMARTTM 5-RACE PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30?MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5個(dC)殘基,
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cD
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
RACE PCR簡介
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
PCR的原理
PCR(聚合酶鏈式反應)技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成:①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合
PCR的原理
PCR(聚合酶鏈式反應)技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成:①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合