我國學者構建世界首個基因敲除體細胞克隆狗模型
近日，中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院、北京希諾谷生物科技有限公司與中國農業大學合作，將CRISPR/Cas9與體細胞核移植技術相結合，成功構建出世界首個基因敲除體細胞克隆狗模型。該研究成果以封面文章發表在Journal of Genetics and Genomics雜志上。基因敲除體細胞克隆狗模型 狗是人類最早馴化的動物之一，千百年來，狗作為人類的同伴，被用于看家護院、狩獵、導盲、警用及救援等工作。狗在營養代謝、生理解剖等方面與人類極其相似，且發現狗有200多種遺傳疾病與人類的遺傳疾病相似，因此狗也是研究人體生理和疾病發生機理的理想實驗動物，CRISPR/Cas9與體細胞核移植技術的結合，使得構建更多模擬人類復雜疾病的模型成為可能，這將為開發人類疾病新的治療手段和藥物提供新的實驗動物模型，同時也將加速培育出更多含優遺傳良性狀狗的新品種。 研究團隊選取ApoE基因用于構建心血管疾病模型，為動脈粥樣硬化研究提供更有效的......閱讀全文
我國學者構建世界首個基因敲除體細胞克隆狗模型
近日，中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院、北京希諾谷生物科技有限公司與中國農業大學合作，將CRISPR/Cas9與體細胞核移植技術相結合，成功構建出世界首個基因敲除體細胞克隆狗模型。該研究成果以封面文章發表在Journal of Genetics and Genomics雜志上。基因敲除體細胞克
湖北農科院用CRISPR制備基因敲除克隆豬
來自湖北省農科院畜牧獸醫研究所、河南科技大學和中科院水生生物研究所的研究人員，用CRISPR/Cas9系統和Cre/LoxP，敲除了豬初生細胞中肌生成抑制蛋白（MSTN）的一個等位基因，制備了無選擇標記的MSTN基因敲除克隆豬。相關研究結果發表在8月17日的《Scientific Reports
基因敲除技術
一．概述：基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA?同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較
基因敲除技術
一．概述：基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA 同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較
基因敲除簡介
基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較成功的有基因
基因靶向的基因敲除
實驗步驟構建重組基因載體絕大多數的基因敲除策略都是基于同源重組的機制，其基因載體包括載體骨架、靶基因同源序列和突變序列及選擇性標記基因等非同源序列，其中同源序列是影響同源重組效率的關鍵因素。用電穿孔顯微注射方法把重組DNA轉入受體細胞（一般是胚胎干細胞）核內。同源重組基因重組時以載體的同源序列取代染
廣州生物院利用CRISPR/Cas9技術建立基因敲除克隆豬
中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院研究員、吉林大學教授賴良學博士的研究團隊利用最新的CRISPR/Cas9技術成功地培育出兩種基因敲除克隆小型豬，即酪氨酸酶基因敲除豬和PARK2和PINK1雙基因敲除豬，建立了人類白化病和帕金森綜合征兩種豬模型，該研究成果于10月2日在線發表在Cellular
CRISPR－技術進行細胞－TP53－基因敲除
實驗原理 TP53 是重要的抑癌基因。在多種腫瘤中都能發現 TP53 基因突變及功能喪失。我們將針對 TP53 基因設計的靶點構建到 pCas9/gRNA1 載體，轉染 293T 細胞，構建了 TP53 基因敲除 293T 細胞系。 1、本實驗基因敲除原理：pCas9/gRNA1 載體表達
控制基因敲除法
【探針技術用于檢測由siRNA介導的基因調制】 為了研究基因功能，科學家們常常會有針對性地關斷某些特定的基因。 而要驗證這種基因沉默的有效性, 就需要運用適當的具特異性的檢測方法。理想的檢測方法不僅要測量準確, 而且還要能讓細胞保持完好無損。 ? 利用諸如RNA(核糖核酸)技
基因敲除技術簡介
基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較成功的有基因
基因敲除技術簡介
基因敲除是一種遺傳工程技術，是指通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。基因敲除針對某個序列已知但功能未知的序列，改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏蔽，并可進一步對生物體造成影響，進而推測出該基因的生物學功能。基因敲除技術克服了隨機整合的盲目性和偶然性，是一種理
基因敲除技術簡介
動物實驗和實驗動物都要求達到實驗室操作規范（good laboratory practice, GLP）和標準操作程序（standard operating procedure, SOP）這些規范和操作對實驗動物和實驗室條件，工作人員素質，技術水平和操作方法都要求標準化。所有藥物的安全評價試
什么是基因敲除？
基因敲除(gene knock-out)是利用細胞染色體DNA可與外源性DNA同源序列發生同源重組的性質，使特定靶基因失活，以研究該基因的功能.基因敲入(gene knock-in)是通過同源重組用一種基因替換另一種基因，以便在體內測定它們是否具有相同的功能，或將正常基因引入基因組中置換突變基因以達
基因敲除的定義
基因敲除(geneknockout),是指對一個結構已知但功能未知的基因,從分子水平上設計實驗,將該基因去除,或用其它順序相近基因取代,然后從整體觀察實驗動物,推測相應基因的功能。這與早期生理學研究中常用的切除部分-觀察整體-推測功能的三部曲思想相似。基因敲除可中止某一基因的表達外,還包括引入新基因
基因敲除的操作步驟
利用基因打靶技術產生轉基因動物的程序一般為：獲得干細胞基因敲除一般應用于鼠，而最常用的鼠的種系是129及其雜合體，因為這類小鼠具有自發突變形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的傾向，是基因敲除的理想實驗動物。而其他遺傳背景的胚胎干細胞系逐漸被發展應用，來自于C57BL/6×CBN/JNCrjF1小鼠的胚胎干細胞系成
條件基因敲除的定義
中文名稱條件基因敲除英文名稱conditional gene knockout定 義使靶基因在特定細胞類型或者特定發育階段完全喪失功能的實驗技術。應用學科遺傳學（一級學科），發育遺傳學（二級學科）
基因敲除的技術應用
基因敲除技術主要應用于動物模型的建立，而最成熟的實驗動物是小鼠，對于大型哺乳動物的基因敲除模型還處于探索階段。近年來，牛、羊、豬、猴等大型哺乳動物實現了基因敲除。但由于狗的生殖生理較為特殊，基因敲除狗的培育難度大為增加，狗基因組的定點修飾一直未獲成功。針對這一問題，研究團隊設計了一個自體移植的策略，
基因敲除技術概述（四）
[13]。2.3.2 RNAi基因敲除的優點及應用①.比用同源重組法更加簡便，周期大大縮短。②.對于哺乳動物，如對于一些敲除后小鼠在胚胎時就會死亡的基因，可以在體外培養的細胞中利用RNAi技術研究它的功能。③.由于RNAi能高效特異的阻斷基因的表達，它成為研究信號傳導通路的良好工具。④.RNAi還被
RNAi引起的基因敲除
RNAi引起的基因敲除：由于少量的雙鏈RNA就能阻斷基因的表達，并且這種效應可以傳遞到子代細胞中，所以RNAi的反應過程也可以用于基因敲除。
基因敲除的實驗步驟
構建重組基因載體絕大多數的基因敲除策略都是基于同源重組的機制，其基因載體包括載體骨架、靶基因同源序列和突變序列及選擇性標記基因等非同源序列，其中同源序列是影響同源重組效率的關鍵因素。用電穿孔顯微注射方法把重組DNA轉入受體細胞（一般是胚胎干細胞）核內。同源重組基因重組時以載體的同源序列取代染色體靶位
基因敲除技術概述（二）
2.1.2條件性基因敲除法條件性基因敲除法可定義為將某個基因的修飾限制于小鼠某些特定類型的細胞或發育的某一特定階段的一種特殊的基因敲除方法[2]。它實際上是在常規的基因敲除的基礎上，利用重組酶Cre介導的位點特異性重組技術，在對小鼠基因修飾的時空范圍上設置一個可調控的“按鈕”，從而使對小鼠基因組的修
基因敲除技術的分類
基因敲除分為完全基因敲除和條件型基因敲除（又稱不完全基因敲除）兩種。完全基因敲除是指通過同源重組法完全消除細胞或者動物個體中的靶基因活性，條件型基因敲除是指通過定位重組系統實現特定時間和空間的基因敲除。噬菌體的Cre/LoxP系統、Gin/Gix系統、酵母細胞的FLP/FRT系統和R/RS系統是現階
基因敲除常見方法
一、常規基因敲除鼠（Conventional Knockout）常規基因敲除是通過基因打靶，把需要敲除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區域用Neo Cassette?替換掉。這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中都不表達該基因產物。此類基因敲除鼠一般用于研究某個基因在對小鼠全身生理病理的影響，而且這個基
基因敲除技術概述（一）
1．概述：基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較成
基因敲除的技術路線
基因敲除的技術路線如下:(1)構建重組基因載體﹔(2)用電穿孔、顯微注射等方法把重組DNA轉入受體細胞核內﹔(3)用選擇培養基篩選已擊中的細胞﹔(4)將擊中細胞轉入胚胎使其生長成為轉基因動物,對轉基因動物進行形態觀察及分子生物學檢測。
基因敲除技術概述（三）
2.1.2.2 誘導性基因敲除法誘導性基因敲除也是以Cre/loxp 系統為基礎，但卻是利用控制Cre 表達的啟動子的活性或所表達的Cre 酶活性具有可誘導的特點，通過對誘導劑給予時間的控制或利用Cre 基因定位表達系統中載體的宿主細胞特異性和將該表達系統轉移到動物體內的過程在時間上的可控性
基因敲除的實驗步驟
實驗步驟構建重組基因載體絕大多數的基因敲除策略都是基于同源重組的機制，其基因載體包括載體骨架、靶基因同源序列和突變序列及選擇性標記基因等非同源序列，其中同源序列是影響同源重組效率的關鍵因素。用電穿孔顯微注射方法把重組DNA轉入受體細胞（一般是胚胎干細胞）核內。同源重組基因重組時以載體的同源序列取代染
基因克隆
外源DNA和質粒載體的連接反應?外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間?形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交
Nature方法：大型單基因敲除人類單倍體細胞庫
由奧地利科學院和維也納Haplogen的研究人員領導的一個研究小組，利用一種稱之為“基因捕獲”( gene trap)的技術構建出了一個人類單倍體細胞庫，該細胞庫中包括有3000多種細胞系，每個細胞系都具有一種不同的突變基因。這項研究工作發布在8月25日的《自然方法》(Nature Me
基因敲除真把整個基因敲掉嗎？
一般我們把基因分成兩類：編碼蛋白的基因不編碼蛋白的基因這兩類基因的敲除方式有著很大的區別編碼蛋白的基因這些基因的功能主要是通過編碼區中的三聯體密碼所編碼的蛋白來實現的。基因敲除的最終目的是讓這個基因的蛋白產物不能發揮功能，或者蛋白不能表達。整個編碼區統統刪掉所有的密碼都沒了，當然就不能翻譯出蛋白啦！